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高玲: 作品数：11 被引量：17H指数：3; 供职机构：中国科学院过程工程研究所更多>>; 发文基金：生化工程国家重点实验室开放基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>

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水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认被引量：5: 2008年; 目的探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构。方法比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法。用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定。结果PST色谱介质性能最好。在流速2.0mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%。测得该蛋白质的精确Mr为41473,与其理论Mr相符。肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%。结论确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确。; 高玲余蓉; 关键词：水蛭素瑞替普酶融合蛋白分离纯化反相高效液相色谱法

一种抗凝溶栓双功能融合蛋白的凝胶层析复性方法: 本发明属于生物制药领域，具体涉及一种抗凝溶栓双功能融合蛋白即水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白包涵体的凝胶层析复性方法。该方法特征在于：先将变性蛋白进行一定时间氧化复性，然后采用Superdex75进行层析复性。层析复性时先...; 余蓉高玲苏志国张贵峰梁兰陈净刘永东; 文献传递

液相色谱-串联质谱法研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构被引量：4: 2008年; 利用液质联用研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的相对分子质量;采用液质联用分别分析HV12p-rPA的胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)酶解产物。MALDI-TOF-MS测得HV12p-rPA的相对分子质量为41 472 Da,与理论值相符;HV12p-rPA的胰蛋白酶(trypsin)酶解产物进行液质联用分析结果表明该融合蛋白中含有瑞替普酶序列;HV12p-rPA的胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)酶解产物进行液质联用分析,结果表明融合蛋白中含有水蛭素12肽,并检测出融合蛋白中的链接肽(DEGGGSY),融合蛋白的N末端MASDF和C末端LDWIRDNMRP;采用液质联用进行肽图分析,识别出的多肽匹配度Xcorr均超过1.5,部分多肽的Xcorr超过3.0,表明本实验测定过程中多肽识别结果准确可靠;目标蛋白的氨基酸序列覆盖率超过85%。结果确定了HV12p-rPA融合蛋白的序列与理论值相符。; 余蓉张贵锋高玲苏志国吴梧桐; 关键词：相对分子质量氨基酸序列

大鼠RDS/peripherin基因的克隆及真核表达载体的构建: 盘膜边缘蛋白(peripherin)是一种糖基化的膜结构蛋白,与非糖基化的同类物杆体外节膜蛋白(rod outer segment membrane protein 1,rom-1)在光感受器细胞外节盘膜边缘形成多亚单...; 高玲; 关键词：基因聚合酶链反应真核表达载体基因转染; 文献传递

一种新型抗凝溶栓双功能融合蛋白的高效表达和复性: 本发明属于生物制药领域，具体涉及到一种新型抗凝溶栓双功能融合蛋白——水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白(HV12p－rPA)的高效表达和透析复性法。高效表达法通过优化表达HV12p－rPA蛋白的大肠杆菌的7个培养条件，证明摇...; 余蓉梁兰高玲李玲灵吴梧桐杨继虞; 文献传递

层析辅助体外复性含有多对二硫键的融合蛋白质: 2010年; 为建立一种基于阴离子交换介质辅助的含多对二硫键的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽．瑞替普酶融合蛋白质（HV12p—rPA）的复性方法，采用Q Sepharose XL作为层析复性介质，通过正交实验考察蛋白质上样量、流速、脲梯度、洗脱液中精氨酸浓度、脲浓度、pH、还原型及氧化型谷胱甘肽等因素对复性过程的影响，探索最佳层析复性条件。结果表明：脲梯度、上样量及精氨酸浓度是影响复性的3个主要因素。脲梯度是复性成功的关键，上样量增大时复性蛋白质比活降低，精氨酸辅助HV 12p—rPA复性的最佳浓度为1mol／L。创建了脲、pH双梯度下的阴离子交换层析辅助HV12p—rPA的复性方法，复性后蛋白质的溶栓比活达到46520IU／mg，抗凝比活达到9980ATU／mg，与稀释复性方法相比，该方法能使复性蛋白质的溶栓比活提高14～15倍，抗凝比活提高7～8倍。; 谢伟全张贵锋高玲刘永东余蓉苏志国; 关键词：复性二硫键

抗凝、溶栓双功能水蛭素12肽-瑞替普酶融合蛋白的模拟、构建与表达被引量：9: 2007年; 将水蛭素12肽通过柔性肽(Gly)3与r-PA连接,以期望获得既具有抗凝活性,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子。采用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构与其活性区可以正常发挥功能。构建并表达了兼有溶栓和抗凝活性的瑞替普酶(r-PA)与水蛭素12肽双功能融合基因。通过两轮加端PCR获得水蛭素12肽与r-PA通过柔性肽(Gly)3连接得到的融合基因,再克隆到pET-21a载体上,经测序正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,融合蛋白约占菌体总蛋白的12%,以包涵体形式存在,经过体外复性后,融合蛋白的纤溶比活达到8 400.5 IU/mg,抗凝比活达到930.2 ATU/mg,具有较高的溶栓抗凝双功能活性。该双功能融合蛋白有望成为治疗血栓疾病的新型药物。; 余蓉韦利军李灵玲高玲吴梧桐; 关键词：瑞替普酶溶栓抗凝

溶栓和抗凝双重功效融合蛋白、制备方法及其应用: 具有溶栓和抗凝双重功效的融合蛋白，以及编码该融合蛋白的DNA序列、含该DNA序列的载体、该融合蛋白的制备方法、该融合蛋白在制备具有溶栓和抗凝功效药物方面的应用和，由连续甘氨酸序列组成的肽段作为连接结构在制备溶栓和抗凝双重...; 吴梧桐余蓉韦利军李灵玲高玲; 文献传递

溶栓和抗凝双重功效融合蛋白、制备方法及其应用: 具有溶栓和抗凝双重功效的融合蛋白，以及编码该融合蛋白的DNA序列、含该DNA序列的载体、该融合蛋白的制备方法、该融合蛋白在制备具有溶栓和抗凝功效药物方面的应用和由连续甘氨酸序列组成的肽段作为连接结构在制备溶栓和抗凝双重功...; 吴梧桐余蓉韦利军李灵玲高玲; 文献传递