付凯飞
- 作品数：57 被引量：77H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全军“十五”指令性课题军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 一种抗HER2双特异性抗体及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种抗HER2双特异性抗体及其制备方法与应用。本发明公开的一种抗体，由两个相同的半分子组成，其中每个半分子由通过二硫键连接的一条轻链和一条重链组成，所述两个半分子的两条重链之间通过二硫键连接；所述重链的氨基酸...
- 周丽君王欲晓熊丽娟付凯飞
- 文献传递
- 抗CD147人源单链抗体的筛选及生物特性初步鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的利用噬菌体展示技术筛选特异性抗CD147人源单链抗体(human anti-CD147 sc Fvs)并进行生物特性鉴定。方法以真核表达的CD147蛋白为抗原,采用"酸洗脱法"对库进行4轮富集性筛选、以ELISA法对筛选克隆的结合活性进行测定,以竞争ELISA和Western blot实验对获得的噬菌体抗体和可溶性sc Fv的特异性进行鉴定,通过DNA测序核实特异性sc Fvs的人源性及其亚群,以硫氰酸盐洗脱法对获得的抗体进行相对亲和力分析。结果经过4轮的富集性筛选,共筛出4个与CD147特异性结合的阳性克隆,其中3个获得可溶性表达,竞争抑制及Western blot实验证实其能与CD147特异性结合。DNA序列分析证实3个阳性克隆具有不同的基因型,三者的轻链可变区分别属于V_λⅠ、V_κⅡ、V_λⅢ亚群,重链可变区分别属于V_HⅠ、V_HⅢ、V_HⅢ亚群。硫氰酸盐洗脱法测出13号、15号和168号3个human anti-CD147 sc Fvs的亲和力分别为0.20 mol/L、0.35 mol/L和0.6 mol/L。结论成功从大容量噬菌体抗体库中筛选到特异性human anti-CD147 sc Fvs,为进一步研究该抗体的功能及应用前景奠定了基础。
- 刘妍陈秀秀王欲晓丁立付凯飞周丽君
- 关键词：噬菌体展示技术CD147
- 中国海域分离的创伤弧菌的致病性及其对抗生素的敏感性研究被引量：22
- 2009年
- 目的:就中国海域分离的创伤弧菌对小鼠的毒力、伤口感染力和对抗生素的敏感性进行实验研究.方法:昆明小鼠腹腔注射创伤弧菌悬液,观察一般状态、白细胞计数和血培养.第5日脱颈处死后解剖取脏器,用甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜观察.在毒力实验中,昆明小鼠致伤后浸泡在含创伤弧菌的人工海水中45～60min,打捞后分笼于层流柜中饲养.于致伤浸泡后不同时间行白细胞计数及血培养,并观察一般状态和伤口炎性反应、定时取伤肢分泌物培养.将伤肢用甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,用光镜检查.用K-B法作创伤弧菌对各种抗生素药物敏感性实验.结果:小鼠注射创伤弧菌悬液后白细胞升高,死亡率为80%,小鼠的血、脾、肺、肝、肾、肠组织及腹腔培养物细菌培养均为阳性,病变部位以肺、肝及肾脏为重,病变性质主要为血液循环障碍,并由此引起不同程度的充血、出血及血停滞现象.海水浸泡伤创伤弧菌感染小鼠死亡率为20%;20%小鼠12h血培养阳性;6,12h及1～3d伤肢培养均为阳性,死亡小鼠及1d后活杀小鼠所有脏器培养均为阳性.感染小鼠的脏器可见到不同程度的炎症反应,以肺和肝脏较为明显,并有脓肿灶形成.结论:中国海域分离的创伤弧菌具有高度致病力,创伤弧菌除对氨苄西林、哌拉西林、氨曲南、磺胺类抗生素的敏感性较低外,对其它抗生素均有很好的抗菌活性.
- 马骢郭建巍郝秀红蒋学兵付凯飞马学斌刘敏王珍光王芳
- 关键词：中国海域弧菌创伤毒力抗菌药
- TGF-β_3在中子及γ线照射小鼠肠道损伤中的作用研究被引量：1
- 2005年
- 目的:比较研究小鼠经中子及γ线照射后肠组织中TGF-β3的表达及意义。方法:350只二级雄性BALB/c小鼠,经不同剂量的中子和γ线照射,于照后6、12h,1、2、3、4、5、7、10、14、21及28d分批活杀,采用免疫组织化学和图像分析等技术,定量研究TGF-β3在肠组织中的动态变化规律。结果:2.5Gy照后2d内,TGF-β3表达进行性减少,阳性部位见于绒毛上皮细胞和隐窝细胞浆内;3~7d明显增加,5d达高峰;7d后逐渐恢复至正常水平。4.0,5.5Gy中子及12Gyγ线照射后4d内,TGF-β3表达进行性减少;γ线5.5Gy照后6h,TGF-β3表达反应性增加;12h^1d减少,2~5d增多,3d达高峰;5d后逐渐恢复至正常水平。结论:中子和γ线照射后,肠内源性TGF-β3的表达具有不同的变化规律,参与了肠放射损伤及修复的病理过程。
- 彭瑞云高亚兵陈浩宇吴小红付凯飞王水明王德文胡文华马俊杰王晓民
- 关键词：中子Γ线小鼠TGF-Β3
- 基于RTB的新型免疫增强剂构建、表达及免疫效果评估被引量：2
- 2013年
- 目的利用自主知识产权抗体3E1,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位,通过构建含肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现含肽的绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,评价小鼠舌下口服含蓖麻毒素B链肽的绿色荧光蛋白后黏膜免疫应答的能力。方法用生物信息学技术,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位;分子克隆技术构建含不同肽的绿色荧光蛋白原核表达载体;镍金属离子鏊合柱纯化目的蛋白;间接ELISA测定小鼠舌下口服不同肽-GFP融合蛋白后各种抗体水平的变化。结果实现了含不同肽的GFP在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,获得了纯度大于90%的肽-GFP融合蛋白。免疫小鼠后,小鼠血清中均检测到了较高水平的IgG抗体,其中的P1肽-GFP融合蛋白免疫小鼠血清中检测到了较高水平的IgG2a和IgM抗体。免疫组血清中IgG2b、IgG3、IgA水平与对照组无明显差异。结论分别用4个小分子肽-GFP融合蛋白免疫小鼠后,小鼠血清中均检测到了较高水平的IgG抗体,其中的P1肽-GFP融合蛋白免疫小鼠的血清中检测到了较高水平的IgG2a和IgM抗体,激发了Th1型免疫应答。
- 郭建巍秦力维冯健男付凯飞王珍光
- 关键词：黏膜免疫小分子肽
- Beclin1影响乳腺癌细胞对紫杉醇敏感性的研究
- 【目的】Beclin1是细胞自噬的关键调控分子之一,近年来被证实与多种肿瘤细胞的化疗抵抗相关。紫杉醇是目前临床用于治疗乳腺癌的最常用的化疗药物之一。但是,Beclin1在紫杉醇介导的对乳腺癌细胞的杀伤中的作用和机制并不清...
- 吴成林刘剑飞刘妍王欲晓付凯飞于晓杰蒲倩陈秀秀周丽君
- 关键词：BECLIN1紫杉醇乳腺癌细胞凋亡
- 天然生物活性N-AHLs抗原的化学合成及其抗体生成初探
- 目的人工合成N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylated Homoserine Lactones, AHLs)全抗原并制备相应单克隆抗体,为N-AHLs免疫检测新方法的建立及海洋弧菌N-AHLs动态监测奠定基础。方法人工合...
- 付凯飞刘剑飞李军王欲晓周丽君
- 关键词：单克隆抗体
- 创伤弧菌溶细胞素原核表达载体的构建、表达、分离纯化及生物活性鉴定
- 创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种嗜盐革兰氏阴性海洋弧菌，感染海生动物后，可造成大批量死亡。人类主要通过误食被污染的海洋动物制品或直接经由创口感染创伤弧菌，可引发败血症及主要脏器炎症反应，严重者可导致多...
- 刘剑飞付凯飞王大鹏王欲晓吴成林周丽君
- 文献传递
- 人源性抗人FKBP52 IgG的表达和纯化
- 2016年
- 目的将噬菌体抗体库中筛选到的抗52-k Da FK506结合蛋白(FKBP52)人源单链抗体(sc Fv)转换为完整人IgG并在真核细胞中表达。方法噬菌体抗体库获得的5株抗人FKBP52-sc Fv,PCR扩增其轻重链可变区(V_H/V_κ),利用同源重组技术将5对V_H、V_κ拼接至分别包含有人κ链及IgG1恒定区的真核表达载体p CMV/R-L、p CMV/R-H上,转染HEK293F细胞进行完整抗体表达,ELISA鉴定抗体活性,蛋白A柱分离纯化活性最高的抗体,SDS-PAGE、Western blot法鉴定纯化后抗人FKBP52-IgG。结果 PCR及测序结果证实正确构建得到5对抗人FKBP52真核表达载体,转染HEK293F细胞后经ELISA鉴定均有完整抗体表达,对活性最高的5号克隆进行抗体分离纯化,经SDS-PAGE及Western blot验证获得高纯度的特异性人源抗FKBP52-IgG。结论成功将原核表达的抗人FKBP52-sc Fv转换为真核表达的完整人IgG。
- 丁立熊丽娟王欲晓吴成林付凯飞周丽君
- 关键词：真核表达
- 菌群感应AHLs分子对小鼠肠道菌群多样性影响的分析
- 2019年
- 目的探讨菌群感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactones,AHLs)对小鼠肠道微生物菌群构成的影响,为感染状态下肠道微生态的紊乱补充理论依据。方法 3-oxo-C_(10)-HSL分子经腹腔注射小鼠后,于24 h分别在小鼠十二指肠及空回肠部位用拭子涂抹法取样,并通过Illumina Hiseq 2500高通量测序平台对样品16S rDNA测序,并进行微生物菌群分类构成及多样性分析。结果在实验小鼠肠道内共检出22个细菌门,109个细菌属;对照组和3-oxo-C_(10)-HSL处理组小鼠肠道不同部位菌群均以厚壁菌门(>50%)和变形菌门(>20%)为主,但两组在属水平菌群构成有明显差异,对照组优势菌属依次为葡萄球菌、埃希氏-志贺菌、乳球菌、假单胞菌、肠球菌,3-oxo-C_(10)-HSL处理组优势菌属主要为肠球菌、埃希氏-志贺菌、葡萄球菌;多样性和丰度分析提示3-oxo-C_(10)-HSL处理组肠道菌群多样性均有提高,大肠埃希菌属等主要优势菌丰度显著上升,而且空回肠部位的菌落丰度最高。结论 AHLs对小鼠肠道菌群构成影响较小,而对菌群内部某些特定类群结构变化影响较明显。
- 付凯飞李军王欲晓吴成林钦可为周丽君
- 关键词：N-酰基高丝氨酸内酯微生物多样性
