代佳平
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市科委基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 丝状噬菌体随机呈现肽库的构建与鉴定被引量：4
- 1999年
- 目的：构建一个随机２０个氨基酸的丝状噬菌体肽库。方法：扩增随机合成ＤＮＡ模板，经限制性内切酶ＸｈｏⅠ＋ ＳｐｅⅠ酶切后克隆进噬菌粒ｐＴＭＢ２，构建随机丝状噬菌体肽库并检验其库容及随机性。结果：完成丝状噬菌体随机肽库的构建，其库容为２．１×１０８，其氨基酸分布于理论频数无显著差异。结论：丝状噬菌体随机肽库被成功构建。
- 万瑛代佳平王燕刘昕
- 关键词：丝状噬菌体随机肽库
- He-Ne激光重复照射抑制培养增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的实验研究被引量：7
- 2000年
- 目的 探讨He Ne激光重复照射对培养增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的抑制作用。方法 以不同功率密度 (10、5 0、10 0和 15 0mW /cm2 )He Ne激光照射培养增生性瘢痕成纤维细胞 30min ,1/d ,连续照射 3d ,在 3d重复照射后 2 4h用3H 脯氨酸掺入法和斑点杂交法分别检测成纤维细胞胶原合成和I型前胶原基因表达。结果 培养增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成、I型前胶原基因表达水平在 10、5 0mW /cm2 照射后无变化 ,10 0mW /cm2 重复照射后降低 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;以 15 0mW /cm2 重复照射 ,细胞胶原合成与I型前胶原基因表达水平亦显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且 15 0mW /cm2 照射后的I型前胶原基因表达水平低于 10 0mW /cm2 照射 (P <0 .0 5 )。结论 10 0mW /cm2 或 15 0mW /cm2 功率密度He Ne激光重复照射能抑制培养增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成 。
- 舒彬郝林林代佳平吴宗耀
- 关键词：HE-NE激光增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成
- 人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析被引量：4
- 2004年
- 目的 分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法 用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC19质粒 ;用体外结合实验筛选能与核基质蛋白结合的克隆并测序 ,生物信息学分析其序列的特征。结果 从人T细胞基因组中分离得到大量的MARs片段 ,构建成MARs库 ,初步任意挑选 5 8个克隆 ,体外结合实验证实其具有与核基质蛋白结合活性 ,对其中 1个克隆的序列分析表明 ,其序列AT含量较高 ,不仅含有AC 和ATAT基序 ,还包含有多个转录 复制起点、增强子序列、弯曲DNA和扭结DNA基序以及多个反向重复序列。结论 分离获得的DNA片段具有MAR的特性 ,同一DNA序列中存在不同的元件组合 ,其参与基因表达调控的功能应该是复杂。
- 毛琼国白云张波黄钢王燕代佳平
- 关键词：核基质核基质附着区基因组DNA
- 引物二聚体在目的基因克隆中的应用初探被引量：3
- 2001年
- 目的 根据引物二聚体形成原理 ,建立一种新的克隆目的基因的方法。方法 人工合成两条或两条以上 3′端互补配对的寡核苷酸链 ,寡核苷酸链、Taq酶和dNTP按一定比例混合 ,PCR扩增延伸 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。结果 PCR产物经电泳鉴定 ,可见一条清晰的特异条带。结论 此方法能合成 5 0 0bp以下的短片段目的基因。
- 徐祥刘昕梁华平代佳平毛琼国罗艳
- 关键词：基因克隆聚合酶链反应
- p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测被引量：5
- 2003年
- 目的 获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法 利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达 ,对酵母细胞无毒性作用 ,无自身激活活性。结论 NF κBp65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因 ,用于肽库筛选 。
- 徐祥梁华平刘昕代佳平刘琛罗艳王正国
- 关键词：P65DNA结合域克隆核因子ΚB酵母双杂交酵母表达
- 人TNFRI cDNA的克隆及酵母表达载体的构建
- 2004年
- 代佳平毛琼国王燕梁红刘昕
- 关键词：RT-PCR
- NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及其功能鉴定
- 本文将p65BD完整阅读框架部分亚克隆至pGBKT7DNA-BD载体,然后以GAL4DNA-BD/p65BD为靶蛋白,筛选16肽随机肽库,在1.28×107个转化子中筛选到5个阳性克隆,进行EMSA实验,结果表明其中一条...
- 徐祥梁华平王付龙 罗艳王正国刘昕代佳平
- 关键词：转录因子多肽拮抗作用
- 文献传递网络资源链接
- 一种稳定、易于操作的噬菌体随机肽库载体的构建被引量：9
- 1999年
- 目的：拟将噬菌粒ｐＣＯＭＢ３改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法：对常用噬菌体抗体库呈现载体ｐＣＯＭＢ３序列进行点矩阵作图分析（Ｄｏｔ－Ｐｌｏｔ分析），切除其中重复区，纠正其多代培养后自删除特性。原克隆位点６３ｂｐ的填充序列增加到１４３５ｂｐ以便于酶切鉴定和电泳回收。结果：构建了命名为ｐＴＭＢ２的噬菌粒载体。结论：ｐＴＭＢ２的噬菌粒载体更为稳定且易于操作。
- 万瑛代佳平王燕刘昕
- 关键词：噬菌体随机肽库
