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拟南芥WUSCHEL蛋白的原核表达、亲和纯化和多克隆抗体制备被引量：13: 2009年; 本研究构建了带有His标签的拟南芥(Arabidopsis thaliana)WUSCHEL基因原核表达载体pET-31b(+)-WUS-His(6),优化了大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的WUS融合蛋白,经尿素梯度透析复性溶解,免疫新西兰大白兔,成功制备了WUS蛋白多克隆抗体。通过琼脂糖免疫扩散检测确定了抗血清效价和特异性,并以斑点杂交和Western blotting检验其灵敏性。结果表明,成功构建的拟南芥WUS原核表达载体,在E.coli中以0.5mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)28°C诱导表达10h后,融合蛋白得到高水平表达,亲和纯化后目标蛋白纯度达96%以上,所制备的多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用来检测纳克级蛋白抗原。; 王增代茹张江巍陈尚武张文马会勤; 关键词：拟南芥 WUSCHEL 蛋白质抗体

大豆异黄酮代谢途径在大肠杆菌中的构建及表达被引量：6: 2007年; 自然界异黄酮合成途径主要存在于豆科植物中。以微生物为宿主研究异黄酮代谢,则需要将整个相关代谢途径的多酶体系组装到工程菌种,从而进行表达及代谢研究,这就需要用到多基因的转化和共表达技术。综合应用了多基因单载体和多基因多载体方法,将大豆异黄酮代谢途径中的五个关键酶基因导入到大肠杆菌中,对异黄酮代谢途径在大肠杆菌中的构建和表达进行了研究和探索,获得了含有五个外源基因的重组大肠杆菌;重组菌经IPTG诱导,以L-酪氨酸为底物进行发酵,发酵产物经过HPLC测定,结果表明和空白对照相比有新的代谢产物生成,初步断定为异黄酮类化合物。; 郝佳马会勤代茹陈尚武; 关键词：重组菌

葡萄愈伤组织RNA提取方法比较及部分基因的表达差异初步分析被引量：2: 2009年; 以欧亚种酿酒葡萄品种赤霞珠（Vitis viniferaL.cv.Cabernet Sauvignon）的胚性愈伤组织（EC）和非胚性愈伤组织（NEC）为材料,进行了总RNA不同提取方法的比较.结果表明葡萄EC和NEC的总RNA的最佳提取方法是RNAp lant试剂法.通过此方法提取的总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,且OD260/280 nm值都在1.8~2.0之间.以此RNA为模板,对actin,tubulin,CLV等基因进行了半定量RT-PCR对比,发现EC与NEC在不同基因表达上存在差异.以上结果说明,以RNAp lant试剂提取的RNA质量,可以满足cDNA合成和qRT-PCR等研究用途.这为深入研究葡萄花药愈伤组织胚性与非胚性细胞系的基因表达特点,以及葡萄体细胞胚发育过程中的基因时序表达奠定了基础.; 代茹冀敏舒小梅陈尚武张文马会勤; 关键词：愈伤组织总RNA提取 RT-PCR

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代茹