何庆华
- 作品数：157 被引量：261H指数：10
- 供职机构：南昌大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 一种清咽饮料及制备方法
- 一种清咽饮料及制备方法，由以下物质按质量份数比组成：含罗汉果总甜甙含量为15-35%的罗汉果提取物5-10份；桔梗总皂甙含量为4-7%的桔梗提取物1-2份；粒径分布在70-800nm范围的纳米豆粕40-100份；饮用水1...
- 吴志华何庆华陈红兵杨安树李欣
- 文献传递
- 一种可结合玉米赤霉烯酮的十二肽及其应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及可特异性结合玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)的十二肽及其应用，该多肽分子的氨基酸序列为LLNISRRQIKNL。本发明采用磁珠液相亲和淘选并结合ZEN抗体竞争性洗脱的方式，通过优...
- 何庆华许杨
- 文献传递
- 基于哺乳动物细胞系的重组乙酰胆碱酯酶表达载体构建研究被引量：1
- 2023年
- 目的 构建具有不同信号肽、载体骨架元件以及乙酰胆碱酯酶编码基因序列的真核表达载体,为基于哺乳动物细胞系表达重组乙酰胆碱酯酶提供前期研究基础。方法 通过NCBI数据库查询苍蝇头部、电鳗鱼电器官来源的乙酰胆碱酯酶基因序列(mdAChE和eleelAChE),经密码子优化后,选择Humaninsulin、小鼠重链、Human CD33 3种信号肽序列,将其与合成的上述目的基因连接后分别与pCMV3、pcDNA3.1(+)、pcDNA3.4 3种载体骨架元件进行组合,构建重组乙酰胆碱酯酶的表达载体,随后分别在CHO-S、Expi293F细胞系进行瞬时转染表达,产物采用镍柱亲和纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)与蛋白免疫印迹(Western blot)分析鉴定。结果 经菌液聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)及DNA测序鉴定,成功构建了4种重组mdAChE酶的表达载体以及3种重组eleelAChE酶的表达载体。SDS-PAGE、Western blot的结果表明,基于pcDNA3.1(+)和pcDNA3.4载体骨架元件的重组表达载体可实现重组mdAChE和eleelAChE酶的可溶性表达;以p CMV3为载体骨架元件的表达载体,仅在以Human CD33为信号肽时,能在CHO-S细胞系中实现重组mdAChE酶的可溶性表达,其余情况下均未见有效表达。结论 实现了昆虫、鱼类来源的重组乙酰胆碱酯酶在哺乳动物细胞系的可溶性表达,发现载体骨架元件、信号肽类型对其重组表达具有重要影响, CHO-S以及Expi293F细胞均适合重组乙酰胆碱酯酶的表达,后续还需对影响其酶活、农药敏感性的关键限制性因素开展深入研究。
- 向苗吴箫王何瑶盛玲张珍何庆华
- 关键词：乙酰胆碱酯酶农药残留检测哺乳动物细胞真核表达
- 基于噬菌体展示纳米抗体的绿色免疫PCR检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇被引量：4
- 2019年
- 目的:在获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)抗独特型纳米抗体的前期基础上,将纳米抗体作为酶标抗原的替代物,应用于荧光定量免疫聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系,实现DON的高灵敏、绿色免疫分析。方法:将特异性结合DON抗体的噬菌体展示纳米抗体(P-28)作为竞争抗原,以编码P-28纳米抗体的DNA为靶标,设计特异性PCR扩增引物,优化荧光定量免疫PCR退火温度、抗DON抗体浓度、P-28投入量等参数,建立基于间接竞争模式的荧光定量免疫PCR检测DON的方法。结果:本研究建立的荧光定量免疫PCR方法线性检测范围为0.1～1 000 ng/mL,IC50值为(3.96±2.21)ng/mL,最低检出限为0.048 ng/mL,并与其他真菌毒素无交叉反应。结论:该方法直接使用噬菌体展示纳米抗体作为竞争抗原的替代物,应用于免疫PCR体系,避免了使用传统的化学合成酶标抗原所带来的环境污染、操作毒性等缺陷,并具有良好的特异性及灵敏度。
- 江东健罗秀儿何庆华
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫吸附测定免疫PCR
- 基于PCR-DGGE技术分析不同深度土壤层细菌的群落结构被引量：1
- 2013年
- 为了研究不同深度土壤中微生物的多样性以及优势菌群,采集来自于不同深度的土壤样品,利用SDS苯酚/氯仿/异戊醇提取土壤中总DNA。扩增16SrDNA的V3可变区,变性梯度凝胶电泳进行分析。结果表明:土壤层自下向上各层香农指数分别为1.56、1.59、1.54、1.57、1.57、1.57、1.59、1.54、1.59、1.59、1.59。不同深度土壤层优势菌群数量和种类经测序分析并将结果在NCBI数据库比对,主要的优势菌属为Thermoanaerobacterales、Thermoanaerobacteraceae、Cyanobacteria、Firmicutes、Proteobacteria、Gammaproteobacteria、Oscillatoriophycideae、Clostridia、Deltaproteobacteria、Desulfobacterales。
- 陈静许杨何庆华郭英荣
- 关键词：聚合酶链式反应变性梯度凝胶电泳土壤微生物优势菌群
- 一种基于多肽的玉米赤霉烯酮抗体模拟物及其应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种可作为玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)抗体模拟物的十二肽及其应用，该多肽分子的氨基酸序列为SSILMKLRPLKH。本发明采用磁珠液相亲和淘选并结合ZEN抗体竞争性洗脱的方式...
- 何庆华许杨
- 文献传递
- 新型冠状病毒核衣壳蛋白抗原的重组表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2021年
- 目的制备新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白重组抗原及其单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。方法根据公布的新冠病毒全基因组序列,构建其核衣壳蛋白的表达载体pET-28a-N,并转化至EscherichiacoliBL21(DE3)进行原核表达,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及Western blot鉴定纯化后的核衣壳蛋白重组抗原的特异性,并免疫Balb/c系小鼠,基于杂交瘤融合技术筛选获得可持续分泌新冠病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的细胞株,并基于ELISA及生物膜层干涉(biofilm layer interference,BLI)技术鉴定单克隆抗体的特异性和亲和力。结果基于大肠杆菌原核表达获得新冠病毒核衣壳蛋白的重组抗原,其纯度可达90%,筛选获得7株可分泌特异性结合新冠病毒核衣壳蛋白的杂交瘤细胞株,经Western blot、ELISA及分子相互作用分析等方法证实所获得的单克隆抗体与核衣壳蛋白具有优良的结合特异性和结合活性,其中的7E11、7E8单克隆抗体与核衣壳蛋白抗原的亲和力常数分别为1.69×10^(-9)、2.031×10^(-9)mol/L,可作为抗体元件应用于新冠病毒的快速免疫分析领域。结论本研究获得高特异性的SARS-CoV-2核衣壳蛋白重组抗原及其单克隆抗体。
- 马珍珍李蓉芳向苗阿月何庆华
- 关键词：新型冠状病毒核衣壳蛋白原核表达单克隆抗体
- 针对河流弧菌的单域重链抗体Nb73
- 本发明提供了一种针对河流弧菌的单域重链抗体和多肽，其具有所示的氨基酸序列的蛋白质或多肽，可用于免疫检测、抗原富集纯化等领域。本发明所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质(亲和性、特异...
- 李燕萍涂追许杨何庆华
- 文献传递
- 以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究被引量：25
- 2005年
- 本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%～116%,变异系数为9.4%～19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6～2.56μg/kg之间。
- 刘仁荣余宙何庆华许杨
- 关键词：赭曲霉毒素A人工抗原单克隆抗体
- 模拟赭曲霉毒素A的抗原模拟表位及其应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及赭曲霉毒素A的抗原模拟表位，其氨基酸序列为DGFQLHTPFSAK。本发明OTA抗原模拟表位可以替换价格昂贵且毒性强的OTA标准品，并作为竞争抗原或固相包被抗原应用于OTA的免疫学检测，该抗原...
- 何庆华许杨
