刘丽琦
- 作品数：17 被引量：42H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项甘肃省卫生行业科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 2015年甘肃省外环境禽流感病毒监测预警分析被引量：2
- 2017年
- 目的 了解甘肃省外环境中禽流感病毒H5、H7、H9亚型的分布状况,科学指导全省禽流感防控工作.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应法（Real-time fluorescence quantitativePolymerase Chain Reaction,real-time PCR）对2015年全省14个市州采集的标本2 015份进行禽流感病毒核酸检测.结果 FluA、H5、H7、H9的检出率依次为：19.90％、0.05％、0和19.65％.FluA检出率最高的环境标本为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本（31.09％）,最低的为粪便标本（13.85％）.FluA检出率在12月份最高（28.18％）,6、7月份最低（8.59％和8.66％）.定西市和陇南市禽流感病毒核酸FluA和H9的检出率显著高于其他市州（χ^2=4.523 - 88.059,P=0.000-0.043〈0.05）.结论 2015年甘肃省涉禽外环境中存在的禽流感病毒污染主要为H9亚型,未检出H7N9,应加强监测,做好禽流感预警.
- 李保娣李红育张慧刘丽琦李梓于德山何健
- 关键词：禽流感病毒聚合酶链反应
- 流感H10亚型重配病毒在不同细胞生长能力的比较
- 2016年
- 目的评估两株流感H10亚型重配病毒在不同细胞内的生长特性，筛选可用于疫苗生产的细胞。方法基于A／Jiangxi-donghu／346／2013（H10N8）病毒的表面基因，利用反向遗传技术构建以高产PR8病毒为骨架的RG—H10N8（6＋2）和RG—H10N1（7＋1）两种重配病毒，在SPF鸡胚增殖病毒后．经序列测定确认，以质粒拯救RG-PR8病毒为对照，比较病毒在MDCK和Vero细胞上的生长敏感性；以相同MOI感染MDCK细胞后，比较病毒的生长特性。结果两种流感H10重配病毒和RG—PR8病毒在MDCK细胞上均能检测到病毒滴度，但是在Vero细胞上，RG—H10N8检测不到病毒滴度，RG-H10N1和RG—PR8可以检测到病毒滴度；用相同的MOI感染MDCK细胞后，RG—PR8生长能力强于两种重配病毒，两种重配病毒间差异不大。结论两种流感H10重配病毒在MDCK细胞上生长能力较好，MDCK较Vero细胞对H10重配病毒更敏感，来源不同的NA会影响病毒在Vero细胞上的生长敏感性。
- 刘丽琦周剑芳鲁健李梓曾晓旭赵翔王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒
- 新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立被引量：2
- 2011年
- 建立新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型,为研究致病性、宿主适应性以及疫苗保护性提供动物模型,并寻找病毒在适应宿主过程中影响毒力和适应性的关键位点。将新甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1在小鼠中连续传15代,各代次毒株均在MDCK细胞上增殖后进行测序,根据序列分析结果选择6个传代毒株感染小鼠,连续监测14 d体重和死亡情况;并对第14代和15代病毒在噬斑实验纯化后克隆和测序分析。原代病毒不致死BABL/C小鼠,经动物体内连续传代适应宿主动物后,其毒力增强,具体表现为所选的6个传代毒株中第7、11、15代毒株可以100%致死试验小鼠;分析这6个传代毒株的全基因组表明这些毒株的部分氨基酸位点发生突变。新甲型H1N1流感病毒经小鼠体内连续传代后,建立了小鼠致死模型,病毒毒力增强可能与某些氨基酸位点的改变有关。
- 朱云刘丽琦周剑芳朱闻斐秦堃于在江王大燕赵翔李希妍蓝雨舒跃龙
- 关键词：全基因组分析
- 用于荧光定量检测流感病毒RNA质控品的制备及质控图的绘制被引量：1
- 2014年
- 目的 应用自制流感病毒RNA室内质控品,绘制Levey-Jennings质量控制图.方法 选取近期的流感病毒流行代表株,提取RNA后10倍系列稀释（10-1 ～ 10-8）,取不同稀释度的RNA做RT-PCR荧光定量检测,每个稀释度平行做三孔,根据检测的平均Ct值选取高Ct值和低Ct值对应稀释度的RNA,连续检测20次,计算均值（x）和标准差（s）,应用Excel软件绘制Levey-Jennings质控图.结果 用Excel绘制出三种亚型流感病毒的Levey-Jennings质控图,三种亚型RNA质控品均在警戒线内.结论 三种亚型RNA质控品稳定性较好,制备简单,质控图绘制方便,适用于PCR检测实验室对流感病毒的室内质控.
- 刘丽琦赵翔温乐英郭俊峰隗合江王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型
- 重组人干扰素α-2b喷雾剂在人群中对风疹、麻疹病毒减毒活疫苗鼻腔接种后干预免疫效果的初步研究被引量：6
- 2005年
- 目的初步观察重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)鼻腔喷雾剂对风疹、麻疹减毒活疫苗鼻腔接种后免疫效果的干预作用。方法选择合适人群进行对比试验,一组为干扰素(IFN)试验组,一组为对照组。IFN试验组提前2天使用rhIFNα2b喷雾剂,然后IFN试验组和对照组分别使用风疹、麻疹减毒活疫苗进行鼻腔接种。在疫苗接种前以及接种后第21和28天分别采集试验对象血清测定其对应的IgG特异性抗体,以抗体滴度的差异观察IFNα2b对病毒感染的干预效果。结果麻疹试验组和对照组的抗体差异分别为1.26(21d)和2.96(28d),差异有统计学意义;风疹试验组和对照组的抗体差异为0.95(21d)和0.37(28d),差异不明显。结论⑴单价麻疹和风疹疫苗鼻腔喷雾接种可以加强基础免疫;⑵rhIFNα2b鼻腔喷雾剂对风疹和麻疹减毒活疫苗鼻腔接种的免疫效果有一定的干预作用。
- 赵静朱凤才舒跃龙周蕊刘丽琦张丽兰史智扬唐震林里卓喻志爱张丽萍张滨侯云德
- 关键词：干扰素Α麻疹病毒重组人干扰素Α-2B喷雾剂鼻腔喷雾剂风疹疫苗免疫效果接种后
- H9N2禽流感病毒反向遗传系统的构建和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的建立H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统，为人禽流感疫苗研制以及传播和致病机制等方面的研究提供技术平台。方法使用RT-PCR方法获得禽流感H9N2亚型病毒A，Guangzhou／333／99（H9N2）的8条全长基因节段，然后克隆到双表达载体pCI-pol I中，获得H9N2禽流感病毒的8个基因节段的8质粒系统。将构建好的8质粒共转染293T细胞后，收获上清接种鸡胚，然后对鸡胚尿囊液进行鉴定；对拯救的病毒进行鉴定。结果8质粒系统转染293T细胞后可以成功拯救出H9N2禽流感病毒，血凝效价可达到2^9／50μl，生长特性与野生型病毒类似。结论成功建立了H9N2禽流感病毒反向遗传系统。
- 刘丽琦董婕薄洪温乐英辛丽张烨李梓董丽波王敏郭元吉舒跃龙
- 关键词：禽流感遗传学技术
- 小鼠感染流感病毒后可抵抗致死性流感病毒攻击的研究被引量：1
- 2012年
- 目的BALB／c小鼠初次感染流感病毒（A／California／7／2009（H1N1）（pCA07）和A／Guangzhou／333／99（H9N2）（GZ333））后，用流感病毒鼠肺适应株A／PR／8／34（HlNl）（PR8）10倍致死剂量攻击，观察攻毒后小鼠的反应。方法BALB／c小鼠150只，分成3组，空白对照组PBS滴鼻，实验组分别感染甲型H1Nl流感病毒pCA07和禽源H9N2病毒GZ333；感染56d后用10倍致死剂量的鼠肺适应株流感病毒PR8攻击两个实验组和对照组小鼠，比较PR8病毒攻击后，病毒载量和抗体水平，以及对小鼠存活率的影响。结果感染过pCA07和GZ333的小鼠在致死病毒PR8攻击后全部存活，并分别在病毒攻击6d和9d后小鼠肺组织中检测不到攻击病毒。对初次感染病毒的抗体水平在病毒PR8攻击后迅速升高，在保持初次感染病毒抗体的同时能够产生针对PR8病毒的抗体。结论不同亚型流感病毒感染小鼠后可以提供交叉保护。
- 刘丽琦李梓朱云舒跃龙
- 关键词：流感流感病毒A型
- H9N2禽流感病毒致病性的初步研究及反向遗传系统的构建
- 流感病毒属于正粘病毒科,是一种分节段的负链RNA病毒,具有传染性强,容易发生变异的特点,流感病毒可以感染不同的宿主,一般情况下,流感病毒具有较为严格的种属特异性,不会跨种属传播,但某些禽流感病毒也会感染人,目前已知可以感...
- 刘丽琦
- 关键词：禽流感病毒病毒载量反向遗传系统拯救
- 文献传递
- 流感病毒H10亚型重配病毒在不同细胞上生长能力的比较
- 背景：2013 年我国首次发现人感染H10N8 禽流感病毒，该病毒已造成3 例人感染病例，其中2 例死亡.构建H10N8 疫苗是疫情防控的重要技术储备.目前WHO 主要利用反向遗传技术构建的重配病毒作为流感大流行相关禽流...
- 刘丽琦周剑芳鲁健李梓曾晓旭王大燕舒跃龙
- H5N1禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因在杆状病毒中的共表达被引量：2
- 2014年
- 目的构建共表达H5N1禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白的杆状病毒表达系统。方法利用PCR方法分别扩增A/Hubei/1/2010(H5N1)病毒的HA和NA基因,克隆至经改造带有对虾白斑综合病毒(WSSV)早期启动子iel的mpFastBac Dual载体,构建mpFast Bac-HA-NA表达质粒,转化DH10Bac感受态细胞,用获得的Bacmid-HA-NA穿梭质粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒Bac-HA-NA;提取重组杆状病毒Bac-HA-NA的DNA并使用PCR方法检测;利用Western blot检测HA和NA表达,并分别检测重组杆状病毒Bac-HA-NA红细胞凝集能力和神经氨酸酶活性。结果经PCR鉴定,构建的质粒Bacmid-HA-NA正确;Western blot检测表明Bacmid-HANA能在sf9细胞中有效表达HA和NA蛋白,生物活性检测表明Bac-HA-NA能引起红细胞凝集并具有神经氨酸酶活性。结论获得了能同时表达禽流感病毒HA和NA的重组杆状病毒Bac-HA-NA,为进一步研究流感疫苗奠定了基础。
- 刘丽琦余慧燕于在江舒跃龙
- 关键词：禽流感病毒血凝素神经氨酸酶杆状病毒表达系统共表达
