刘君
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
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- 重组人乳头瘤病毒58型L1蛋白在Sf9细胞中的表达条件优化
- 2010年
- 目的 采用昆虫细胞-杆状病毒表达系统扩增人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）58型L1蛋白基因,确定L1蛋白表达的最佳条件.方法 取处于埘数生长期的S19细胞以不同的感染复数（MOI）值扩增病毒,用噬斑试验检测病毒滴度,确定扩增重组病毒的最适条件 用间接免疫荧光法判断目的蛋白表达情况 通过蛋白印迹法测定不同的表达时间和MOI值条件下目的蛋白表达量,确定目的蛋白的最佳表达条件.结果 处于对数生长期的细胞以MOI值为0.5表达48 h条件下扩增含HPV58 LI基因的重组杆状病毒,滴度最高,可达5×108pfu/ml 以MOI值为5.0表达72 h获得最佳的目的蛋白表达量.结论 确定了扩增病毒和表达相应目的蛋白的最佳条件.
- 于世荣孙丽媛刘君丁军颖李军张夕燕张振龙
- 关键词：人乳头瘤病毒基因表达重组蛋白质类
- 地高辛标记探针检测重组人干扰素β_(1b)中DNA残留量被引量：5
- 2007年
- 为检测注射用重组人干扰素β1b半成品中外源性DNA残留量,以重组人干扰素β1b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,并以此探针进行点杂交。结果证明,该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素β1b制备过程中的质量监控及半成品的检定。
- 刘君张振龙
- 关键词：地高辛探针
- 重组人干扰素β1b治疗复发缓解型多发性硬化症的安全性及临床疗效被引量：2
- 2009年
- 目的观察重组人干扰素β1b(rhIFNβ1b)治疗复发缓解型多发性硬化症(RRMS)的安全性及临床疗效。方法选择20名健康志愿者,分为1.5、3、6和9MIU4个剂量组,每天按剂量皮下注射1次rhIFNβ1b,连续注射8d,观察药物的安全性、耐受性和药代动力学。选择101例RRMS患者,随机分为观察组(52例)和对照组(49例),每周3次分别注射6MIU的rhIFNβ1b和25mg人血白蛋白,用药1年后,2组均注射6MIU的rhIFNβ1b,每周3次,用药1年。定期随访并进行各项指标及核磁共振成像(MRI)检查,观察药物的临床疗效,同时进一步观察安全性。结果安全性观察显示,rhIFNβ1b在9MIU剂量范围内耐受性良好。观察组和对照组分别注射rhIFNβ1b后,可显著减少RRMS患者头部与脊髓中病灶数量或缩小病灶体积,并显著降低复发率,且随着用药时间的延长,效果更加明显。结论rhIFNβ1b安全性和耐受性良好,临床影象学评价疗效显著。
- 杨云凯韩凝李军孙成金刘君张振龙陈彪董小曼
- 关键词：多发性硬化症安全性疗效
- 重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白在昆虫细胞sf9中的表达条件优化研究
- 2009年
- 目的确定利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白（HPV11 L1）的最适表达条件。方法通过间接免疫荧光法鉴定目的蛋白表达情况；用蛋白印迹法（Western blot）确定在不同感染复数（MOI）、不同表达时间条件下目的蛋白的最适表达条件。结果当sf9细胞密度为2．0×10^6／ml时，以MOI值为2．0的重组杆状病毒接种，悬浮表达96h收获为最适表达条件。结论确定了目的蛋白的最适表达条件，为进一步大量表达及纯化提供参考。
- 刘君张夕燕孙丽媛于世荣丁军颖许雪梅张振龙
- 关键词：荧光免疫测定L1蛋白昆虫细胞
- 强效佐剂研究进展被引量：1
- 2009年
- 许多佐剂具有炎症特性，缺乏特异性，并且具有毒性，因而其应用受到了限制。近年来，随着免疫学的发展，出现了大量潜在的新型佐剂，它们能以更加可控和特异的方式调节免疫应答，这将对现行及今后的疫苗策略产生重要影响。此文对于能靶向细胞、受体或信号通路等特定免疫组分的候选佐剂做一综述。
- 刘君
- 关键词：佐剂免疫细胞因子类受体免疫
- 重组人乳头瘤病毒16型L1 VLP的初步纯化、鉴定及免疫效果的初步研究
- 2010年
- 目的 对昆虫细胞-杆状病毒系统表达的人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16型L1蛋白病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）进行初步纯化研究,并在小鼠中检测纯化VLP的免疫原性.方法 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化方法纯化HPV16 LI VLP.对纯化得到的VLP分别进行蛋白印迹法、十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及电镜鉴定.然后用VLP免疫6周龄BALB/c小鼠.将小鼠随机分成6组（3个剂量组、2个佐剂组和1个对照组）,间隔2周免疫3次,3次剂量相同.取血分离血清,采用间接ELISA法检测抗HPV16 L1 VLP抗体滴度.结果 经蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化后,用SDS-PAGE鉴定纯化的HPV16 LI VLP,纯度达到90%.电镜观察可见完整的VLP颗粒.间接EUSA检测结果显示,剂量组及佐剂组小鼠血清中均可检测到特异性抗HPV16 L1 VLP抗体,且抗体滴度随针次和剂量的增加而增高.结论 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化法得到的HPV16 L1 VLP可用于免疫学初步研究.通过昆虫细胞表达产生的HPV16 LI VLP 具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强的体液免疫应答.
- 孙丽媛张婷于世荣陈祥鹏刘君李莉莉张夕燕张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白病毒样颗粒
- 含编码人乳头瘤病毒18型L1蛋白基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的条件优化被引量：1
- 2009年
- 目的确定以昆虫细胞sf9F增含编码人乳头瘤病毒（human papillomavims，HPV）18型L1蛋白（HPV18L1）基因的杆状病毒以及相应蛋白表达的最佳条件。方法以对数生长期的sf9细胞在不同感染复数（M01）和不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，选择获得最高滴度病毒的最佳条件；再以sf9细胞在不同细胞密度、不同MOI值和不同时间条件下表达相应蛋白，以蛋白印迹法鉴定并比较不同条件下的蛋白表达量，选择获得最大量目的蛋白的最佳条件。结果对数生长期的sf9细胞在MOI值为0．50、扩增时间为48h时，所扩增的病毒滴度最高，可达3×10^8pfu／ml；在细胞密度为3×10^6／ml、MOI值为2．0、表达时间为72h时，所表达的蛋白量最大，约5mg/L。结论确定了含编码HPV18L1基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的最佳条件。
- 丁军颖张振龙孙丽媛刘君张夕燕于世荣许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒18L1基因杆状病毒昆虫细胞病毒样颗粒
- 重组人乳头瘤病毒16型L1蛋白在昆虫细胞中的表达及条件优化研究被引量：2
- 2009年
- 目的利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus16，HPV16）L1蛋白，并确定含编码HPV16L1蛋白基因杆状病毒的扩增及其相应目的蛋白表达的最佳条件。方法在不同感染复数（MOI）、不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，研究获得最高滴度病毒的最适条件；通过对相应蛋白进行表达条件的优化，以蛋白印迹法比较蛋白表达量，确定目的蛋白表达的最佳条件。结果确定了扩增含编码HPV16L1蛋白基因杆状病毒及表达相应蛋白的最佳条件，即在sf9细胞系中，以MOI值为0．10接种病毒，扩增48h后收获病毒；以细胞密度为（2—3）×10^6／ml，MOI值为10．0接种病毒，悬浮表达72h收获目的蛋白。蛋白印迹法检测结果证实，表达的目的条带可与HPV16L1蛋白的单克隆抗体发生反应。结论建立了在昆虫细胞中表达HPV16L1蛋白的最适条件，为下一步的纯化及免疫原性研究奠定了基础。
- 孙丽媛刘君张夕燕丁军颖张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白昆虫细胞
