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刘来珍: 作品数：17 被引量：11H指数：2; 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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布鲁氏菌外膜蛋白VirB4在感染胚胎滋养层细胞中的作用分析被引量：5: 2014年; 目的筛选布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞过程中与Ⅳ型分泌系统VirB4蛋白结合的潜在靶蛋白。方法设计引物并PCR扩增布鲁氏菌的virB4基因,构建表达载体pGBKT7-VirB4,酶切鉴定,测序分析正确后,转化酿酒酵母菌感受态细胞Y187,进行自激活和毒性检测;建立布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞模型,构建布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞cDNA文库;采用酵母双杂交技术筛选与VirB4相互作用的滋养层细胞蛋白,实时定量PCR检测靶蛋白表达量的变化。结果成功构建了pGBKT7-virB4诱饵质粒,转入Y187后无毒性,不能自激活;获得了布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞cDNA文库;筛选到了13个阳性质粒,其中蛋白辅酶Q10和SLC3A2在布鲁氏菌侵染后mRNA表达量均增加。结论本试验对VirB4蛋白与宿主细胞的互作研究为进一步阐明布鲁氏菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。; 孙志华刘良波张豫刘娟韩玉霞刘来珍郭乾陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌 CDNA文库酵母双杂交 MRNA

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0339基因的原核表达及免疫反应性分析被引量：2: 2015年; 本研究对布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339进行了表达纯化、免疫反应性分析,并研究了该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的细胞因子表达的影响。首先从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0339基因片段,亚克隆至融合表达载体p ET-28a,构建表达重组质粒p ET-28a-BMEI0339,并利用大肠杆菌进行表达。Western blotting方法检测其免疫学特性;用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测IL-1、IL-10和TNF-α表达量。结果显示:成功构建了p ET-28a-BMEI0339原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEI0339蛋白,Western blotting检测其具有免疫反应性,该蛋白作用细胞后发现TNF-α的表达量低于BSA对照组,差异极显著(P<0.01);IL-1和IL-10的表达量差异不显著(P>0.05)。本研究成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339,证实其具有一定的免疫原性,表明该蛋白影响了胚胎滋养层细胞TNF-α的表达。本研究为研究布鲁氏菌感染宿主细胞的致病机理提供理论基础。; 刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌原核表达细胞因子

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达: 2015年; 【目的】构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达载体,并进行免疫原性及其对人胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量影响的分析。【方法】本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0580基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0580利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,ELISA方法检测细胞因子的表达量。【结果】成功构建了pET-28a-BMEI0580原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEI0580基因,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是57kDa,Western-Blot检测其具有免疫特性。【结论】本实验成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因,为进一步研究其免疫性和保护性奠定了基础。; 刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌原核表达

布鲁氏菌胞内寄生过程中LncRNAs对细胞自噬/凋亡的影响: 张辉刘来珍史静雪豆晓霞李敏荆明龙刘洋李明启王小凤

布鲁氏菌IV型分泌蛋白BMEI1747基因原核表达与免疫原性分析: <正>由布鲁氏杆菌所引起的布鲁氏菌病是危害人畜生命健康的重大疫病。布鲁氏菌的分泌蛋白可作为布鲁氏菌病诊断性抗原和布鲁氏菌亚单位疫苗的候选靶标,布鲁氏菌的Ⅳ型分泌系统蛋白成为近年来研究的热点。本研究对羊种布鲁氏菌新疆流行株...; 刘洋豆晓霞史静雪刘来珍张辉; 文献传递

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析: 2015年; 为构建布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069基因的原核表达载体,进行分析,分析该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量的影响,本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI1069基因片段,亚克隆到p MD19-T载体中并测序,构建表达重组质粒p ET-28a-BMEI1069。转染大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用Western-Blot方法检测其免疫学特性,用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测细胞因子含量。结果表明,获得了p ET-28a-BMEI1069原核表达载体,在大肠杆菌中表达了BMEI1069蛋白,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是58 k Da,western blotting检测显示具有免疫特性,细胞加入BMEI1069重组蛋白后细胞因子IL-1、IL-10和TNF-α的表达均高于PBS对照组,差异显著(P<0.05)。本试验成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069,证实其有一定的免疫特性,并且重组蛋白可以影响细胞因子的表达。这将为研究分泌蛋白在免疫逃逸和维持持续性感染的机制方面奠定基础。; 刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌原核表达细胞因子

布鲁氏菌感染对转化生长因子β1（TGF-β1）的影响: ＜正＞为研究布鲁氏菌侵染宿主过程中TGF-β1的作用,本研究选取牛种布鲁氏菌2308株以100:1（细菌:细胞）的比例侵染小鼠RAW264.7巨噬细胞,PBS为对照组,建立细菌侵染细胞模型。QRT-PCR检测细菌侵染过程...; 史静雪刘来珍张辉孙志华刘娟荆明龙陈创夫

不同布鲁氏菌侵染细胞后对细胞因子表达量的影响: 目的：探讨牛种布鲁氏菌2308 株和外膜蛋白OMP25 缺失株在侵染HPT-8 细胞(人胚胎滋养层细胞)、布鲁氏菌2308 株和布鲁氏菌RB51 株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7 时对细胞因子表达的影响.方法：建立布鲁...; 刘来珍张辉孙志华刘娟史静雪荆明龙陈创夫

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白基因VceA的原核表达、纯化及功能分析被引量：3: 2017年; 本研究对布鲁氏菌分泌蛋白VceA基因进行了原核表达与纯化,并分析其反应原性,致炎特性和分子特性。应用PCR技术从布鲁氏菌2308基因组中扩增VceA基因,亚克隆至PMD19-T载体后,进行测序,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-VceA,然后转化至E.coli BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,Western Blot检测其反应原性;用重组蛋白作用于细胞,检测炎症相关细胞因子的分泌量;并对该蛋白进行生物信息学分析。结果显示:PCR扩增出VceA基因,SDS-PAGE显示纯化的VceA融合蛋白大约在37 kD处,Western Blot也出现了杂交带。细胞实验表明重组蛋白刺激细胞后产生的IL-18,IL-1β,TGF-β1的含量均显著高于BSA对照组(P<0.05)。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,存在信号肽,属于分泌型蛋白,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,并利用Phyre2软件成功构建了该蛋白的三维模型。结果表明,成功克隆并表达了布鲁氏菌Vce A蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,并具有致炎作用。这为进一步研究布鲁氏菌分泌蛋白的致病机制奠定了基础。; 史静雪刘来珍李敏荆明龙刘洋张豫刘航张辉; 关键词：布鲁氏菌

布鲁氏菌感染诱发巨噬细胞炎症反应的初步研究被引量：2: 2015年; 为研究NLRP3炎症小体在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中活化介导的炎症反应,建立牛种布鲁氏菌2308株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7的模型,侵染比例100∶1(细菌∶细胞),RT-PCR技术检测细菌侵染过程中NLRP3炎症小体相关分子NLRP3和Caspase-1 m RNA的变化水平;Western blot分析NLRP3和Caspase-1在蛋白水平的变化;ELISA检测感染细胞上清中炎症因子IL-18和IL-1β的释放量。结果表明:与对照组相比布鲁氏菌感染小鼠巨噬细胞后NLRP3和Caspase-1 m RNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05),炎性因子IL-1β和IL-18的含量也显著升高(P<0.05)。结论:布鲁氏菌感染可激活NLRP3炎症小体,为进一步研究布鲁氏菌感染引发致病机制奠定理论基础。; 刘娟孙志华张静张豫刘来珍李明奇张辉; 关键词：布鲁氏菌 RAW264.7巨噬细胞 NLRP3

刘来珍

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