单威
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 供职机构：浙江中医药大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省医药卫生科学研究基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SDF-1／CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤被引量：11
- 2012年
- 目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Western blotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Western blotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Western blotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific eno-lase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6 h及12 h的rMSCs CXCR4 mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/L SDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5 mg/L AMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。
- 余勤林洁刘丽珍王艳宣晓波王标单威周丽萍刘伟
- 关键词：间充质干细胞基质细胞衍生因子-1ΑCXC趋化因子受体4
- 间充质干细胞不同移植途径对修复大鼠缺氧缺血性脑损伤作用的研究被引量：3
- 2012年
- [目的]比较研究大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)经三条不同途径移植对其修复大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)作用的影响。[方法]113只Wistar大鼠随机分成脑局部定位移植rMSCs组、尾静脉移植rMSCs组、鞘内移植rMSCs组、假手术组、模型组。造模后3d各移植组分别脑局部定位注射rMSCs、尾静脉注射rMSCs、鞘内注射rMSCs。造模后24d行Morris水迷宫实验检测大鼠学习、记忆能力,移植后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取脑组织作病理学检查,并应用双标免疫组化检测rMSCs的分布及神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况。[结果 ]各移植组的逃避潜伏期较模型组显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),但移植组之间无显著性差异(P>0.05)。免疫组化显示各移植组脑组织内都出现rMSCs,脑局部移植的细胞随时间推移以注射点为中心向周围移行,尾静脉移植的细胞分布相对广泛,鞘内移植的细胞随时间推移自脑实质外周向深处移行,移植后1d、4d、7d、14d脑rMSCs组与鞘rMSCs组均显著多于尾rMSCs组(P<0.05)。NSE阳性率在三组之间无显著性差异(P>0.05),GFAP阳性率以移植后21d尾rMSCs组最高(P<0.05)。[结论]rMSCs经三条途径移植均能改善HIBD大鼠学习、记忆能力,但无明显差异;脑局部定位移植与鞘内移植均可使较多rMSCs早期进入脑实质,经尾静脉移植的rMSCs向星形胶质细胞分化较多。
- 余勤李佩佩宣晓波盛丽先郭莹林洁王标单威
- 关键词：间充质干细胞脑损伤
- 诱导性多能干细胞向神经细胞分化的研究进展被引量：2
- 2012年
- 诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS cell)是通过转染外源特定的基因组合来诱导成体细胞重编程为类似于胚胎干细胞的一种多潜能干细胞,iPS细胞与胚胎干细胞不仅在形态上相似,而且在功能方面几乎相同。另外,iPS细胞的诞生克服了胚胎干细胞在临床应用时涉及的移植免疫排斥与伦理道德问题,因此具有重要的临床应用价值。目前iPS在治疗中枢神经系统性疾病方面的研究已取得很大进展,包括iPS细胞向神经细胞诱导分化方法的改进、分化机理的探索以及iPS细胞分化来源神经细胞在神经系统疾病模型中治疗作用的研究等。从iPS细胞的创建及特点、iPS细胞向神经细胞分化的诱导方法及研究新进展方面予以综述。
- 单威余勤刘丽珍王标
- 关键词：IPS细胞神经分化胚胎干细胞
- 逆转录病毒方法建立小鼠诱导性多能干细胞的实验研究被引量：3
- 2013年
- [目的]采用逆转录病毒法转染P2代ICR的小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF),建立小鼠诱导性多能干细胞(inducedpluripotent stem cell,iPS cell,iPS细胞)。[方法]本实验采用293T细胞进行逆转录病毒包装,将分别携带来源于人的Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4转录因子的4种逆转录病毒液共转染ICR小鼠的MEF,并在转染过程中添加维生素C、丙戊酸钠来提高小鼠iPS细胞的诱导效率,通过碱性磷酸酶染色、RT-PCR方法检测建立的细胞株。[结果]转染的MEF在1周左右时间出现明显克隆,克隆传代的细胞经碱性磷酸酶染色呈紫红色,RT-PCR检测结果显示细胞株中的Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog 5种多能性相关的基因都得到明显表达。[结论]转染的MEF在1周左右时间出现明显克隆,小鼠iPS细胞的一些表面标志如碱性磷酸酶得到表达,Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog 5种多能性相关基因也都得到明显表达,表明已经建立小鼠iPS细胞。
- 单威余勤王标刘丽珍刘森泉付珊刘伟周丽萍
- 关键词：IPS细胞MEF逆转录病毒
- G—CSF、AMD3100对大鼠间充质干细胞增殖、迁移和黏附能力影响的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨粒细胞集落刺激因子（G—CSF）、AMD3100对大鼠间充质干细胞（MSCs）增殖、迁移和黏附的影响。方法采用MTT比色法、Transwell迁移法和黏附试验分别检测体外G—CSF、AMD3100对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力的影响。结果在G—CSF质量浓度为200μg／L、AMD3100质量浓度为0．5mg／L时MSCs增殖能力最强；在G-CSF质量浓度为200μg／L、AMD3100质量浓度为0mg／L时MSCs迁移能力最强；在G-CSF质量浓度为200μg／L、AMD3100质量浓度为0．5mg／L时MSCs黏附能力最强。结论体外G—CSF对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力呈促进作用，而AMD3100呈抑制作用。
- 董晖余勤刘丽珍王艳宣晓波王标单威周丽萍刘伟
- 关键词：粒细胞集落刺激因子AMD3100间充质干细胞增殖
- 转基因间充质干细胞与脑损伤
- 2012年
- 缺血缺氧性脑损伤是严重危害人类健康和生活质量的一大类疾病。随着细胞工程和基因工程技术的发展,利用转基因间充质干细胞重建损伤的脑组织、改善脑功能,从而达到治疗中枢神经系统疾病的目的,这具有广泛的科研和临床应用价值。
- 王标余勤单威周丽萍刘伟
- 关键词：转基因间充质干细胞脑损伤
- HIF-1α基因慢病毒载体的构建和鉴定
- 2012年
- [目的]构建带有大鼠HIF-1α基因的慢病毒表达载体,并进行病毒颗粒的包装与对293T的转染。[方法]从pEGFP-N1-HIF-1α载体中扩增出HIF-1α基因片段,将目的基因与pLenti6.3-MCS-RES2-EGFP载体连接,获得慢病毒表达载体pLenti6.3-HIF-1α-IRES2-EGFP,并用磷酸钙转染法将其与慢病毒包装系统共同转染到293T细胞内进行病毒包装,48h后收集上清液并过滤,按不同感染复数感染293T细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达来测定病毒滴度和感染效率。[结果]构建了共表达HIF-1α基因和EGFP基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-HIF-1α-IRES2-EGFP,经PCR及测序结果证实,并对其成功包装出慢病毒,病毒滴度为4×106TU/ml。[结论]成功构建出HIF-1α基因重组慢病毒载体pLenti6.3-HIF-1α-IRES2-EGFP并能有效的包装出慢病毒。
- 王标余勤周丽萍付珊朱振洪单威刘伟胡韶君
- 关键词：HIF-1Α慢病毒载体293T细胞
- 补阳还五汤联合鞘内注射间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究被引量：8
- 2012年
- 目的:探讨补阳还五汤联合鞘内注射大鼠间充质干细胞(rMSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法:将66只Wistar大鼠,随机分成模型组、假手术组、PBS对照组(简称对照组)、补阳还五汤组(简称中药组)、鞘内注射rMSCs组(简称移植组)和补阳还五汤联合鞘内注射rMSCs组(简称联合组)。造模后3天,对照组鞘内注射PBS液,中药组予以补阳还五汤灌胃30天,移植组鞘内注射rMSCs,联合组鞘内注射rMSCs同时给予补阳还五汤灌胃30天。治疗后第7、14、21、28天分别行BBB分级法检测神经功能恢复情况,HE染色法观察脊髓损伤病理改变和修复情况,应用免疫组化技术检测BrdU标记的rMSCs胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异烯醇化酶(NSE)表达情况。结果:成功制作了大鼠脊髓半横断损伤模型,移植组和联合组BBB分级法检测平均得分较模型组、对照组和中药组有显著提高(P<0.05),联合组在不同时间点的BBB平均得分都高于移植组。脊髓组织病理切片显示联合组较移植组组织水肿和炎性细胞浸润减轻更明显,胶质细胞增生更加活跃。双标免疫组化显示移植的rMSCs可迁移到宿主脊髓损伤处并存活,从第7天开始即有NSE和GFAP表达。联合组中GFAP、NSE阳性细胞数目均较移植组多(P<0.05)。结论:鞘内注射移植rMSCs对大鼠脊髓损伤具有修复作用,联合应用补阳还五汤有协同增效的效果,有利于大鼠脊髓功能的恢复。
- 徐志华余勤白月双宣晓波盛丽先李佩佩王标单威周丽萍刘伟
- 关键词：脊髓损伤间充质干细胞补阳还五汤
