卜培英
- 作品数：9 被引量：13H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠疫菌V抗原的单抗系统建立和免疫学定量检测
- 目的：制造鼠疫菌V抗原的鼠单克隆抗体，经抗体表位分析建立单抗系统，并通过此单抗系统建立免疫学检测鼠疫菌V抗原含量的方法，进行鼠疫疫苗研制中V抗原的质量控制。
方法：用鼠疫菌V抗原免疫雌性BALB/c小鼠，取小鼠...
- 常娅莉惠一明王秉翔焦磊胡丽娜傅林锋王革卜培英裴明玉万艳韩少波
- 关键词：鼠疫耶尔森菌双抗体夹心免疫学检测
- 文献传递
- 鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制被引量：2
- 2013年
- 目的 研制鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法 用纯化的鼠疫菌F1抗原作为包被抗原,HRP标记的F1抗原作为酶标抗原,建立鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、敏感性、特异性、准确性和稳定性验证。结果 鼠疫菌F1抗原的最佳包被浓度为0.6μg/ml,HRP标记的F1抗原的最佳工作浓度为1︰7 000。制备的试剂盒检测精密性质控品的板内变异系数为6.5%,板间变异系数为7.1%;检测高、中、低浓度内部质控品和精密性质控品的回收率在95%～112%之间;检测阳性血清和阴性血清的敏感性为100%;与正常人血清、正常兔血清、正常小鼠血清、兔抗假结核耶尔森菌血清、小鼠抗假结核耶尔森菌血清均无交叉反应;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论 成功制备了鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,达到了体外诊断试剂的注册要求,可用于鼠疫的临床监测、诊断及预后判断。
- 常娅莉席仲兴吴智远徐秉臣张正雷韩少波热娜雷刚彭林锋卜培英袁浩嘉王秉翔
- 关键词：F1抗体酶联免疫吸附测定
- 鼠疫双组分疫苗免疫小鼠的细胞免疫学应答分析
- 本文主要分析了用鼠疫双组分疫苗免疫NIH小鼠后机体的细胞免疫应答状况。
实验室研究了鼠疫候选亚单位疫苗，F1+rV抗原为主要成分，分别用氢氧化铝佐剂和CpG+氢氧化铝佐剂配制。各实验疫苗组中F1的量和rV的量相...
- 焦磊常娅莉傅林锋卜培英王秉翔
- 关键词：鼠疫亚单位疫苗细胞免疫应答
- 文献传递
- 鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制被引量：5
- 2013年
- 目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清，经50％饱和硫酸铵盐析2次后，再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化，作为包被抗体；制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水，并进行纯化，用HRP标记单抗，作为酶标抗体；建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法，连续制备3批诊断试剂盒，并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5．2％，板间变异系数为8．23％；试剂盒的线性范围为3．91～62．5ng／ml，最低检测限为3．0ng／ml；试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性，而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应；试剂盒检测高、中、低3种浓度Fl抗原含量的变异系数为4．54％～8．4％，回收率在104％-108％之间；试剂盒稳定性良好，有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段，也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。
- 常娅莉席仲兴吴智远徐秉臣彭林锋胡丽娜热娜雷刚韩少波张正雷卜培英袁浩嘉王秉翔
- 关键词：鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体酶联免疫吸附测定
- 鼠疫组分疫苗F1抗原、rV抗原含量的检测及其质量控制被引量：3
- 2012年
- 目的采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量。方法利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验;分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测;验证A(l OH)3佐剂吸附抗原的完全性;将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性;对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证。结果鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性;用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry法检测结果的误差均在±20%以内;4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明A(lOH)3佐剂吸附抗原完全;4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定;3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加。结论已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测。
- 常娅莉吴智远魏东韩少波胡丽娜焦磊卜培英王国治王秉翔
- 关键词：F1抗原双抗体夹心ELISA法
- 可溶性重组炭疽保护性抗原的发酵、纯化及生物学特性分析
- 对表达炭疽保护性抗原(PA)的重组菌株进行发酵,并纯化、分析目的蛋白PA的生物学特性。试验结果显示重组菌株在LB、TB培养基中发酵,不限制通氧量、pH维持在6.8～7.6细胞株生长所能接受的范围、30℃条件下诱导,可获得...
- 王革尤明强李睿胡丽娜马维民卜培英王秉翔
- 关键词：发酵纯化生物学特性
- 文献传递
- 鼠疫耶尔森菌rV抗原单抗系统及其ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2012年
- 目的建立ELISA双抗体夹心法,测定重组毒力因子rV抗原含量。方法采用杂交瘤技术,制备鼠疫菌rV抗原的鼠单克隆抗体,对抗原表位和单抗特异性进行分析及鉴定,建立ELISA双抗体夹心法,并验证方法的专属性、准确性、精密度和线性范围。结果成功组建了鼠疫菌rV抗原诊断试剂,灵敏度最低检测值为10 ng/mL。结论该方法可用于免疫学检测鼠疫组分疫苗原液rV抗原含量及制备过程中抗原活性,是鼠疫组分疫苗制备中一种重要的质量控制手段,也为进一步开发鼠疫诊断试剂盒及其他相关研究奠定了基础。
- 常娅莉焦磊魏东吴智远胡丽娜卜培英白钰王秉翔
- 关键词：鼠疫耶尔森菌表位双抗体夹心ELISA
- 重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液性质研究
- 2012年
- 目的进行重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液二聚体含量及性质研究,确定LcrV原液的相关质控标准。方法在不同缓冲体系(0.85%NaCl(NS)、20 mmol/L PBS),不同蛋白浓度(2.0、1.5、1.0、0.5、0.1 mg/mL)及不同保存温度(4℃、-20℃、-70℃)条件下保存LcrV抗原,采用SDS-PAGE和HPSEC方法定期检测LcrV二聚体含量及纯度。将连续三批检定合格的LcrV抗原原液进行质谱相对分子质量测定、等电点测定、N末端氨基酸序列测定、圆二色(CD)谱、HPLC肽谱及氨基酸组成分析,研究LcrV抗原的相关性质。结果随着保存时间的延长LcrV抗原二聚体含量增加,低温保存时二聚体不易大量形成。在-20℃和-70℃条件下,NS保存的LcrV抗原比PBS体系保存稳定,而在4℃条件下NS保存的LcrV抗原容易降解。LcrV抗原高浓度保存容易发生聚合。LcrV抗原在低质量浓度(0.1 mg/mL)保存时免疫学活性明显下降。质谱检测到LcrV单体和二聚体共同存在,且与理论相对分子质量一致。LcrV原液检测等电点范围为4.6～6.3。N末端测序、CD谱、HPLC肽谱图及氨基酸组成分析与理论结果一致。结论 LcrV抗原原液保存条件确定为:NS体系,蛋白质量浓度1.0～2.0 mg/mL,-20℃以下冻存。制备的LcrV抗原各项检测结果与理论结果一致,抗原性质稳定。
- 胡丽娜常娅莉万艳张轶吴智远卜培英王秉翔
- 初步探索以“动物法则”评价鼠疫组分疫苗的临床有效性被引量：2
- 2016年
- 目的依据＂动物法则＂,探索被动免疫小鼠对鼠疫强毒菌攻击的有效性,为间接评价鼠疫组分疫苗临床有效性提供依据。方法以小鼠为观察对象,依据小鼠耐受正常人血清剂量和小鼠体内异源动物血清代谢动力学研究,确定小鼠耐受正常人血清剂量和攻击时间,基于此对小鼠进行鼠疫组分疫苗免疫人血清被动免疫,观察小鼠抵抗鼠疫强毒菌攻击的存活率和存活时间,判定小鼠被动保护鼠疫强毒菌攻击的有效性。结果 BALB/c小鼠对正常人血清耐受量为1.0 m L,3~4 h间抗体滴度最高。小鼠抵抗鼠疫强毒菌攻击试验显示,在14 d的观察期内,经2MLD、6 MLD和10 MLD鼠疫强毒菌攻击的被动免疫小鼠,存活率分别为57%、25%和42%,平均存活时间依次为11.2 d、8.7 d和9.8 d;1 MLD攻击非免对照小鼠全部死亡,平均存活时间5.3 d。结论初步证实利用被动免疫小鼠可间接评价鼠疫组分疫苗临床有效性的可行性。
- 焦磊吴智远常娅莉辛有全孟繁岳王婷卜培英张青雯祁芝珍王秉翔
