吴晓君
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
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- YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性。
- 杨靖许文林李娟弓晋灵吴晓君陈巧云王法春
- 关键词：MCF-7SHRNAMMP-2
- Hsa-mir-216a真核表达载体的构建及其在胃癌细胞SGC7901/DDP中的表达
- 2011年
- 目的:构建人mir-216a真核表达载体,实现其在胃癌细胞SGC7901/DDP中的表达,为进一步研究mir-216a的功能打下基础。方法:依据miRBase数据库中pre-mir-216a序列设计引物;PCR扩增pre-mir-216a基因并将其克隆至pGenesil-1载体;将pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒转染SGC7901/DDP细胞,RT-PCR及实时定量RCR法检测成熟mir-216a在SGC7901/DDP细胞中的表达。结果:pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒经酶切及测序鉴定正确;pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒转染进SGC7901/DDP细胞后,RT-PCR检测mir-216a成熟体表达明显增强,实时定量PCR检测S/D/mir-216a组mir-216a成熟体表达较S/D/HK组上调(63.530±0.159)倍(t=1.201,P<0.01)。结论:成功构建了pGenesil-1-hsa-mir-216a真核表达质粒,并在胃癌细胞SGC/DDP中高效表达。
- 徐红美许文林姚俊冷加燕吴晓君陈巧云
- 关键词：真核表达载体转染
- YB-1腺病毒载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:构建携带人YB1基因的重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞株MCF-7药物敏感性的影响,并分析其可能的机制。方法:设计含有BglⅡ和HindⅢ酶切位点的引物,PCR克隆人YB1基因,插入穿梭载体pAdTrack-CMV,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组,获得重组子pAdEasy-1-hYB1,转染293A细胞,包装获得含hYB1的重组腺病毒(AdYB1),体外转染MCF-7细胞。采用MTT法分析在As2O3作用下YB1对MCF-7细胞半数抑制浓度(IC50)的影响;采用Annexin V/PI双染法,经流式细胞仪分析在As2O3作用下YB1对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:成功构建了含有hYB1基因的腺病毒载体AdYB1,该重组腺病毒能显著提高MCF-7细胞的YB1mRNA及蛋白的表达水平,转染YB1组能够增加MCF-7细胞对AS2O3的IC50值;通过Annexin V/PI检测证实YB1能够抑制早期细胞凋亡。结论:成功构建含有hYB1基因的腺病毒载体AdYB1,能高效感染MCF-7,并通过抑制早期细胞凋亡提高MCF-7细胞对As2O3的耐药性。
- 冷加燕许文林沈慧玲龙璐璐吴晓君陈巧云姚俊
- 关键词：MCF-7细胞腺病毒载体耐药
- YB-1对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达和细胞侵袭及成球能力的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达及细胞迁移、成球能力的影响。方法:应用基因重组技术将YB-1基因及其siRNA构建于腺病毒载体pADeasy-1,重组腺病毒及腺病毒空载体转染乳腺癌细胞株MCF-7;通过蛋白质印迹法,RT-PCR和免疫荧光的方法检测YB-1和CD44的表达;MTT法检测转染后细胞生长速度,并绘制生长曲线;并通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力;细胞使用无血清培养基培养,并加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察YB-1对细胞成球能力的影响。结果:蛋白质印迹法和RT-PCR结果显示,转染YB-1重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44的表达明显高于转染腺病毒空载体组和未转染组;相反,转染YB-1 siRNA重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44表达明显低于对照腺病毒空载体组和未转染组;免疫荧光也证实CD44蛋白水平与YB-1表达正相关。细胞生长曲线表明,转染YB-1重组腺病毒载体组的细胞生长速度最快,而且其侵袭、迁移和成球能力最强。结论:YB-1可能通过调控CD44的表达影响人乳腺癌细胞MCF-7的侵袭及成球能力。
- 吴晓君许文林冷加燕龙璐璐朱小兰李皓姚俊徐红美陈巧云惠璐璐
- 关键词：YB-1CD44乳腺癌MCF-7细胞株
- 一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的:探讨一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基因库NO.FJ216964)设计特异性引物,应用SYBRG reenⅠ荧光染料,采用实时PCR法检测了52例乳腺癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA的表达量,分析CD44v17 mRNA表达与乳腺癌临床生物学特性之间的关系。结果:乳腺癌组织CD44v17 mRNA表达(3.10±1.12)明显高于相应癌旁正常组织(2.31±0.84)(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(4.07±1.13)显著高于无淋巴结转移组(2.75±0.89)(P<0.01);肿瘤组织>5 cm组CD44v17 mRNA表达(4.18±0.95)明显高于肿瘤组织≤5 cm组(2.96±1.07)(P<0.05);髓样癌(5.27±0.30)显著高于导管内癌(3.28±1.08)和浸润性导管癌(2.92±1.04)(P<0.05),导管内癌和浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达(4.18±0.92)明显高于Ⅰ期(2.73±0.97),Ⅱ期(2.76±0.96)(P<0.05);乳腺癌CD44v17 mRNA表达与雌激素受体、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和cerbB-2表达无明显相关性(P>0.05)。结论:CD44v17 mRNA在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能与乳腺癌的侵袭、转移及预后有关。
- 弓晋灵许文林李娟杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：实时荧光定量PCR乳腺癌
- 血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响
- 2010年
- 目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。
- 李娟许文林弓晋灵杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：多药耐药相关蛋白1血管内皮生长因子荧光素酶报告基因启动子活性
- CD44v17在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系
- 2011年
- 目的 探讨一种新的CD44变异体（CD44v17）在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系.方法根据本实验室在MCF-7／Adr中新发现的1种CD44剪切拼接变异体CD44v17设计特异性引物,应用SYBR Green I荧光染料,采用实时PCR法检测87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 Mrna的表达,根据标准曲线计算CD44v17mRNA的表达量,分析CD44v17mRNA表达与胃癌临床生物学特性之间的关系.结果胃癌组织CD44v17 Mrna表达明显高于相应癌旁正常组织（P〈0.05）;肿瘤〉5 cm组CD44v17 Mrna表达与肿瘤≤5 cm组表达比较差异无显著性（P〉0.05）;未分化腺癌组表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组（P〈0.05）,乳头状腺癌组CD44v17 Mrna表达与管状腺癌组比较差异无显著性（P〉0.05）;肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 Mrna表达显著高于侵及黏膜、黏膜下层及肌层组（P〈0.05）,而肿瘤侵及黏膜及黏膜下层组的CD44v17 Mrna表达与侵犯肌层组表达比较差异无显著性（P〉0.05）.淋巴结转移组CD44v17 Mrna表达明显高于淋巴结无转移组（P〈0.05）;有肝脏转移组CD44v17 Mrna表达显著高于无肝脏转移组（P〈0.05）.结论CD44v17 Mrna在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的侵袭、转移及预后有关.
- 姚俊许文林冷加燕徐红美吴晓君陈巧云
- 关键词：实时荧光定量PCR胃癌
- CD44变异体(CD44v17)在食管癌中的表达及意义
- 2011年
- 目的:探讨CD44v17在食管癌中的表达及意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基国库序列号FJ216964)设计特异性引物,采用实时定量PCR法检测了73例食管癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,分析CD44v17 mRNA表达与食管癌临床生物学特性之间的关系。结果:食管癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0.05);食管癌CD44v17 mRNA表达与肿瘤的大小、发生部位、病理类型均无相关性(P>0.05),而与食管癌的分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:CD44v17 mRNA在食管癌组织中高表达,可为临床预测食管癌恶性程度,浸润转移潜能,评估预后提供一种重要的参考指标。
- 姚俊许文林冷加燕徐红美吴晓君李皓陈巧云
- 关键词：实时定量PCR食管癌淋巴结转移
