吴育美
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅医学重点人才项目更多>>
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- 质子泵抑制剂提高人胃腺癌细胞化学治疗敏感性研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨质子泵抑制剂（PPI）泮托拉唑（PPZ）是否通过抑制空泡型质子泵来逆转细胞内外pH梯度，从而增加肿瘤细胞化学治疗敏感性，并探讨PPZ最佳预处理时间、剂量及机制。方法免疫印迹及免疫荧光法比较PPZ处理前、后人胃低分化腺癌细胞株SGC7901空泡型质子泵的表达及胞内分布变化。用BCECF-AM荧光探针检测不同浓度PPZ作用不同时间对细胞内pH值的影响。用四甲基偶氮唑盐比色法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶试剂盒检测化学治疗药物联合PPZ的细胞毒性和细胞凋亡变化。用阿霉素检测PPZ对细胞内药物蓄积和潴留量的影响。结果10和100μg／m[PPZ作用24h后，空泡型质子泵表达的相对吸光度值（1．19±0．03和0．70±0．03）明显低于空白对照组（1．53±0．05），而1μg／ml PPZ可促进其表达（2．29±0．06）。在10μg／mlPPZ作用第6和12小时，可见其对空泡型质子泵表达的抑制作用（相对吸光度值分别为0．32±0．02和0．13±0．02），在作用24h后可改变空泡型质子泵的细胞内分布。10和100μg／ml PPZ作用24h可使细胞内pH值（7．44±0．09和7．31±0．06）明显低于空白对照组（7．51±0．05），10μg／ml及以上浓度的PPZ可逆转细胞内外pH梯度。PPZ预处理24h后予化学药物治疗的细胞存活率（58．71％±1．18％）低于单用化学治疗药物（74．33％±1．77％，P〈0．05），其总凋亡率（80．81％±1．16％）和早期凋亡率（77．52％±1．13％）显著高于单用化学治疗药物（26．42％±1．19％和23．18％±0．92％，P值均〈0．01）。20、50和100μg／ml PPZ作用24h后的阿霉素释放指数（0．164±0．013、0．162±0．015、0．152±0．012）低于空白对照组（0．277±0．011，P值均〈0．01）。结论PPZ预处理可提高人胃腺癌细胞的化学治疗敏感性。
- 陈敏邹晓平曹俊张斌刘文佳吴育美林海
- 关键词：泮托拉唑抗肿瘤剂
- 肼屈嗪对人胃癌细胞株RUNX3基因甲基化及其表达的调节作用
- 2010年
- 背景：甲基化所致的抑癌基因RUNX3表达沉默是胃癌发生的重要机制，以脱甲基化制剂恢复其表达可起到抗肿瘤作用。目的：研究脱甲基化制剂肼屈嗪对人胃癌细胞株RUNX3基因甲基化及其表达的调节作用，观察肼屈嗪对胃癌细胞生长和凋亡的影响。方法：分别以RT—PCR和甲基化特异性PCR（MSP）检测肼屈嗪和5-Aza-dC处理前后SGC7901、MKN28和MGC803细胞的RUNX3mRNA表达及其甲基化状态。以MTT法检测MKN28细胞增殖活性．以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果：MKN28细胞存在甲基化所致的RUNX3基因表达沉默。40μmol／L肼屈嗪作用72h后，MKN28细胞可扩增出RUNX3非甲基化条带．呈部分脱甲基化，RUNX3mRNA恢复表达，但相对表达量低于5-Aza—dC组（P〈0．05）。10μmol／L以上浓度的肼屈嗪对MKN28细胞生长具有抑制作用，可使细胞周期阻滞于G0／G1期，并诱导细胞凋亡（P〈0．05）。结论：肼屈嗪可通过脱甲基化恢复RUNX3基因表达并能抑制MKN28细胞生长，诱导细胞凋亡。有必要对肼屈嗪在胃癌治疗中的作用作进一步研究。
- 林海曹俊张斌陈敏吴育美邹晓平
- 关键词：胃肿瘤基因RUNX3DNA甲基化
- 泮托拉唑对人胃腺癌细胞株SGC-7901缺氧诱导因子-1α表达的影响
- 2010年
- 背景：缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是一种与肿瘤的增殖、代谢、转移、耐药等密切相关的蛋白,以其为靶点进行干预对肿瘤治疗可能有效.研究显示泮托拉唑具有化疗增敏作用,关于其对HIF-1的影响,国内外鲜有相关报道.目的：观察泮托拉唑对人胃腺癌细胞株SGC-7901 HIF-1α表达和分布的影响,探讨其化疗增敏机制.方法：以不同浓度泮托拉唑（0～160μg/ml）处理SGC-7901细胞24 h,蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达,免疫荧光法观察HIF-1α蛋白的胞内分布.结果：泮托拉唑能显著抑制SGC-7901细胞的HIF-1α蛋白表达,抑制作用与药物浓度有关且存在最适浓度（10μg/ml）;在一定浓度下（20μg/ml）,洋托拉唑还能抑制HIF-1α蛋白的核周浓集.结论：泮托拉唑能显著抑制SGC-7901细胞的HIF-1a表达,并在一定程度上影响其胞内分布,这可能是其化疗增敏作用的机制之一.
- 吴育美陈敏张斌杨德红邹晓平
- 关键词：胃肿瘤抗药性肿瘤泮托拉唑
- 经卡介苗活化的负载PANC1裂解产物的树突状细胞疫苗体外抗胰腺癌作用被引量：3
- 2010年
- 目的探讨负载胰腺癌细胞株PANCl裂解产物（tumor lysate，TL）的树突状细胞（dendritic cells，DC）经卡介苗（CGB）活化后诱导的自体淋巴细胞体外抗胰腺癌效应。方法应用rhGM—CSF和rhIL-4从健康人外周血单个核细胞诱导培养DC，用TL负载DC，并用CGB促其成熟。倒置相差显微镜观察DC形态，流式细胞仪检测细胞CD1a、CD83、CD86及HLA—DR表型，ELISA法检测培养上清液中TNF—α和IL-12p 70含量。CCK-8检测DC诱导自体混合淋巴细胞的增殖率以及活化淋巴细胞对PANC1、PaTu8988及SCG7901细胞的杀伤率。结果CGB活化负载TL的DC后，CD83和CD86阳性率分别从（3．7±0．3）％和（38．6±5．0）％显著增加至（16．5±0．6）％和（76．5±2．5）％（P〈0．05）；DC分泌的IL-12p70和TNF—α量分别从（20．18±2．06）pg／ml和（61．38±1．19）pg／ml显著增加至（62．48±3．80）pg／ml和（592．53±17．96）pg／ml（P〈0．01）；DC与自体混合淋巴细胞以1：100、1：50、1：10、1：5的比例共培养，淋巴细胞增殖率分别从（3．90±1．41）％、（4．07±0．40）％、（3．39±1．05）％、（2．82±0．39）％显著增加至（55．38±3．58）％、（75．00±2．54）％、（77．07±3．40）％、（99．07±2．40）％（P〈0．01）；DC活化淋巴细胞对PANCl细胞的杀伤率在效靶比为1：5、1：10、1：20、1：50时分别可达（71．73±0．46）％、（49．44±0．98）％、（31．76±2．77）％、（19．03±3．04）％，但对PaTu8988和SCG7901细胞的杀伤率显著降低。结论经CGB活化的胰腺癌DC疫苗成熟度增加，体外表现出高效特异的抗胰腺癌细胞的效应。
- 杨德红刘文佳陈敏吴育美邹晓平
- 关键词：胰腺肿瘤树突细胞卡介苗
- RUNX3、RASSF1A启动子高甲基化与胃癌进展转移的关系被引量：6
- 2010年
- 目的:探讨胃癌RUNX3、RASSF1A基因启动子甲基化在胃癌进展转移中的作用及意义.方法:RT-PCR和MSP检测62例胃癌标本及56例正常胃黏膜组织RUNX3、RASSF1A基因mRNA表达及甲基化状况,免疫组织化学检测VEGF在RUNX3、RASSF1A甲基化与非甲基化胃癌组织及20例正常组织中的表达,并分析RUNX3、RASSF1A甲基化与VEGF表达的关系.结果:胃癌组织RUNX3与RASSF1A表达较正常组织均明显降低(0.629±0.461vs0.893±0.543,0.653±0.476vs0.858±0.581,均P<0.05),且RUNX3与RASSF1A甲基化率均高于正常组织(69.4%vs26.8%,66.1%vs23.2%,均P<0.01).胃癌组织中RUNX3、RASSF1A甲基化组mRNA表达量较非甲基化组明显降低(0.545±0.299vs0.736±0.291,0.562±0.208vs0.674±0.185,均P<0.05).RASSF1A甲基化与肿瘤TNM分期及浸润深度相关,RUNX3甲基化与肿瘤淋巴结转移、血管侵犯及TNM分期相关(P<0.05).RUNX3甲基化组胃癌组织VEGF蛋白表达高于非甲基化组(86.0%vs57.9%),RUNX3甲基化与VEGF表达相关(P<0.05).结论:RUNX3、RASSF1A启动子高甲基化可能是导致其表达降低的原因,并与胃癌进展演变相关.RUNX3甲基化可能参与胃癌血管、淋巴管转移.
- 林海曹俊张斌吴育美邹晓平
- 关键词：胃肿瘤甲基化RUNX3RASSF1A
