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鸭瘟病毒UL51基因在感染宿主细胞中的定位和转录特征: 2010年; 对鸭瘟病毒(DPV)UL51基因在感染宿主细胞内的定位和转录时相进行分析,为进一步研究该基因的特性和功能提供有用的试验数据和材料。构建pET32a-UL51原核表达载体,将其转化至E.coliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达后,用Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱层析法纯化该表达产物。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备兔抗UL51多克隆抗血清,通过间接免疫荧光和RT-PCR法检测该基因在DPV感染的鸭胚成纤维细胞(DEF)内的定位和转录情况。间接免疫荧光结果显示,最早可在感染后8h的胞浆中检测到特异性荧光点,24～36h有大量绿色荧光团块聚集于近核区域,之后随着细胞病变的增强,胞浆中的绿色荧光开始减弱,且在感染晚期的胞核中也出现了少量弥散的绿色荧光。RT-PCR结果显示,DPVU L51基因从感染后4h开始转录,其后转录量不断增大,从6～48h一直保持在较高水平,之后又降低。DPVU L51蛋白主要定位于感染的宿主细胞的胞浆中特别是近核区域,与其在α-疱疹病毒中的同源物的定位结果一致;并且与其他几种α-疱疹病毒的转录情况对比后,可认为该基因是一个晚期(γ类)基因。; 沈婵娟程安春汪铭书文明招丽婵贾仁勇徐超孙涛葛菡周登春余波陈孝跃; 关键词：鸭瘟病毒原核表达间接免疫荧光 RT-PCR

鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析被引量：4: 2008年; 根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU。然后将其转化至E.coliBL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66.8 ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2%,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接ELISA效价为1∶409 600。通过免疫荧光技术进行DPV dUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4 h的胞质中检测到特异性荧光,12 h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24 h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48 h胞核和胞质荧光均显著减弱。本研究为DPV dUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。; 招丽婵程安春汪铭书袁桂萍贾仁勇周登春葛菡孙涛陈孝跃; 关键词：鸭瘟病毒克隆亚细胞定位

小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v和Ag10v研制及免疫原性研究: 基于当前小鹅瘟亚单位蛋白疫苗的研究尚属空白，本文通过对小鹅瘟病毒衣壳蛋白VP3基因的生物信息学分析，设计并制备了源于VP3基因重要抗原表位区域的两个基因工程重组亚单位疫苗(Ag16v和Ag10v)，并将该疫苗应用于对青年...; 周登春; 关键词：小鹅瘟病毒 VP3基因免疫原性; 文献传递

鸭瘟病毒强毒株在感染鸭实质器官内的增殖与分布被引量：9: 2008年; 鸭瘟病毒(DPV)CHv强毒株经皮下注射、滴鼻和口服3种途径分别感染20日龄天府肉鸭,于攻毒后10、30、60、90min以及4、12、48、72h和9、15d每组分别剖杀2只鸭,采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、法氏囊、哈德氏腺等实质器官,应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR对DPV在这些器官的分布和增殖进行检测。结果表明,DPV分布到具体器官的速度与感染的途径、鸭的解剖结构密切相关,其中皮下注射是DPV分布到各实质器官速度最快的途径。30min于皮下感染鸭的肝、脾、胸腺、法氏囊、哈德氏腺、肺、脑、肾,口服感染鸭的肺和法氏囊,滴鼻感染鸭的心脏和哈德氏腺均检测到DPV-DNA;90min所有受检样品中检测到DPV-DNA。鸭抗DPV感染的免疫器官的重要性依次是脾、胸腺、法氏囊和哈德氏腺,30min内DPV-DNA分布到脾、胸腺、法氏囊的速度和数量决定了DPV感染的潜伏期和疾病的严重程度。不同途经感染鸭的相同器官在同一时间内的DPV-DNA拷贝数大多以皮下感染鸭为最高。DPV致死鸭的法氏囊和肾是DPV-DNA含量最高的实质器官。; 杨晓燕程安春汪铭书齐雪峰郭宇飞葛忠源黄永成张素辉胡骑于波周登春陈孝跃; 关键词：实时荧光定量PCR

鸭瘟病毒dUTPase基因的分子特性及转录时相分析被引量：2: 2008年; 应用大量生物信息学分析工具及 RNA 斑点杂交技术对本实验室构建鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)CHv 株基因文库时新发现的 dUTPase 基因(GenBank 登录号DQ486149)进行了分子特性及转录时相分析。研究表明:该基因大小为1344bp,编码447个氨基酸,包含 dUTPase 家族蛋白的5个保守 motifs,排列形式3-l-2-4-5具备Ⅱ型 dUTPase的典型特征。DPV CHv dUTPase 基因在25个疱疹病毒参考株之间高度保守,并与 a 疱疹病毒的氨基酸同源性较之与β、γ疱疹病毒要高。DPV CHv dUTPase基因转录检测发现DPV 感染宿主细胞后最早30rain 可检测到该基因转录产物,随后转录产物量迅速放大,4h达高峰,24h 后下降至相对低的水平。该研究为阐明病毒基因表达调控机理提供了有用的实验数据,并对病毒其他基因的发现和研究具有指导性意义。; 招丽婵袁桂萍程安春汪铭书贾仁勇周登春陈虹葛菡; 关键词：鸭瘟病毒 DUTPASE 分子特性转录分析斑点杂交

基于TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR对DPV强毒不同途径感染鸭实质器官增殖分布规律研究: 鸭瘟病毒(DPV)CHv强毒株经皮下注射、滴鼻和口服三种途径分别感染20日龄天府肉鸭, 于10、30、60、90min以及4h、12h、48h、72h、9d、15d分别剖杀两只鸭,采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、法氏囊...; 杨晓燕程安春汪铭书齐雪峰郭宇飞葛忠源黄永成张素辉胡骑于波周登春陈孝跃; 关键词：TAQMAN-MGB探针实时荧光定量PCR; 文献传递

基于TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR对DPV强毒不同途径感染鸭实质器官增殖分布规律研究: 鸭瘟病毒(DPV)CHv强毒株经皮下注射、滴鼻和口服三种途径分别感染20日龄天府肉鸭,于10、30、60、90 min以及4h、12h、48h、72h、9d、15d分别剖杀两只鸭,采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、法氏囊...; 杨晓燕于波周登春陈孝跃程安春汪铭书齐雪峰郭宇飞葛忠源黄永成张素辉胡骑; 关键词：TAQMAN-MGB探针实时荧光定量PCR; 文献传递

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周登春