尹全章
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京医科大学基础医学院微生物学系与免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅科研基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EB病毒潜伏膜蛋白2A抗原表位的融合表达及其意义被引量：2
- 2008年
- 为了探讨含有EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)抗原表位片断表达的融合蛋白在鼻咽癌血清学检测中的应用意义,通过重叠延伸PCR方法,合成了3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖LMP2A的主要的4个抗原表位,将它们拼接在一起构建一个多肽融合基因,克隆到PGEX-4T-2载体中表达融合蛋白,以GST亲和层析柱法纯化融合蛋白,鉴定后以此为抗原检测鼻咽癌患者的血清。结果表明,获得了含EB病毒LMP2A主要的4个抗原表位的融合蛋白(EC2A),蛋白纯度达90%以上,ELISA结果显示鼻咽癌患者血清的检出率为77.9%,正常人群血清为阴性,与常规的VCA-IgA法进行比较,有9份(13.3%)血清VCA-IgA为阴性而EC2A-IgG检出阳性,为鼻咽癌的临床检测提供了新思路,也为后续的单克隆抗体制备奠定了基础。
- 陈云姚堃许文嵘周锋徐建尹全章谢芳艺
- 关键词：EB病毒LMP2A重叠PCR表位
- 人类疱疹病毒7型糖蛋白gB、gH、gL、gO介导细胞融合(英文)
- 2007年
- 人类疱疹病毒 7 型(HHV-7)的感染依赖于包膜糖蛋白在病毒生命周期的多个阶段发挥功能. 这些蛋白质可以介导病毒吸附,病毒包膜和宿主细胞膜融合以及病毒在细胞间的接触传播. 将表达 HHV-7 糖蛋白的 293T 细胞与 HHV-7 易感的SupT1 细胞共培养,检测虫荧光素酶报告基因的表达,以鉴定介导膜融合的 HHV-7 糖蛋白. 研究发现,HHV-7 糖蛋白 gB、gH、gL、gO 能介导 293T 细胞与 SupT1 细胞的融合,且融合可被抗 CD4 单抗所抑制. 结果表明,糖蛋白 gB、gH、gL、gO对于 HHV-7 引发的膜融合是必需的,其中某个蛋白质或所形成的蛋白质复合物可能是 CD4 的配体.
- 徐建姚堃窦洁秦健许文嵘陈云尹全章周锋
- 关键词：人类疱疹病毒7型糖蛋白膜融合
- 人疱疹病毒6型特异性CD4^+ T细胞的初步克隆被引量：2
- 2008年
- 目的克隆人疱疹病毒6型(HHV-6)特异性CD4+ T细胞,并分析其基本特征。方法采用微孔有限稀释法克隆HHV-6特异性CD4+ T细胞;3H-TdR掺入法细胞增殖试验筛选HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆;流式细胞仪(FACS)分析HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的表面标志,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的细胞因子分泌水平。结果获得的细胞克隆中有4株以HHV-6感染细胞裂解物特异的方式增殖,并且其增殖水平与HHV-6感染细胞裂解物呈剂量依赖性;细胞克隆表面标志为CD3+CD4+;W-2和W-4细胞克隆的细胞因子分泌以白细胞介素10(IL-10)为主,W-1细胞克隆的细胞因子分泌以IL-10及γ干扰素(IFN-γ)为主,W-3细胞克隆的细胞因子分泌以IFN-γ为主。结论初步建立HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆,并分析其表面标志和细胞因子分泌水平,为HHV-6特异性Treg细胞的克隆、筛选及其功能的研究奠定基础。
- 王芳姚堃冯冬举周锋尹全章
- 关键词：人类疱疹病毒6型克隆CD4^+T细胞
- 抗人类疱疹病毒6型南京分离株E5单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:制备并鉴定人疱疹病毒6型(HHV-6)单克隆抗体。方法:用纯化的HHV-6南京分离株E5免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选,间接免疫荧光法、免疫印迹实验等方法鉴定单抗。并采用套式PCR法和ELISA法,在口腔癌中进行了初步的应用。结果:获得了一株分泌抗HHV-6单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为JA9。单克隆抗体亚类鉴定表明:其为IgG1亚类,轻链为κ。用间接ELISA法检测细胞上清单抗效价为1∶500;单抗腹水滴度为1∶8.0×104。免疫印迹实验结果表明:JA9单抗腹水与约75kuHHV-6E5病毒蛋白结合。口腔癌患者唾液的HHV-6阳性检测率结果分别是:套式PCR法60%,ELISA法40%。结论:成功制备并鉴定一株抗HHV-6南京分离株E5单克隆抗体,为HHV-6进一步的基础研究及临床快速诊断提供可能。
- 姜兰兰姚堃尹全章茌静周锋卢士强刘英霞
- 关键词：人类疱疹病毒6型单克隆抗体BALB/C小鼠
- HHV-6潜伏感染者T细胞免疫及其潜伏感染机制的初探
- 人类疱疹病毒6型(Human Herpesvirus,HHV-6)感染在人群中较普遍,原发感染大都在婴儿期,是引起婴幼儿急疹的病原,随后潜伏并持续存在于宿主体内,不引起临床症状,当人体受到各种非特异性刺激、机体抵抗力减弱...
- 王芳姚堃尹全章周锋丁传林彭光勇
- 文献传递
- 重叠PCR合成LMP2A抗原表位片段及其在大肠杆菌中表达和免疫原性分析
- 目的:EB病毒潜伏膜蛋白2A胞外区抗原表位的PCR拼接合成、重组表达和免疫原性分析。方法:经抗原表位分析软件对LMP2A编码基因序列进行分析,兼顾密码子的偏嗜性,合成3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖LMP2A胞外区的3个...
- 陈云姚堃许文嵘徐建尹全章
- 关键词：LMP2A重叠PCR抗原性
- 文献传递
- 人类疱疹病毒6型U94 ORF在大肠杆菌中的表达、纯化、多克隆抗体的制备及其在血清学检测中的应用
- 人类疱疹病毒6型/(Human HerpesvirUS 6，HHV-6/)属于疱疹病毒β亚科，最初分离于淋巴增生和免疫抑制的病人，对CD4~+的T淋巴细胞具有亲嗜性。HH-6是引起婴幼儿急疹/(exanthem subi...
- 尹全章
- 关键词：人类疱疹病毒6型细胞病变效应套式聚合酶链反应血清学检测多克隆抗体
- 文献传递
- 人类疱疹病毒6型U94基因克隆、表达、纯化及抗体制备被引量：2
- 2007年
- 目的:制备人类疱疹病毒6型U94蛋白及其抗体。方法:PCR扩增U94基因,经测序后克隆到原核表达载体PGEX- 6p-1中。重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化,纯化的蛋白免疫动物制备抗血清。结果:成功地获得了高纯度的U94融合蛋白,纯度可达90%以上。用其制备多克隆抗体滴度可达1:100 000。结论:获得高纯度的U9d融合蛋白及其高效价的抗体。
- 尹全章姚堃王芳许文嵘徐建陈云周锋冯东举
- 关键词：人类疱疹病毒6型基因表达
- 人疱疹病毒7型pp85重组表达及抗体制备被引量：1
- 2007年
- 目的制备人疱疹病毒7型(HHV-7)pp85蛋白及其抗体。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法自HHV-7型YY5分离株中扩增出pp85基因,经测序后构建原核表达质粒PGEX-6p-1+pp85b。重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化后,免疫动物制备多克隆抗体,并通过免疫荧光法鉴定抗体的特异性。结果成功地获得了高纯度的pp85融合蛋白,纯度可达90%以上;免疫动物后制备的多克隆抗体效价可达1∶102400,该抗体能特异识别HHV-7抗原,而不与HHV-6反应。结论获得高纯度的HHV-7pp85融合蛋白及其高效价的抗体,将进一步应用于临床检验。
- 徐建姚堃窦洁许文嵘尹全章陈云周锋
- 关键词：基因表达病毒抗体
- EB病毒潜伏膜蛋白2A胞外区重组基因在大肠杆菌中的表达及其在血清学检测中的应用被引量：1
- 2007年
- 目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)胞外区重组基因的表达载体在大肠杆菌中表达,并将表达的蛋白用于EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者的血清学检测。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP2A胞外区重组基因的质粒pEC2A双酶切后,克隆到pET32a中。重组质粒经PCR、酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌(E.coli)BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性。用纯化的蛋白进行鼻咽癌患者血清学检测。结果:重组表达质粒经PCR及酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为40ku。以此为抗原能在鼻咽癌患者血清中检测到特异性的抗体。结论:成功获得了LMP2A胞外区重组基因表达的蛋白,纯化的蛋白可用于EBV相关鼻咽癌患者的血清学检测。
- 许文嵘姚堃陈云尹全章徐建周锋
- 关键词：EB病毒LMP2A重组基因血清学检测
