张国奇
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金兵团博士基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒E2抗原表位表达及验证被引量：2
- 2016年
- [目的]获得高效表达的重组牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)E2免疫抗原蛋白。[方法]应用软件分析BVDV-E2蛋白抗原表位,将富含抗原表位基因片段连接表达载体p GEX-4T-1,并转化至大肠杆菌(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot检测诱导表达蛋白,经镍柱分离纯化;以纯化蛋白为包被抗原,用间接ELISA检测抗原对免疫血清的反应性。[结果]成功克隆BVDV-E2抗原表位基因,并在大肠杆菌中高效表达,Western Blot和ELISA证实表达重组蛋白对BVDV阳性血清具有反应原性。[结论]获得大小为49.5 k Da的BVDV-E2抗原表位蛋白,并且该抗原稀释度在1:40,抗体稀释度在1:20时结合效果最佳。可用于后续的纳米抗体筛选的研究。
- 黄美玲吴鹏李天森张国奇杨霞陈创夫盛金良
- 关键词：抗原表位E2蛋白BLOT间接ELISA
- 绵羊肌肉生长抑制素MSTN原核表达及其纳米抗体文库的构建与鉴定
- 2014年
- 克隆绵羊肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因并在大肠杆菌中诱导表达,纯化重组蛋白免疫健康的双峰驼（Bactrian camel）,分离其外周血淋巴细胞提取总RNA,利用RT-PCR扩增骆驼重链抗体IgG2、IgG3的可变区（VHH）基因片段,将VHH片段与pCANTAB5E连接后电转入大肠杆菌TG1构建纳米抗体文库。结果显示,纳米抗体文库容量为9.5×10~5,挑取部分克隆进行测序分析,所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性,为进一步筛选绵羊MSTN的高特异性纳米抗体片段奠定了基础。
- 李尤简张国奇郭吉星陈新凯豆晓霞陈创夫盛金良
- 关键词：绵羊肌肉生长抑制素
- 噬菌体展示anti-BVDV纳米抗体文库的构建
- 牛病毒性腹泻/粘膜病(Bovine viral diarrhea/mucosal disease)是由牛病毒性腹泻病毒引起的、主要发生于牛的一种急性、热性传染病，其临诊特征为黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻。本病呈世界性分布，...
- 肖红冉郭吉星张国奇李尤简盛金良陈创夫
- 关键词：牛病毒性腹泻蛋白表达噬菌体
- 牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库的构建与鉴定被引量：4
- 2015年
- 通过构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)驼源重链抗体文库,并鉴定抗体文库的多样性,为筛选抗BVDV特异性重链抗体奠定基础。利用灭活的BVDV免疫双峰驼,多次免疫后测定血清抗体滴度,采集免疫后的血液并分离其外周淋巴细胞,抽提RNA,用RT-PCR法扩增重链抗体可变区(VHH)片段;将其克隆至载体pCANTAB5E,电转大肠杆菌TG1获得VHH抗体基因库,检测抗体库库容量,随机挑取克隆测序验证抗体文库多样性。结果表明,所构建的抗体文库的库容量为4.32×105;测序和聚类分析表明,抗体文库多样性丰富。利用辅助噬菌体救援后,得到噬菌体展示文库,测定滴度达1.3×1012 cfu/mL。
- 张国奇李尤简肖红冉黄美玲杨霞陈创夫盛金良
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒单域抗体VHH
- 不同浓度脂多糖诱导绵羊免疫器官中NK-Lysin基因表达的研究被引量：5
- 2014年
- 为研究病原体侵染动物机体时抗菌肽NK-Lysin在机体反应过程中所起到的防御作用及作用机理,本研究通过实时荧光定量PCR检测NK-Lysin在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)不同诱导条件下及不同免疫器官中的相对表达量,探讨绵羊抗菌肽NK-Lysin在免疫器官的生成和应答反应。构建目标基因NK-Lysin和内参基因GAPDH的克隆载体,绘制出标准曲线,检测NK-Lysin的表达量。结果显示,在LPS浓度为0.01、0.1、1、10μg/mL时,NK-Lysin mRNA表达量均在8h内达到最大值,NK-Lysin基因的表达量与LPS的浓度不存在正相关性;NK-Lysin mRNA在肩前淋巴结、脾脏及血液中均有不同程度的表达,脾脏中表达量与其他组织中的表达量相比差异极显著(P<0.01)。免疫器官能在较短时间内表达出抗菌肽NKLysin,使其参与机体先天性免疫应答反应。
- 张殿卿李蕊陈鹏博赵庆亮张国奇李尤简盛金良
- 关键词：实时荧光定量PCR脂多糖免疫器官
