张小飞
- 作品数：10 被引量：21H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓间充质干细胞体外分化为心肌样细胞过程中结构蛋白的发育被引量：2
- 2006年
- 目的探讨体外经5-氮杂胞苷诱导后的骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成心肌样细胞过程中肌联蛋白在心肌结构蛋白发育过程中的作用。方法构建针对Wistar大鼠TITINN2B区设计的重组质粒pSITITIN,将其分别转染入体外培养7d的新生大鼠心肌细胞和经5-aza诱导后2周的MSCs中,免疫荧光检测肌联蛋白、MHC、肌动蛋白、cTnT的表达。结果重组质粒pSITITIN转染入正常心肌细胞后,肌联蛋白的表达减弱(P<0.001);转染入经5-aza处理的MSCs后,肌联蛋白、cTnT的表达减弱,MHC、肌动蛋白的表达无明显变化。结论MSCs可以被5-aza诱导分化成心肌样细胞,但分化程度不高,尚不具备完整的收缩结构基础,肌联蛋白对心肌结构蛋白发育过程有重要的意义。
- 张小飞陈沅田杰李杨王金菊朱静刘官信
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞RNA干扰
- Titin基因在骨髓间充质干细胞体外分化为心肌细胞过程中的干预研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨结构蛋白即肌联蛋白titin基因在骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分化为心肌细胞过程中的作用及其对收缩蛋白基因β-肌球蛋白重链(β-myson heavy chain,β-MHC)和肌钙蛋白(ICardiac troponinI,cTnI)基因表达的影响。方法:无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得细胞,并进行体外纯化、扩增,后加入5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)进行诱导,分别在诱导后1天、4天、7天、14天在倒置显微镜下观察其形态变化,同时将携带有针对大鼠titinN2B区的siRNA重组质粒pSITITIN和针对人β-actin的siRNA重组质粒pSIACTIN转染入诱导后的MSCs,转染后24h,采用RT-PCR技术检测各时间点干扰前后结构蛋白titin基因和收缩蛋白β-MHC、cTnI基因在MSCs体外心肌细胞样分化过程中的动态表达。结果:1.诱导前titin、β-MHC、cTnI基因都有弱的表达,诱导后titin、β-MHC、cTnI基因的表达增强。2.重组质粒转染诱导后的MSCs,titin基因的表达减弱。3.titin基因的表达被干扰后,β-MHC基因的表达无明显变化,而cTnI基因的表达有减弱。结论:1.MSCs是一种具有心肌源性的种子细胞2.titin基因可能是MSCs向心肌细胞分化发育过程中有重要意义的基因,对cTnI基因的表达有调控作用。
- 王金菊田杰吕铁伟张小飞李扬朱静陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞RNA干扰分化TITIN
- pSITITIN载体的构建及表达
- 2006年
- 目的构建能阻断Wistar大鼠肌联蛋白表达的siRNA载体,为研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)向心肌细胞分化的过程中肌小节结构蛋白之间的相互关系打下基础。方法针对Wistar大鼠TITIN N2B区设计并构建重组质粒pSITITIN,针对人β-ACTIN设计并构建重组质粒pSIACTIN,利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养1周的新生大鼠心肌细胞和经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导后2周的MSCs中,免疫荧光检测肌联蛋白的表达。结果重组质粒pSITITIN转染入正常心肌细胞和经5-aza处理后的MSCs后,肌联蛋白的表达均减弱(P<0.01);而转染pSIACTIN后不影响肌联蛋白的表达。结论pSITITIN具有确切阻断肌联蛋白表达的效果。
- 张小飞陈沅田杰
- 关键词：骨髓间充质干细胞RNA干扰
- 心肌病大鼠骨髓间充质干细胞移植后差异表达基因cDNA文库的构建被引量：2
- 2007年
- 目的:构建心肌病大鼠移植骨髓间充质干细胞后心肌差异表达基因的cDNA文库,为后续的基因测序和信息学分析打下基础。方法:实验于2003-07/2005-03在重庆医科大学儿童医院儿科研究所和解放军第三军医大学野战外科研究所四室完成。实验材料:雌性Wistar大鼠54只,体质量(200±20)g,由解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心提供。实验方法:采用贴壁筛选法分离、扩增、纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,选用第三、四代的骨髓间充质干细胞用于移植实验。采用2.5mg/kg阿霉素腹腔注射法建立大鼠心肌病心力衰竭模型。并分为实验组与对照组:实验组于左心室前壁靠心尖处注射骨髓间充质干细胞,对照组注射培养基。采用抑制性消减杂交技术构建骨髓间充质干细胞移植1周后大鼠心肌组织的差减文库。结果:①对照组和实验组移植前左室射血分数与左室缩短分数相比无差异,实验组左室射血分数与左室缩短分数在移植2周时明显高于对照组(P>0.05,P>0.01)。②以正向消减产物为模板,在第33个循环才出现明显的G3PGH条带,而在非消减的对照中,第18个循环就能看见明显的条带,二者相差约15个PCR循环,同样在反向消减中二者相差也是15个PCR循环。按抑制性消减杂交方法的要求,只要二者之间相差5个循环以上就表明消减效率很高,可以用于下一步文库构建和筛选。③筛选出骨髓间充质干细胞移植后表达增高的cDNA克隆123个;表达降低的cDNA克隆28个。结论:运用抑制性消减杂交方法成功构建了骨髓间充质干细胞移植后心肌病大鼠的cDNA文库,为下一步研究打下基础。
- 李杨陈沅田杰邱俊朱静张小飞
- 关键词：抑制性消减杂交骨髓间充质干细胞心肌病
- 不同种类干细胞移植治疗心脏疾病的研究进展
- 2004年
- 各种类型的心脏疾病发展到终末期,由于受到心肌细胞结构和功能的不可逆损害,健存的心肌细胞有限的代偿不能满足机体需求,各种姑息保守治疗手段不能解决根本问题,而心脏移植又有供体来源有限、移植物抗宿主病反应等多方面的限制,给临床治疗提出了严峻的挑战。寻找一种更有效的治疗手段、开辟新的治疗途径成为必然。随着组织、细胞工程研究的不断深入,干细胞越来越受到更多学者的青睐。该文主要介绍几种干细胞移植治疗心脏疾病的研究进展。
- 张小飞陈沅田杰
- 关键词：造血干细胞移植心脏病
- Gcn5基因shRNA的载体构建及其对干细胞分化中组蛋白乙酰化修饰的干扰作用被引量：7
- 2006年
- 目的构建组蛋白乙酰化酶转录辅激活酶Gcn5基因表达的干扰shRNA质粒并初步检测其性质,为研究干细胞诱导分化过程中乙酰化修饰所起的调控作用奠定基础。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。脂质体共转染5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs),利用乙酰化酶特异性抗体Gcn5(H75)对转染细胞进行免疫化学检测,荧光显微镜图象分析系统,记数细胞,在同视野中记数转染阳性细胞以及干扰的阳性细胞,初步计算出其转染率和干扰效率。结果通过限制性内切酶酶切和DNA序列分析,重组质粒shRNA与设计相吻合;免疫细胞化学检测,发现转染阴性对照HK的细胞显现“饱满核”,乙酰化作用蛋白表达明显;转染shRNA质粒的细胞呈现十分明显表达减弱的“淡染核”或不表达的“空洞核”,转染率和干扰效率分别为93.7%和46.6%。结论构建的shRNA质粒能够达到干扰乙酰化作用的目的,为深入研究乙酰化作用奠定了一定的试验基础。
- 朱静王应雄张晓萍王金菊张小飞田杰
- 关键词：乙酰化修饰RNA干扰质粒间充质干细胞
- 骨髓间充质干细胞移植改善心肌病大鼠心功能相关基因的初步筛选被引量：8
- 2006年
- 目的筛选骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcellsMSCs)移植改善心肌病大鼠心功能的相关基因,初步分析相关基因在MSCs改善心功能中的作用。方法用贴壁筛选法分离、扩增大鼠MSCs,并移植入经阿霉素腹腔注射构建的大鼠心肌病模型中。然后利用抑制性消减杂交技术(supressionsubtractivehybridization,SSH)筛选移植MSCs后大鼠心肌组织差异表达的相关基因,并进行分析。结果成功建立了心肌病大鼠模型,并进行了MSCs心肌移植,筛选出移植MSCs后心肌细胞表达上调的基因12条、表达下调的基因4条。经基因的序列检索分析显示,MSCs移植入大鼠心肌后与线粒体合成有关的基因和与心肌的收缩蛋白合成有关的基因表达上调;表达下调的基因分别为肌小节的线粒体肌氨酸激酶基因;核糖体的磷蛋白P2基因;α-晶状体蛋白基因;NADH-辅酶Q氧化还原酶Fe-S蛋白7基因。结论MSCs移植后可能通过刺激与能量合成相关和心肌收缩相关基因的表达,一方面促进心肌能量合成,另一方面MSCs可能分化为新的心肌细胞,增加心肌收缩力,从而改善心肌组织功能。
- 李杨陈沅田杰邱俊朱静张小飞
- 关键词：双杂交系统技术间质干细胞移植心肌疾病
- 骨髓间充质干细胞体外心肌样细胞分化过程中结构蛋白发育的实验研究
- 目的：构建能干扰正常心肌细胞结构蛋白titin的重组质粒，将其转染入经5-aza诱导后的BMMSCs，观察BMMSCs能否进一步分化成心肌样细胞并表达titin、肌球蛋白重链(myosinheavychain，MHC)、...
- 张小飞
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞RNA干扰
- 文献传递
- 咪达唑仑、芬太尼复合麻醉下高强度聚焦超声治疗声功率与耐受性的相关性研究
- 目的：将咪达唑仑、芬太尼复合麻醉应用于家兔高强度聚焦超声治疗，观察此类麻醉方式应用于高强度聚焦超声治疗的有效性、安全性，并探讨高强度聚焦超声治疗中声功率对治疗耐受性的影响，以指导临床麻醉用药方案的制定。
材料和...
- 张小飞
- 关键词：咪达唑仑芬太尼复合麻醉高强度聚焦超声声功率耐受性
- 文献传递
- 大鼠MSCs诱导分化为心肌样细胞时离子通道基因的表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外向心肌样细胞分化过程中L-型钙通道(α1C)和瞬间外向钾通道(kv4.3)基因的表达。方法无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得MSCs,体外培养传代纯化,5-氮杂胞苷(5-aza)诱导24 h,显微镜下观察诱导前后形态变化,RT-PCR鉴定α1C和kv4.3基因的表达。结果kv4.3基因诱导前有弱的表达,诱导后1、4、7和14 d表达明显逐渐增强(P<0.05);α1C基因诱导前有较强的表达,诱导后1、4、7和14 d表达却明显逐渐减弱(P<0.05)。结论α1C和kv4.3基因在维持MSCs的诱导分化过程中发挥重要作用。
- 王金菊田杰吕铁伟张小飞朱静李扬陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞5-氮杂胞苷离子通道
