张明杰
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 供职机构：西北工业大学生命学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- 模拟失重对人自然杀伤细胞毒活性的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究模拟失重状态下人NK细胞的细胞毒活性并对其活性变化的机制进行初步的探讨。方法采用高均一性的人NK细胞作为模型,以回转细胞培养模拟失重状态。人NK细胞经历48h和72h的模拟失重后,测定其杀伤率,并在mRNA水平检测NK细胞穿孔素基因、激活性受体基因以及抑制性受体基因的表达水平。结果模拟失重48h和72h的人NK细胞,其杀伤率比对照组分别下降了16%(P<0.05)和26%(P<0.05)。通过对模拟失重72hNK细胞mRNA的定量分析,发现激活性受体NKG2D基因表达下调,抑制性受体NKG2A基因表达上调,而穿孔素基因表达没有显著性变化。经历72h模拟失重的人NK细胞,回到正常条件下培养6d后,其细胞毒活性才恢复至正常水平。结论模拟失重可以导致人NK细胞杀伤活性的下降,其原因可能与NKG2A及NKG2D受体表达的变化有关。
- 黄庆生李琦黄勇商澎张明杰
- 关键词：失重模拟NK细胞细胞毒活性NKG2D受体
- 一组生物活性多糖对人NK细胞免疫活性的影响被引量：6
- 2013年
- 目的:探讨体外环境中灰树花、香菇、灵芝、枸杞多糖和酵母葡聚糖对人自然杀伤(NK)细胞的形态、增殖、细胞毒活性和IFN-γ分泌水平的影响。方法:采用经体外扩增的高纯度人NK细胞为模型,将5种多糖以100mg/L和50mg/L两个质量浓度组分别对其作用72h后检测NK细胞的形态、增殖、细胞毒活性和IFN-γ分泌水平。结果:经过多糖处理后的NK细胞增殖情况与对照组相比并未发生明显改变,但细胞形态有一定的变化,且细胞毒活性和IFN-γ分泌水平有所提高。其中100mg/L和50mg/L的灵芝多糖处理能将NK细胞毒活性分别提高5.89%和9.1%(P<0.05),且50mg/L的灰树花多糖和枸杞多糖也能将NK细胞毒活性分别提高5.7%和6.9%(P<0.05)。另外50mg/L的灰树花多糖与香菇多糖处理能将NK细胞IFN-γ的分泌水平分别提高255pg/mL和202pg/mL(P<0.05)。结论:灰树花、灵芝和枸杞多糖在体外实验中能在一定程度上提高NK细胞的细胞毒活性,但这种作用并不是通过促进细胞增殖实现的。另外灰树花和香菇多糖也能通过促进NK细胞对IFN-γ的分泌,影响NK细胞的免疫调节功能。
- 李琦梅其柄张明杰黄庆生
- 关键词：人NK细胞多糖细胞毒活性IFN-Γ
- 酵母表达肌肉生长抑制素前肽发酵工艺的优化
- 2009年
- 突变型肌肉生长抑制素前肽(MMP)在治疗肌肉萎缩症和培育多肌肉牲畜上有着广泛的应用前景。以重组表达MMP的毕赤酵母工程菌为模式,对该工程菌在30L发酵灌中培养与诱导条件进行优化,建立该表达系统大规模发酵的最佳生产条件,以期获得最短的发酵时间和最低的生产损耗。毕赤酵母发酵过程通常分为3个阶段:分批培养(基础培养)阶段、分批补料培养阶段、诱导阶段。对发酵过程的第2与第3阶段进行了优化。通过分步提高甘油流加速度:以20mL/L·h-1的速度流加5h、以30mL/L·h-1的速度流加5h、以50mL/L·h-1速度流加14h,并通入纯氧气,维持60%的溶氧度,使甘油流加阶段的时间从常规的48h缩短至24h,即只需24h即可达到常规方法48h才能达到的菌体密度。在诱导表达阶段,通过甘油与甲醇的交替流加,同时对发酵液中甲醇含量的实时监测,保持甲醇的浓度不超过0.5%的高限,使诱导的时间从常规的72h缩短至36h,而且表达量提高了约1倍。优化后,整个发酵周期从120～148h缩短至72～80h,显著提高了MMP蛋白的生产效率。
- 黄庆生李琦黄勇商澎张明杰
- 关键词：发酵毕赤酵母肌肉生长抑制素
- K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果
- 2014年
- 目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果。方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合IL-2培养方案对NK细胞进行扩增和活化,以流式细胞术检测NK细胞的扩增效果和NK细胞表面受体表达水平,CCK-8法检测扩增后NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性和ADCC活性,CCK-8法检测在培养方案扩增末期加入TKD多肽对NK细胞的活化效果。结果:对于健康志愿者的NK细胞,新建立扩增培养方案可使NK细胞在PBMC中的比例提高至(93±3)%;使NK细胞中活化性受体NKG2D、CD94、NKp30、NKp44和NKp46的比例分别提高60%、40%、20%、40%和63%,而抑制性受体的表达变化不大;扩增后NK细胞对白血病细胞K562、肺癌细胞A549、肝癌细胞SMMU-7721和乳腺癌细胞MCF-7的杀伤活性分别提高了19%、29%、26%和28%,其ADCC活性从(33±5.6)%上升至(65±12)%;方案中增加TKD可使NK细胞的杀伤活性从(86±4)%提高至(96±2)%。对于肿瘤患者的NK细胞,新扩增方案使其在PBMC的比例提高至(90.0±8.0)%,其对K562细胞的杀伤活性提高了17%左右。结论:K562工程细胞联合IL-2扩增方案可高效扩增NK细胞,明显激活其杀伤活性,扩增和活化的NK细胞可满足临床治疗的需要。
- 叶琳洁黄庆生李琦张明杰马旭东杨慧师俊玲
- 关键词：细胞毒活性体外扩增活化性受体抑制性受体
- 人NK细胞体外高效扩增的实验研究被引量：10
- 2008年
- 目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法。方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、IL-18、4-1BBL3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞。IL-15、IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3种蛋白在K562细胞中表达后锚定于细胞膜表面。其次,以照射致死的该K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,通过与IL-2的共刺激作用,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。结果:经过21d的刺激培养后,CD56+CD3-细胞数量扩增了(520±75)倍。CD56+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的7%±4%到扩增后占总细胞比例的93%±3%。PBMC中的T细胞基本上没有得到扩增,扩增后的细胞中CD3+细胞只占2%±1.2%。扩增的细胞具备了NK细胞的基本特征和生物学特性,除了CD56+CD3-外,还对扩增的NK细胞上NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30、CD94、CD158b、CD158a、NKB1、NKAT2等标记进行了验证。细胞毒实验表明,在效应细胞∶靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了95%±4%。结论:建立的NK细胞体外扩增方法,达到了较高的扩增水平,且扩增的细胞活性较好。本方法以PBMC为原始材料,能够实现NK细胞体外的大规模制备,这将为抗病毒与抗肿瘤的NK细胞免疫治疗奠定基础。
- 黄庆生李琦黄勇商澎张明杰
- 关键词：扩增自然杀伤细胞白细胞介素15白细胞介素184-1BB配体
- 白细胞介素对NK细胞的调控作用及其分子机制被引量：6
- 2012年
- 自然杀伤(natural killer,NK)细胞是一种大颗粒淋巴细胞,能够介导非特异性免疫应答,在机体抗肿瘤、抗感染等过程中发挥重要作用。白细胞介素通过影响NK细胞的分化、成熟、增殖和细胞毒作用参与对其免疫功能的调控。本文综述了白细胞介素对NK细胞功能的调控作用及其可能的分子机制。
- 李琦梅其柄张明杰黄庆生
- 关键词：自然杀伤细胞白细胞介素免疫调节
- 尾悬吊大鼠比目鱼肌‘肌肉生长抑制素’基因的表达水平被引量：5
- 2010年
- 目的确定尾悬吊大鼠比目鱼肌组织中‘肌肉生长抑制素’(myostatin,MSTN)基因的表达水平。方法在测定尾悬吊14、30 d大鼠后肢比目鱼肌相对湿重的基础上,采用real-time RT-PCR方法,在基因水平对尾悬吊14、30 d大鼠比目鱼肌中MSTN mRNA水平进行检测。结果尾悬吊14、30 d后比目鱼肌的相对湿重分别下降了11%和19%。real-time RT-PCR结果表明,大鼠尾悬吊14、30 d后,比目鱼肌中MSTN mRNA表达水平均有所提高,分别是对照大鼠的2.2倍和3.5倍。结论尾悬吊大鼠后肢去负荷后可诱导抗重力肌-比目鱼肌组织中MSTN mRNA表达水平的上调。
- 黄庆生李琦张明杰
- 关键词：肌肉生长抑制素失重比目鱼肌
- 体外扩增人自然杀伤细胞的抗肿瘤活性研究
- 目的 为了比较人外周血单个核细胞(PBMC)中NK细胞经体外扩增与活化前后的活性以及为了初步观察肿瘤患者NK细胞扩增后的应用效果。方法 首先,采集健康人PBMC,对其中的NK细胞进行扩增与活化。对扩增活化前后的NK细胞在...
- 叶琳洁黄庆生李琦张明杰杨慧师俊玲
