张福萍
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经元蛋白14-3-3βcDNA克隆及在原核细胞中的表达被引量：5
- 1999年
- 目的 利用分子克隆技术在原核细胞中研究 14 3 3 β蛋白的表达。 方法 从神经母细胞瘤细胞系中提取细胞总RNA ,RT PCR扩增 14 3 3 βcDNA ,与克隆载体pGEM T连接后测序 ,再次亚克隆至pGEX 2T表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 5 3 0 0 0左右 ,能与 14 3 3 β蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论 人 14 3 3 β蛋白可在原核细胞中表达 ,具有良好的免疫反应性 ,为建立克罗伊茨费尔特 雅各布病 (creutzfeld JacobDISEASE ,CJD)的辅助诊断方法及研究 14 3 3 β蛋白在CJD病分子致病机制中的作用打下了基础。
- 张福萍董小平赵霞赵同兴洪涛
- 关键词：原核细胞分子克隆
- 牙龈卟啉单胞菌prtH基因克隆及其多态性的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 建立牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonasgingivalis,P g)prtH全基因序列的克隆株 ,分析 5株不同P g菌株中prtH基因多态性。方法 利用PCR技术获得prtH全基因序列 ,克隆至载体pGEM T ;设计 3对引物 ,用PCR的方法扩增prtH基因的不同区域 ;以生物素标记prtH基因序列为特异性探针 ,用斑点杂交和Southern印迹杂交进一步分析prtH基因的多态性。结果 酶切分析和DNA测序证实重组质粒pGEM T prtH的插入片段为prtH基因序列 ;核酸分子杂交显示菌株W 381和ATCC 332 77杂交类型一致 ,菌株ATCC 4941 7和菌株 1 4 3 2呈现各自不同的杂交条带 ,而菌株 47A 1中未检测到prtH基因。结论 不同P g菌株中prtH基因序列存在差别 ,这种基因多态性提示不同P g菌株毒力大小可能存在差异。
- 郑颖杨圣辉张春梅周伟张福萍董小平
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌克隆多态性
- 人PrP特异性多肽抗体的鉴定和应用被引量：3
- 2001年
- 目的 为了进一步检测制备的人PrP特异性多肽抗体的免疫反应性和特异性。方法 构建人PrPN端缺失原核表达质粒 ,表达并纯化N端缺失的PrP蛋白 ;Westernblot检测多肽抗体与纯化的各种人全长、N端缺失以及C端缺失PrP蛋白的反应能力 ;免疫荧光法检测多肽抗体与真核表达的人PrP蛋白反应能力 ;提取Creutzfeldt Jakob病 (CJD)病人以及Scrapie感染的仓鼠脑组织 ,Westernblot检测多肽抗体与致病性PrP res蛋白的反应能力。结果 所制备的PrP多肽抗体能与原核及真核细胞表达的各种不同长度的PrP蛋白反应 ,同时还能特异性识别Scrapie感染鼠脑组织中和CJD病人脑组织中的PrP res蛋白。结论 多肽抗体具备良好的免疫反应性和特异性 。
- 孙宪锋董小平张宝云张福萍周伟洪涛
- 关键词：羊瘙痒病
- 氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2002年
- 目的 建立氯霉素乙酰基转移酶 (chloramphenicolacetyltransferase ,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列 ,插入到原核表达质粒pGEX 2T中 ,在大肠埃希菌DH5α中诱导表达 ;以纯化的融合蛋白GST CAT为抗原免疫实验用兔 ,得到的CAT抗血清进行生物素标记 ,并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法。构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒 ,体外瞬时转染真核细胞 ,提取胞质蛋白 ,以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS PAGE显示表达的GST CAT融合蛋白相对分子质量约为 5 40 0 0 ;制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白 ;在不同启动子及调节序列的控制下 ,利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导 2～ 8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性 ,以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响 。
- 高晨侯星生张福萍周伟袁育康董小平
- 关键词：病毒抗体酶联免疫吸附测定人乳头状瘤病毒
- 14-3-3蛋白多克隆抗体的制备和应用被引量：3
- 2000年
- 目的 制备 14 3 3特异性抗体并试用于朊病毒病患者脑脊液标本检测。方法 以原核细胞表达的谷光甘肽 S 转移酶 (GST) 14 3 3蛋白为抗原 ,免疫家兔。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)及Westernblot方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果 ELISA检测显示所制备的抗体与纯化的GST 14 3 3蛋白反应效价为 1∶40 96 0 0 0 ;Westernblot结果证实所制备的抗体可有效识别原核细胞表达的及脑组织提取物中存在的 14 3 3蛋白。对 2例具有较为典型脑电图改变、临床可疑诊断为克罗伊茨费尔特 雅各布病 (Creutsfeldt Jacobdisease,CJD)病人的脑脊液检测发现其 14 3 3蛋白为阳性 ;另外 4例伴有痴呆、昏迷症状病人脑脊液 14 3 3蛋白为阴性 ,其中 3例进行的脑组织活检显示致病性朊蛋白 (PrPSc)阴性 ,无典型CJD病理改变 ;其余 2 4例无痴呆症状的脑炎及脑病病人脑脊液 14 3 3蛋白均为阴性。以上结果与用标准 14 3 3抗体所获结果完全吻合。结论 利用原核细胞表达的GST 14 3 3蛋白可有效地诱导免疫动物产生特异性抗体 ,所制备的抗体可用于CJD病人脑脊液 14 3 3蛋白的检测。
- 张福萍董小平孙宪锋周伟赵同兴洪涛
- 关键词：蛋白类朊病毒病脑脊髓液多克隆抗体
- 人S100蛋白的表达及其抗血清的制备和脑脊液中S100含量测定方法的建立被引量：2
- 2002年
- 目的 建立定量检测脑脊液 (CSF)及血清中S10 0蛋白的方法 ,探讨S10 0蛋白的检测在辅助诊断克 雅病 (CJD)中的应用。方法 利用脑cDNA文库 ,经PCR获得了S10 0基因并克隆至原核表达载体pGEX 2T上 ,在大肠埃希菌中表达了谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) S10 0融合蛋白 ;融合蛋白经亲和纯化后 ,免疫家兔 ,制备抗体 ;抗体经纯化后 ,用生物素 (BNHS)标记 ,建立了可定量检测S10 0蛋白的生物素 亲和素系统ELISA方法 ,并初步用于临床脑脊液的检测中。结果 所表达的GST S10 0蛋白相对分子质量约为 35 0 0 0 ,以其为抗原制备的S10 0特异性抗血清具有良好的免疫反应性。建立了定量检测脑脊液中S10 0蛋白的双抗体夹心ELISA方法 ,对 3例“可能性的CJD”患者 (14 3 3蛋白阳性 )和 15例无痴呆症状患者脑脊液进行检测 ,结果显示 ,3例CJD患者脑脊液S10 0含量均超过2 90 0 μg/L,而在无痴呆症状患者组中 14例患者脑脊液S10 0含量都低于 0 .180 μg L。对正常人和CJD患者血清进行检测 ,显示S10 0蛋白含量个体间差异很大。结论 所建立的方法可用于脑脊液中S10 0蛋白的检测 ,进一步扩大标本量有助于明确脑脊液中S10 0蛋白的检测在辅助诊断CJD中的价值。
- 张福萍张瑾周伟董小平洪涛
- 关键词：脑脊髓液酶联免疫吸附测定CJD
- HPV16 L1/E6-E7基因嵌和DNA疫苗质粒构建及其在CHO细胞表达的初步研究被引量：2
- 2003年
- 目的 构建HPV 16L1 E6、HPV16L1 E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法 运用PCR大引物定点诱变法逐个突变E6、E7基因与转化作用有关的位点 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定突变基因正确后 ,分别均与L1基因共同连接并至真核表达载体pVAX1,得到真核表达质粒1MpVAX1 L1E6,2MpVAX1 L1E6,1MpVAX1 L1E7,2MpVAX1 L1E7,3MpVAX1 L1E7。运用磷酸钙法将所获得的质粒转染CHO细胞 ,以HPV 16L1特异性单克隆抗体进行转染细胞中L1蛋白表达的ELISA和免疫组化的检测。结果 ELISA检测显示转染各种L1 E6、L1 E7融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P N值均 >2 .1;免疫组化检测在胞质胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论 所构建的L1 E6、L1 E7融合蛋白表达质粒可在体外表达L1蛋白 。
- 郑瑾张福萍司履生董小平王一理
- 关键词：DNA疫苗定点诱变
