徐湘民
- 作品数：136 被引量：1,130H指数：19
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学文化科学更多>>
- 人乳头瘤病毒感染基因亚型分析被引量：5
- 2006年
- 目的分析HPV各基因亚型感染情况,探讨HPV亚型感染与宫颈病变的关系。方法应用美国Digene公司杂交捕获法(Hybrid Capture Ⅱ,HC Ⅱ)对我院宫颈疾病专科门诊病例进行高危型HPV筛查,从中随机抽取213例阳性标本应用PCR结合反向寡核苷酸探针斑点杂交技术(reverse dot blot,RDB)进行HPV基因亚型分析。结果213例HCⅡ法检测为高危型HPV阳性的标本中被PCR/RDB法检测出具体HPV高危型别的有195例。共检测出17种HPV型别(包括高危型13种和低危型4种)。具体HPV亚型检出率分别是16型(32.3%)、52型(23.1%)、58型(18.0%)、31型(11.8%)、68型(10.3%)、33型(9.7%)、53型(8.2%)、18型(8.2%)、66型(6.2%)、CP8304型(4.6%)、6型(3.6%)、59型(3.1%)、45型(2.1%)、39型(2.1%)、11型(2.1%)、56型(1.5%)、51型(1.0%)。单一HPV亚型感染及2种、3种和4种HPV亚型混合感染检出率分别为59.5%、30.8%、8.6%和1.1%。结论高危型HPV感染检出率最高的HPV亚型为HPV16型(32.3%),其次为HPV52型(23.1%),检出率最低的两种亚型分别是HPV56型(1.5%)和HPV51型(1.0%)。HPV58型这种世界范围内少见的一种高危型HPV在中国高危型HPV感染的患者中检出率(18.0%)却并不低。单一高危型HPV亚型感染是引起宫颈病变的主要原因,而多种HPV亚型混合感染在宫颈病变中的作用也不可忽视。
- 朱岩谢建生徐湘民蔡筠李晴龙峰
- 关键词：乳头瘤病毒基因分型多聚酶链式反应反向斑点杂交
- α^(-SEA)型地中海贫血标志蛋白zeta链蛋白的克隆表达与鉴定被引量：9
- 2005年
- 目的克隆zeta链蛋白基因并在大肠杆菌中表达,经纯化与鉴定,为建立α-SEA型地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原。方法从经处理的K562细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术反转录并将其克隆到pET-21a(+)载体中,测序验证。融合蛋白在大肠杆菌中表达,采用Probond树脂柱纯化融合蛋白,用WesternBlotting和ELISA鉴定。结果成功构建了融合表达载体pET-zeta,融合蛋白得到可溶性表达及纯化,经Westernblotting和商品ELISA试剂盒鉴定显示重组蛋白为zeta链蛋白。结论克隆表达并获得了纯化zeta链蛋白,为地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原。
- 唐磊赵文忠卢晓徐湘民富宁
- 关键词：ZETA克隆
- β地中海贫血的大人群筛查及产前诊断被引量：73
- 1996年
- 为了探索在我国实施控制β地中海贫血（β地贫）重症患儿出生的预防计划的实践模式，对在广州市妇婴医院例行产前检查的６７３１例孕妇及其配偶（共１３４６２人）进行血液学筛查，检出β地贫阳性病例４５２人，发病率为３．３６％，采用能检测中国人１８种β地贫突变的快速反向点杂交法分析上述阳性样品，４４６例被确定了基因型，检出１１种β地贫突变，另有６例未发现突变，其中１例经ＤＮＡ序列分析后确定为一种世界上未见报道的新突变──密码子３７（ＴＧＧ→ＴＡＧ）琥珀突变。在上述人群中筛出双方均为β地贫携带者的初孕夫妇１２对（占０．１８％），通过遗传咨询，对其中１０个家庭的１２个胎儿进行了产前诊断，确定正常胎儿２例，β地贫杂合子５例，重症患儿（双重杂合子）４例，另１例为不完全诊断（已排除重症的可能）．对确诊的重症β地贫患儿于诊断后２周内终止妊娠。这是国内首次在系统筛查基础上完成的预测性产前诊断报告。
- 徐湘民廖灿刘忠英黄以宁张基增李坚彭朝辉邱洛琳蔡旭恒
- 关键词：Β-地中海贫血遗传筛查产前诊断流行病学
- 用反向点杂交法对广东地区35例重型β地中海贫血患儿及双亲的基因突变研究被引量：23
- 1996年
- 为探讨临床对β地中海贫血（β－地贫）的快速基因诊断方法，应用ＰＣＲ反向点杂交（ｒｅｖｅｒｓｅｄｏｔｂｌｏｔ，ＲＤＢ）技术，对广东地区３５例重型β地贫患儿及其双亲的基因突变特征进行了研究。结果显示：（１）广东重型β地贫基因突变可见７种类型：ＣＤ４１－４２（－ＴＣＴＴ），ＩＶＳ２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）。ＴＡＴＡｂｏｘ－２８（Ａ→Ｇ），ＣＤ１７（Ａ→Ｔ），βＥ（２６）（Ｇ→Ａ），ＣＤ７１－７２（＋Ａ）及ＣＤ１４－１５（＋Ｇ），其结构比依次为：４０％，２８．６％，１１．４％，７．１％，７．１％，７．１％，４．３％及１．４％，和１３种基因组合形式；（２）基因突变类型不同致临床表型不同，β°纯合子临床多表现重症，发病早（３～６个月），靠输血维持生命；β°／β－（Ｅ或－２８）双重杂合子多表现中间型或重型，发病年龄较晚，贫血较轻，输血较少，ＰＣＲ－ＲＤＢ技术不需依赖同位素、操作简便、快速，宜于临床推广应用。
- 钱新华徐湘民程少杰刘忠英朱卫国
- 关键词：Β-地中海贫血反向点杂交
- 反向点杂交法用于80例β地中海贫血的快速产前诊断被引量：15
- 1996年
- 为探讨反向点杂交法（ＲＤＢ）在β地中海贫血（β地贫）基因诊断中的优越性，应用该方法对７６个家庭的８０例β地贫高风险胎儿进行产前诊断。在８０例被检胎儿中，完全诊断的有７７例：包括正常个体２２例；β地贫杂合子４９例；双重杂合子４例及纯合子２例。另有３例为不完全诊断，其中２例被排除了重症的可能；余１例有１／２的机会为β地贫双重杂合子。ＲＤＢ法可同时筛查１８种中国人β地贫突变，且操作简便快速。
- 廖灿徐湘民黄以宁刘忠英李坚刘忠英李坚彭朝晖蔡旭恒
- 关键词：地中海贫血产前诊断反向点杂交
- 一例罕见的Chinese Gγ（Aγδβ）°-thal纯合子的基因检测及临床表型分析被引量：2
- 2018年
- 目的对1例可疑的地中海贫血患者进行鉴定，明确其基因型。方法应用检测已知地中海贫血突变的常规方法[反向点杂交与跨越断裂点PCR（Gap-PCR）]结合多重连接探针扩增检测患者的基因型，设计相应的引物，建立检测该突变的Gap-PCR方法。结果 患者的基因型被确定为-Chinese Gγ（Aγδβ）°/-Chinese Gγ（Aγδβ）°，其血液学特征和临床症状偏向于中重度贫血。所建立的Gap-PCR体系能够对Chinese Gγ（Aγδβ）°-thai进行准确的检测。结论Chinese Gγ（Aγδβ）°-thal在中国南方地区具有一定的发生率，应引起重视。应用Gap-PCR体系能够对该突变进行简单快捷的检测，适于推广。
- 张强张艺佳徐惠玲许明丽温晓君徐湘民周万军
- 关键词：CHINESE地中海贫血
- 一种快速检测α-珠蛋白基因簇拷贝数变异的方法
- 本发明公开了一种快速检测α-珠蛋白基因簇拷贝数变异的方法，包括以下步骤：设计一对通用引物，三种TaqMan探针，三对加尾引物，样本检测：分别以待检基因和标准基因为模板，加入三对加尾引物，进行首轮巢式荧光定量PCR，得到首...
- 周万军徐湘民
- 应用温度梯度凝胶电泳分析非缺失型〆-地中海贫血突变被引量：16
- 2001年
- 目的 建立用于非缺失型 α-地中海贫血 (α-地贫 )突变筛查的温度梯度凝胶电泳(temperature gradientgel electrophoresis,TGGE)技术。方法 以不同基因型人基因组 DNA为模板 ,选择性扩增全长 α2 -珠蛋白基因 ,继以巢式 PCR扩增突变热点区域 ,然后建立并优化 TGGE参数。在此基础上 ,筛查表型阳性的 15例非缺失型 α-地贫疑诊样品 ,阳性样品经 DNA序列测定确认突变。结果 建立了分析5 43bp PCR片段和 α2珠蛋白基因全长 10 85 bp片段的 TGGE技术 ,可检测出中国人群中常见的两种 α-地贫点突变 :Hb Constant Spring(Hb CS)和 Hb Quong Sze(Hb QS)及 Hb Westmeadα2 CD12 2 CAC→ CAG(His→ Gln)。15例样品中 ,10例为 Hb CS,2例为 Hb QS,2例为 Hb Westmead,1例为新的与 Hb H病相关的突变 α2 CD31AGG→ AAG(Arg→ L ys)。结论 所建立的 PCR- TGGE技术可用于非缺失型 α-地贫点突变和
- 赵永忠徐湘民杨阳
- 关键词：Α-地中海贫血
- 中分子物质的分离方法
- 1990年
- 近年来各种围绕中分子物质(MMS)组分分离的方法应运而生,对揭示MMS 的组成,化学本质及其生物医学活性等起了重要作用。本文沿循中分子研究中分离方法的发展脉络,重点叙述了作为基本分离技术的二期层析法和近年来发展起来的高效液相层析技术(HPLC)。并对各种方法在中分子组分分离、鉴定中所取得的进展,中分子分离方法的发展趋势及分子量标化等问题作了分析阐述。
- 徐湘民王铁丹
- 关键词：中分子物质尿毒症
- 人乳头状瘤病毒亚型PCR/RDB基因分析方法的建立及初步评价被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种基于PCR和RDB技术的临床实用、价格低廉、能对目前已知的绝大多数高危型及常见的低危型人乳头状瘤病毒(HPV)进行基因分型的检测方法(PCR/RDB法),并对该方法用于HPV分型检测做出方法学评价。方法根据HPV基因序列设计可扩增包含目前常见的HPV型别的通用引物,并根据14种HPV高危亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)和7种低危亚型(6、11、42、43、44、53、CP8304)的序列特点设计针对这21种HPV型别的型特异性探针。21种HPV亚型标准毒株PCR产物与HPV型特异性探针进行杂交,建立一次性对21种HPV亚型进行分型的PCR/RDB检测方法。将PCR/RDB法用于213例经杂交捕获法(hybird capture,HCⅡ)检测为高危型HPV阳性样本的HPV型别诊断。结果建立的PCR/RDB法均能鉴定出21种HPV亚型,无假阳性和假阴性结果,未出现交叉反应;含有相当于10个以上HPV分子的质粒标准品均能成功获得PCR产物检测的阳性结果;盲法分析结果显示,195例经HCⅡ法检测为高危型HPV阳性的样品被PCR/RDB检测出具体的HPV型别,共检测出13种高危型HPV亚型,检出率分别是32.31%(16型)、23.08%(52型)、17.95%(58型)、11.79%(31型)、10.26%(68型)、9.74%(33型)、8.21%(18型)、6.15%(66型)、3.08%(59型)、2.05%(45型)、2.05%(39型)、1.54%(56型)、1.03%(51型)。单一HPV亚型感染及2种、3种和4种HPV亚型混合感染构成比分别为59.46%、30.81%、8.65%和1.08%。18例未能检测出HPV的具体型别,PCR/RDB法与HCⅡ法的高危型HPV检测结果的符合率为91.5%(195/213)。结论PCR/RDB法与HCⅡ法高危型HPV检测阳性符合率高,并可一次性分析出21种HPV型别,是一种准确、高效、经济的HPV型别检测方法,可用于HPV的常规基因型分型诊断及人群筛查。
- 朱岩谢建生徐湘民蔡筠李晴
- 关键词：基因分型聚合酶链反应反向点杂交
