李前瑞
- 作品数：12 被引量：55H指数：4
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- 羊口疮抗体检测试剂盒的制备方法
- 本发明涉及一种羊口疮抗体检测试剂盒的制备方法。其利用犊牛睾丸原代细胞，通过羊口疮病毒的连续传代培养，获得的第六代细胞培养液作为原核克隆的模板，通过原核表达获得可溶性表达蛋白，其表达的蛋白作为包被抗原，制备羊口疮抗体检测试...
- 陈德坤李杰李前瑞田婷婷姚运亮许君艳罗军曹斌云
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- 预防山羊葡萄球菌乳房炎的基因工程疫苗制备方法及应用
- 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种预防山羊葡萄球菌乳房炎的基因工程疫苗制备方法及应用。本发明通过以下步骤完成：1）扩增目的基因ClfA、ClfA及Sbi；2）构建pCI- Hla/ClfA-A/ Sbi-I-I...
- 陈德坤许君艳姚运亮田婷婷李前瑞罗军曹斌云
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- 羊口疮病毒PCR检测方法的建立与应用
- 羊口疮疾病是由羊口疮病毒引起的一种急性、接触性、嗜上皮性传染病。患病羊主要表现在口唇部严重溃烂、结痂，导致其采食困难，营养摄入不足，大大降低了成年山羊生产性能和羔羊的生长发育。羊口疮近年来在我国各地山羊养殖场发生的频度不...
- 李前瑞
- 关键词：奶山羊羊口疮病毒多重PCR
- 文献传递
- 羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察被引量：14
- 2013年
- 从杨凌奶山羊养殖场羊口疮临床症状典型的奶山羊唇部结痂部位分离病毒,采用羊口疮病毒敏感的牛睾丸原代细胞进行病毒的增殖培养,将不同稀释度的羊口疮病毒液接种到牛睾丸原代细胞中,测定病毒滴度。将羊口疮病毒液用4mL/L甲醛溶液灭活48h,取少量样品,鉴定病毒灭活效果,并进行灭活疫苗的安全性进行检测。待孕羊分娩前42、28、14d分别免疫1次,均为颈部皮下注射,然后利用固定病毒稀释血清法进行中和抗体的测定。结果显示,从羊口疮结痂中成功地分离出了病毒,其能够引起原代犊牛睾丸细胞病变;测得羊口疮病毒液滴度为108.1 TCID50/mL;灭活的病毒不能引起犊牛睾丸细胞病变,也未导致羔羊发生羊口疮;灭活病毒免疫孕羊后的中和抗体效价为1∶24,对羔羊的保护率为60.1%。
- 田婷婷李杰姚运亮李前瑞许君艳赵燕青陈德坤
- 关键词：羊口疮病毒灭活疫苗免疫效果
- 羊口疮病毒B2L和VIR基因原核表达及抗原性鉴定被引量：10
- 2013年
- 为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。用灭活的羊口疮病毒免疫家兔,制备多克隆抗体,Western blot、ELISA鉴定B2L和VIR蛋白的抗原性。结果显示B2L、VIR蛋白均能与兔抗羊口疮病毒抗血清结合,证明B2L、VIR蛋白具有与羊口疮病毒共同的B细胞表位。
- 李杰李前瑞田婷婷许君艳姚运亮陈德坤
- 关键词：羊口疮病毒B2L基因原核表达抗原性
- 羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立被引量：19
- 2013年
- 为检测羊口疮病毒,本研究设计了针对羊口疮病毒B2L、F1L和VIR 3个基因的特异性引物,建立了一种针对羊口疮隐性感染的三重PCR检测方法,并分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定。结果表明,其对羊口疮病毒的最低检测下限可达到100.2 TCID50/mL,能够特异性地扩增出3个检测基因的相应片段。应用本方法对临床采集的羊口疮阳性样品和待检样品检测结果显示,阳性样品的羊口疮病毒检出率为100%,待检样品的检出率为73.3%。
- 李前瑞李杰田婷婷姚运亮许君艳赵燕青陈德坤张淼涛
- 关键词：羊口疮病毒多重聚合酶链反应
- 金黄色葡萄球菌Hla基因的原核表达及其溶血活性鉴定被引量：1
- 2013年
- α毒素(Hla)作为重要的毒力因子,在金黄色葡萄球菌感染宿主的过程中具有破坏宿主细胞免疫屏障的效应。通过基因工程手段对金黄色葡萄球菌Hla基因进行克隆与原核表达,分离纯化得到重组Hla融合蛋白,对其进行SDS-PAGE和Western blot检测,并检测其溶血活性。结果显示,重组Hla融合蛋白的大小约为53ku,与预期的蛋白大小一致,纯化后蛋白浓度为0.70mg/mL;重组Hla融合蛋白对山羊血红细胞有良好的溶血活性,溶血指数为92.84%±3.73%。本研究获得有活性的重组Hla融合蛋白,为下一步研究α毒素的作用机制和防御金黄色葡萄球菌的感染提供了有价值的参考资料。
- 许君艳姚运亮李杰李前瑞田婷婷陈德坤
- 关键词：金黄色葡萄球菌Α毒素原核表达溶血活性
- 副猪嗜血杆菌病病原的分离培养与PCR鉴定被引量：3
- 2009年
- 根据某猪场患病猪的临床症状和剖检变化,初步诊断为副猪嗜血杆菌引起,为确诊该病,随即取患病猪组织进行实验室检查.结果从患病猪的胸水、腹水中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,其生化试验为:接触酶阳性,氧化酶、吲哚和脲酶阴性;发酵果糖、麦芽糖、葡萄糖和蔗糖;不分解阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、甘露醇、乳糖.生长需要V因子.用副猪嗜血杆菌的16S rRNA的特异性PCR引物,通过PCR技术分别从该分离菌株扩增出828bp的特异基因片段,表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌.为疫苗的研制提供了试验依据.
- 余燕邵林郑红玉孟莎莎李前瑞
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 河南省副猪嗜血杆菌分离鉴定与药敏试验被引量：2
- 2009年
- 为发病猪场合理用药控制和治疗副猪嗜血杆菌病,从河南省7家猪场12份疑似副猪嗜血杆菌病病料中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,进行了细菌培养特性试验和培养菌PCR鉴定。结果表明:分离的菌株为副猪嗜血杆菌,2株分离菌对土霉素、氟本尼考、苯唑西林钠、头孢噻呋、诺氟沙星、阿米卡星和硫酸链霉素等敏感,对氨苄青霉素、磺胺嘧啶、硫酸卡那霉素具有耐药性。
- 马金友李前瑞赵恒章周全霞余燕
- 关键词：副猪嗜血杆菌药敏试验
- 羊口疮抗体检测试剂盒的制备方法
- 本发明涉及一种羊口疮抗体检测试剂盒的制备方法。其利用犊牛睾丸原代细胞，通过羊口疮病毒的连续传代培养，获得的第六代细胞培养液作为原核克隆的模板，通过原核表达获得可溶性表达蛋白，其表达的蛋白作为包被抗原，制备羊口疮抗体检测试...
- 陈德坤李杰李前瑞田婷婷姚运亮许君艳罗军曹斌云
- 文献传递
