李卿
- 作品数：22 被引量：88H指数：6
- 供职机构：上海第二医科大学附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Tca8113细胞系耐药性的实验研究被引量：10
- 2001年
- 目的 建立耐顺铂 (CDDP)人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP ,对其耐药特性进行研究。方法 应用间歇性加药 ,逐步递增剂量 ,体外连续诱导培养方法 ,获得Tca8113耐药细胞。采用MTT法 ,琼脂糖凝胶电泳和免疫组化法对细胞倍增时间、裸鼠成瘤性、化疗药物敏感性、P gp和GST π蛋白表达进行研究。结果 初步建成耐CDDP的人舌鳞癌细胞系 (Tca8113/CDDP) ,其耐CDDP浓度为 10 μmol/L。该细胞同时对卫猛 (Vm 2 6 )、博来霉素 (BLM)、长春地辛 (VDS)、表阿霉素 (E ADM)、泰素 (Taxol)等化疗药物产生交叉耐药。连续传代 1月后 ,倍增时间从 2 9.9h降至16 .7h ,具有裸鼠成瘤性 ,瘤体倍增加速。CDDP作用Tca8113细胞后 ,电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带 ,耐药细胞Tca8113/CDDP则无。P gp(P 糖蛋白 )及GST π表达量升高 ,表明MDR 1mRNA表达水平增高。结论 CDDP能致Tca8113细胞耐药性。Tca8113/CDDP细胞系具有多药耐药特性 ,GSH/GST解毒系统可能参与Tca8113/CDDP耐药性的产生。
- 周晓健陈万涛李卿何荣根
- 关键词：顺铂耐药性鳞状细胞癌细胞系凋亡
- HPV16E6、E7诱导的人永生化口腔上皮细胞系的建立
- Objective: To establish an immortalized oral epithelial cell line. Materials and Methods: Normal human oral or...
- 张志愿帕提曼曹俊周晓健李卿陈万涛
- 文献传递
- 角膜基质细胞体外长期培养过程中生物学特性的改变被引量：3
- 2004年
- 目的 研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法 取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比较各代细胞增殖能力的改变。RT-PCR和Western杂交检测各代细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的改变;爱茜蓝法检测糖胺聚糖(GAG)的含量。结果 体外培养兔角膜基质细胞随着传代的进程,逐渐显现衰老的形态特征。细胞群体倍增时间由第7代起显著延长(P<0.01);MTT比色法的结果亦显示,第7代细胞的增殖能力开始大幅下降(P<0.01)。第9-11代时,Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达都有明显减少(P<0.01),降至第1代细胞的30％左右;GAG的含量也降至40％左右。结论 兔角膜基质细胞经历长期体外培养后,细胞增殖能力和胞外基质表达水平显著下降,逐渐丧失原有的功能。但作为构建组织工程化角膜的种子细胞,在它的生物学特性未发生改变之前,经3次传代培养,获取的细胞量达到组织块消化所得细胞的240倍左右,已足以用于构建之用。
- 王爱丽胡晓洁李卿崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：角膜基质细胞细胞培养生物学特性细胞外基质MTT比色法
- 含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒被引量：2
- 2004年
- 目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。
- 陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓李卿崔磊曹谊林
- 关键词：GFP基因逆转录病毒假病毒基因转染
- 猪软骨细胞老化过程中Aggrecan的表达及其糖链分子结构的改变
- 2003年
- 本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中 ,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系。取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞 ,RT PCR检测aggrecan球间区域 (interglobulardomain ,IGD)mRNA的表达状况 ;阿利新兰 (AlcianBlue)法检测糖胺聚糖 (glycosaminoglycan ,GAG)的含量和糖链的分子结构。结果显示aggrecanIGDmRNA的表达在P4、P5细胞内明显降低 (P <0 0 5 ) ;GAG的合成也在P4、P5时显著减少 (P <0 0 5 ) ,但这 2项指标的变化趋势之间无显著相关性。而长链 高度硫酸化的GAG由P4软骨细胞开始 ,绝对含量和相对含量均显著减少 (P <0 0 1) ,其与aggrecanIGDmRNA的变化趋势有显著相关性 (P <0 0 1)。由此可见 ,体外培养软骨细胞中ag grecan的表达合成和细胞老化有密切关系。aggrecanIGDmRNA的表达降低与aggrecan中长链 高度硫酸化GAG的合成代谢过程受阻可能是影响老化细胞成软骨能力的重要因素之一。
- 李卿刘伟夏万尧崔磊曹谊林
- 关键词：AGGRECAN糖链细胞老化软骨细胞糖胺聚糖
- 人软骨蛋白聚糖Northern杂交探针的构建及其应用被引量：1
- 2003年
- 目的 构建人软骨蛋白聚糖 (aggrecan)探针 ,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecanmRNA表达水平的检测。 方法 取人软骨细胞 ,逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR )扩增ag grecan球间区域 (IGD)片段。将纯化的RT PCR产物构建入 pUCm T载体 ,酶切及测序鉴定。32 P标记aggrecan探针 ,Northern杂交法检测人软骨组织和培养软骨细胞 (各 3组 )以及人正常和瘢痕疙瘩成纤维细胞 (各 6组 )中aggrecanmRNA的表达。 结果 构建产物经鉴定 ,显示其包含了人ag grecanIGD的基因序列 ,与GeneBank已收录序列 (M 5 5 172 ) 10 0 %相同。Northern结果显示 ,该探针可用于aggrecanmRNA表达水平的定性和定量检测。对正常人软骨组织和体外培养人软骨细胞的aggrecan β actin的吸光度比值进行比较 ,发现其间 ( 0 .5 75 6± 0 .0 15 2 1.36 90± 0 .0 2 0 6 )差异具有显著性 (P <0 .0 1)。结论 Northern杂交法可以对整复外科研究中常见的软骨和瘢痕疙瘩成纤维细胞中aggrecanmRNA的表达水平进行检测 ,且具有较好的灵敏度和特异性。
- 陆峻泓李卿刘伟吴娟娟刘德莉曹谊林
- 关键词：基因表达整复外科
- 爱茜蓝法检测组织工程化软骨及软骨细胞中蛋白聚糖的含量被引量：14
- 2003年
- 李卿刘伟夏万尧崔磊曹谊林
- 关键词：组织工程化软骨软骨细胞蛋白聚糖
- 碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外培养软骨细胞中的表达
- 2004年
- 目的 探讨软骨细胞在体外传代培养过程中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR)表达的变化趋势,以及它对软骨细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法 采用猪耳软骨细胞在体外进行扩增传代,收集第1-6代的细胞样品行RT-PCR和Western blotting检测,从mRNA和蛋白水平来反映bFGF和FGFRs的表达。另取第1-6代软骨细胞,以含10ng/mL bFGF的培养液进行培养,比较其与空白对照组细胞在增殖速率和ECM合成等方面的差异。结果 bFGF、FGFR1和FG-FR2在第1-3代软骨细胞中表达减少的趋势较为平缓;第4、5代时,有大幅的向下跃迁;在第6代时仅微量表达或消失。这一现象与体外培养软骨细胞增殖速率的下降相平行,第4代及以后代次细胞对bFGF刺激无反应。结论 bFGF和FGFRs表达的减弱与软骨细胞在体外培养过程中的老化进展可能有密切的关系。
- 陈瑾君李卿陆峻泓崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子受体软骨细胞细胞外基质
- 阻断转化生长因子-β信号转导抑制成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成被引量：13
- 2003年
- 目的研究阻断转化生长因子-β(TGF-β)受体的信号转导对正常皮肤成纤维细胞增殖和I型胶原合成的调控。方法组织块法体外培养皮肤成纤维细胞,加入缩短型TGF-βⅡ型受体的重组腺病毒(实验组,50 pfu/cell)或β-半乳糖苷酶重组腺病毒(对照组,50 pfu/cell),培养后行细胞计数和Western Blot检测细胞增殖率和I型胶原合成状况。结果 缩短型TGF-βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达能有效抑制细胞增殖达34％～50％,并显著减少I型胶原的合成。结论过度表达缩短型TGF-βⅡ型受体可以通过阻断TGF-β的信号转导来抑制成纤维细胞的细胞增殖和I型胶原合成。
- 蔡泽浩刘伟李卿武晓莉钱云良曹谊林
- 关键词：转化生长因子-Β成纤维细胞增殖瘢痕增生
- 软骨细胞老化过程中胞外基质表达水平的改变被引量：16
- 2003年
- 目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRNA表达水平上的改变。结果体外培养软骨细胞随着老化的进程,逐渐显现衰老和凋亡的特征。凋亡抑制基因bcl-2和控制细胞分裂的端粒酶的表达显著下降(P<0.01)。软骨细胞的特征性基质分子Ⅱ型胶原在第3代时表达水平有显著下降(P<0.01),降至原代细胞的5.47%±1.04%,在第4代几乎不再表达。而Ⅰ型胶原在第5代时,有显著上升(P<0.01);在第9代时又显著下降(P<0.01)。结论猪软骨细胞经体外培养,由第4代起逐渐发生去分化,丧失软骨细胞的表型。同时,细胞的增殖分裂能力亦逐步减退,细胞凋亡现象明显增加。
- 陆峻泓李卿刘伟陈瑾君刘德莉吴娟娟崔磊曹谊林
- 关键词：软骨细胞细胞老化胞外基质基因表达细胞分裂
