李红敏
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“首都临床特色应用研究”专项北京市重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高剂量O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc诱导体外培养肝细胞脂肪变
- 2013年
- 目的初步探讨蛋白质O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对肝细胞的影响。方法取雌性Balb／c小鼠（8～10周）20只随机分为正常组（n=10），Benzyl—d—GalNAc药物组（n=10），给Benzyl-α-GalNAc药物（5mg／kg，1次／d）灌胃。第2周末取小鼠血清及肝脏进行血清生化指标AIJT及AlJP测定及肝组织HE染色。培养HepG2细胞．Benzyl-α-GalNAc分别以0．5、1及5mg／ml与HepG2细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。5mg／ml药物组完全未贴壁，去除处理因素，继续培养12h观察细胞。Benzyl-α-Gal—NAc以3mg／ml处理HepG2细胞12h及24h观察细胞贴壁情况。培养L02细胞，Benzyl-α-GalNAc分别以0．1及0．5mg／ml与L02细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。结果药物组与正常对照组比较，肝组织切片显示轻微脂肪变。油红O染色显示药物处理组HepG2及L02细胞内的脂滴积聚。高浓度组细胞完全没有贴壁，24h后更换无药物培养基，去除处理因素12h后，可见HepG2开始贴壁生长。结论高浓度O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc抑制体外肝细胞的黏附，并诱导轻微肝细胞脂肪变。
- 张晓静张仁雯郝晓花任慧李红敏刘燃王智强魏红山
- 关键词：肝细胞脂肪变
- 血清GP73对HBV相关失代偿性肝硬化的诊断价值被引量：9
- 2014年
- 目的观察血清GP73水平对HBV相关肝硬化的诊断价值。方法本研究共观察了接受乙肝穿刺的慢性乙肝患者200例；失代偿乙肝肝硬化患者200例；以及HBV相关肝癌（HCC）患者200例。所有患者均为连续入组的患者，所有患者血清HBsAg阳性持续均在6个月以上，符合慢性HBV感染的诊断。结果与慢性肝炎患者（67．38±57．45ng／ml）相比，肝硬化患者（221．9±108．5ng／ml）和HCC患者（152．44±102．7ng／ml）的血清GP73显著升高。以慢乙肝患者为对照人群，GP73诊断肝硬化的ROC分析曲线下面积为0．91（95％CI：0．88-0．94）（P〈0．0001）。以150ng／ml为诊断cut—off值，GP73诊断肝硬化的特异性和敏感性分别为72．5％和93．5％。结论HBV慢性感染患者，血清GP73显著升高，除考虑肝癌诊断外，还应该考虑肝功能失代偿的可能。
- 翟庆玲黄玉波郝晓花李红敏任慧魏红山
- 关键词：高尔基体肝炎乙型肝炎病毒乙型肝硬化
- 肝细胞脂肪变对血清糖蛋白GP73水平的影响被引量：8
- 2013年
- 目的观察不同病因肝细胞脂肪变对肝病患者血清GP73水平的影响。方法以100例健康体检者为对照，观察178例肝穿刺病理学检查发现肝脂肪变性患者的血清GP73水平差异。结果与健康对照人群（35．61±12．22ng／m1）相比，不同病因导致的脂肪肝患者（70．62±60．60ng／m1）血清GP73显著升高。尽管酒精性脂肪肝（81．86±47．82ng／m1）和急性肝损伤患者合并肝细胞脂肪变（82．77±77．73ng／m1）血清GP73水平略高于慢性乙型肝炎患者（63．84±50．62ng／ml）和非酒精脂肪肝患者（65．75±62．20ng／ml），但不同病因导致的肝细胞脂肪变并未显示血清GP73水平差异有统计学意义。更为重要的是，68例，≥1．0（71．46±66．48ng／ml），75例F≥2．0（69．58±62．31neVml），以及34例F3·F4的患者（71．65±43．89ng／ml），血清GP73的水平差异无统计学意义（F=0．02，P=0．98）。相反，显著性肝纤维化S〉-2患者（91．04±82．37ng／m1）其血清GP73水平显著高于纤维化轻微S〈2（65．80±53．45ng／m1）的患者（P=0．029）。结论肝细胞脂肪变导致血清GP73水平显著升高，但肝细胞脂肪变的程度似乎与血清GP73水平无关。
- 魏红山康艳芳郝晓花刘佳李红敏刘爱霞任慧黄玉波李伯安
- 关键词：高尔基体脂肪肝肝炎生物学标记
- 免疫调控相关基因C12orf28在免疫组织中的分布特征
- 2013年
- 目的制备抗人C12orf28多克隆抗体,明确C12orf28编码蛋白在免疫组织中的分布特征。方法选取免疫原性高、特异性强的羧基端257个氨基酸作为目的片段,以人外周血单个核细胞(PBMC)cDNA为模板,采用PCR获得目的基因C12orf28C257;构建其原核表达载体pET32a(+)-C12orf28C257,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白;将重组蛋白免疫大耳白大白兔制备兔源性多克隆抗体,采用ELISA和Western blot分析检测多克隆抗体效价和特异性,采用Western blot明确C12orf28的组织分布特征。结果 PCR扩增得到C12orf28C257目的基因片段,诱导表达重组蛋白并制备了其多克隆抗体。ELISA分析结果显示,多克隆抗体效价>1︰1.28×106,Western blot分析鉴定得出多克隆抗体具有较高的特异性。结论未知功能基因C12orf28在胎儿肠、淋巴、胸腺和心肌等组织中均有不同程度的表达。
- 任慧李红敏乔雍刘燃郝晓花魏红山
- 关键词：基因表达重组蛋白多克隆抗体
- 糖基因GLT25D2敲除小鼠的制备与基因型鉴定被引量：7
- 2013年
- 目的建立GLT25D2基因敲除小鼠模型，为胶原糖基化修饰分子机制研究奠定工作基础。方法采用胚胎干细胞线性打靶技术，获得同源重组的干细胞，繁殖嵌合体，GLT25D2^＋/-小鼠杂交获得GLT25D2^-/-纯合子小鼠。采用PCR技术对小鼠进行基因型鉴定。结果共获得Founder小鼠4只，其中雄性和雌性各2只。经过8个月的配笼繁殖，共获得GLT25D2一小鼠40只；GLT25D2^＋/-小鼠89只；GLT25D2^-/-小鼠34只。不同基因型比例符合孟德尔遗传规律。对不同基因型小鼠合笼配对观察发现，GLT25D2^-/-小鼠生育功能下降，每胎数量平均3～4只，显著少于GLT25D2^＋/-小鼠之间的每胎小鼠数（平均6～8只）。对20，40，以及60d小鼠的体重观察显示，GLT25D2^-/-小鼠体重显著高于GLT25D2^＋/-和GLT25D2^＋/＋型小鼠，但这种体重差异的趋势随小鼠年龄的增加而逐渐减少。结论GLT25D2基因敲除小鼠发育异常，与野生型小鼠相比，体重增加，繁殖功能降低。
- 魏红山李红敏任慧郝晓花王志强刘燃黄玉波陈霖王晗李伯安
- 关键词：基因糖基化胶原纤维化小鼠
- 不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响
- 2014年
- 目的 比较不同的分离介质对小鼠原代肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分离纯化效率的差异.方法 肝门静脉原位灌注,预灌注不含钙镁离子的D-Hanks液及含有Ⅳ型胶原酶的灌注液,取消化后的肝脏,分别采用Ficoll-Paque PLUS、Percoll、Nycodenz作为分层介质,密度梯度离心纯化原代HSCs.显微镜下观察细胞纯度并计算细胞得率.锥虫蓝染色判断细胞活率.激光共聚焦显微镜观察原代HSCs的固有荧光情况.油红O染色观察获得原代HSCs的纯度情况.结果 采用Ficoll-Paque PLUS、Percoll、Nycodenz分离细胞得率分别为（1＆#177;0.5）＆#215;106,（1＆#177;0.5）＆#215;105,（0.8＆#177;0.5）＆#215;106;纯度分别为75％ ～ 85％,91％ ～95％,91％ ～95％；活率均高于90％.结论 用Nycodenz作为分离介质分离肝星状细胞的方案最优.
- 李红敏任慧郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：肝硬化细胞小鼠
- 分泌蛋白编码基因THEM6克隆表达及组织细胞分布
- 2013年
- 目的体外克隆表达THEM6，诱导重组蛋白，制备多克隆抗体，明确在不同组织细胞的表达特征。方法以外周血单核细胞总RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增THEM6基因片段，诱导剂IFrG诱导THEM6重组蛋白表达，制备多克隆抗体，分析特异性、检测效价。用CCK-8检测试剂盒，分析THEM6重组蛋白对Jurkat细胞增殖的影响；观察该蛋白的组织、细胞系表达分布。结果成功体外克隆THEM6．获得重组蛋白及抗THEM6的多克隆抗体，ELISA （enzyme-linked immuno sorbent assay）酶联免疫吸附测定检测效价〉1280000；低浓度THEM6重组蛋白对Jurkat细胞增殖有影响，THEM6蛋白在Jurkat细胞等多种细胞及淋巴、肝脏等多种组织中表达。，结论THEM6基因在多种组织细胞中有广泛表达。
- 李红敏任慧乔雍郝晓花刘燃王智强魏红山
- 关键词：乙型肝炎病毒重组蛋白多克隆抗体
- Colgalt2-酶联免疫试剂盒的制备被引量：1
- 2014年
- 目的 利用N末端Colgalt2多克隆抗体和C末端Colgalt2多克隆抗体,制备Colgalt2双抗体夹心酶联免疫试剂盒.方法 体外扩增Colgalt2的N-末端编码序列,构建其原核表达质粒,诱导纯化Colgalt2重组蛋白.免疫大耳白兔获得抗Colgalt2 N-末端重组蛋白的多克隆抗体.以Colgalt2 N-末端重组蛋白为抗原,利用ELISA和Western Blot技术检测多克隆抗体效价和特异性.以Colgalt2 N-末端多克隆抗体包被酶标板,同时利用HRP标记的C末端Colgalt2抗体,制备Colgalt2-ElISA试剂盒.结果 我们成功克隆表达了N末端Colgalt2基因片段,制备了兔抗Colgalt2多克隆抗体,ELISA分析表明该抗体效价较高（＞1∶1 280000）,Western Blot分析显示该抗体有良好的特异性.对我们所制备的不同浓度的Colgalt2重组蛋白进行分析显示,所制备的分析试剂盒,在1.25～25 μg/ml范围内具有较好分析线性.线性相关系数约为0.98.结论 所制备的Colgalt2-ELISA分析试剂盒可以用于标本内Colgalt2蛋白检测.
- 刘燃李红敏任慧王智强王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因蛋白质工程酶联免疫吸附试验
- FAM172A及其异构体重组蛋白对体外培养肝细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- 目的体外克隆人类基因FAM172A,构建其原核表达载体并诱导其重组蛋白的表达,制备兔抗FAM172A重组蛋白的多克隆抗体,观察其在不同细胞系的表达情况。观察FAM172A-1和FAM172A-3蛋白对L02细胞增殖的影响。方法利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及PCR技术,构建原核表达质粒pET-32a(+)-FAM172A-1和pET-32a(+)-FAM172A-3。诱导该基因不同异构体重组蛋白的表达,并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)技术进行鉴定。纯化后的重组蛋白FAM172A-1和FAM172A-3与肝细胞L02细胞共孵育,观察不同浓度的重组蛋白对细胞增殖的影响。利用纯化后的FAM172A(异构体3)重组蛋白免疫大耳白兔,获得抗FAM172A-3蛋白的多克隆抗体,利用酶联免疫吸附法(ELISA)以及Western blot技术对获得的多克隆抗体进行效价分析及特异性检测。结果成功扩增获得FAM172A(异构体1、3)的基因片段,测序结果与GenBank已公开的基因序列一致;成功表达FAM172A(异构体1、3)的重组蛋白,经过Western blot鉴定正确;纯化后的重组蛋白FAM172A(异构体1、3)与L02细胞共孵育结果发现,两者对L02细胞在一定浓度范围内均有促进细胞增殖的作用。所制备的兔抗人FAM172A-3重组蛋白的多克隆抗体,ELISA检测显示其效价可达1︰1 280 000,Western blot检测证实该多克隆抗体的特异性良好;Western blot分析显示,该蛋白在肝脏间质细胞和实质细胞均有一定程度的表达。结论 FAM172A蛋白在肝实质细胞及肝间质细胞均表达,且其重组蛋白可以促进L02细胞增殖,推测该基因可能与肝细胞损伤、肝纤维化以及肝细胞再生等发生机制有关。
- 张仁雯康艳芳乔雍郝晓花常路丝李红敏任慧张晓静孟雪李兴旺魏红山
- 关键词：多克隆抗体肝细胞细胞增殖
- GLT25D1血清水平与慢性乙型肝炎肝纤维化进程相关性分析被引量：2
- 2013年
- 目的探讨GLT25D1血清水平与慢性乙型肝炎肝纤维化进程的相关性。方法通过抗原表位预测软件BepiPred 1.0Server将GLT25D1基因片段分为GLT25D1-1和GLT25D1-2两部分,PCR扩增获得目的片段,构建其原核表达质粒;对制备的多克隆抗体进行效价及特异性分析。通过以GLT25D1为抗原的ELISA双抗体夹心的方法,检测其在HBV感染不同阶段的患者的血清水平。结果成功表达重组蛋白,Western blot鉴定正确;成功制备兔抗人(GLT25D1-1、GLT25D1-2)的多克隆抗体,效价较高,特异性良好。通过ELISA方法检测HBV感染患者血清,慢性乙肝(病理结果不超过S3期)、肝硬化(S3-4期及S4期)以及肝癌患者中GLT25D1的OD值较正常组均有显著性差异(P<0.01)。结论通过血清学检测结果,我们发现GTL25D1存在于HBV感染的肝病的各进程中,进而我们推测血清GLT25D1可能会作为检测肝纤维化进程的一个新的血清学指标。
- 张仁雯郝晓花刘燃张晓静任慧李红敏王智强成军魏红山
- 关键词：糖基转移酶多克隆抗体ELISA慢性乙型肝炎
