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甘蓝型油菜BnPPT1基因的克隆及其功能研究: 磷酸烯醇式丙酮酸／磷酸转运子基因/(Phosphoenolpyruvate//phosphate translocator 1,PPT1/)是细胞质体碳水化合物转运的一个关键基因,在植物莽草酸代谢和脂肪酸生物合成途径中起...; 杨坤; 关键词：甘蓝型油菜基因克隆转基因侧翼序列; 文献传递

优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文)被引量：2: 2010年; [目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用SDS法和改良CTAB法(包括低温操作、增加酚氯仿的抽提次数以及延长低温沉淀时间等)提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再使用普通聚合酶与热启动高保真的ExTaqHS聚合酶进行两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。油菜数据库比对搜索采用BBSRCBrassicaDB上WU-BLAST2.0工具,拟南芥数据库比对分析采用TAIR数据库中WU-BLAST2.0工具。为验证FS4转基因中T-DNA插入位点的真实性,根据序列比对分析结果在T-DNA插入位点的左右两端分别设计引物FS4-L与FS4-R。分别采用3对引物pS2/FS4-L、pA2/FS4-R、FS4-L/FS4-R同时对T1代转基因FS4杂合体和非转基因对照植株的基因组进行PCR验证。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。; 杨坤吴学龙朗春秀陈锦清; 关键词：反向PCR 侧翼序列改良CTAB法转基因油菜

歌剧《弄臣》咏叹调“你们这些狗强盗”演唱要领分析: 歌剧作为用音乐承载的戏剧艺术，音乐性和戏剧性作为歌剧最重要的两个因素，重唱是歌剧中最能体现这两个因素的声乐形式。对歌剧《弄臣》重唱艺术进行研究，对探知歌剧艺术全貌和了解歌剧艺术特征具有重要意义。诸多学者在不同角度对威尔第...; 杨坤; 关键词：歌剧艺术《弄臣》咏叹调

优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究被引量：9: 2010年; [目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。; 杨坤吴学龙朗春秀陈锦清; 关键词：反向PCR 侧翼序列改良CTAB法转基因油菜

甘蓝型油菜PEP转运子BnPPT1基因的克隆、序列分析和表达模式被引量：2: 2011年; 磷酸烯醇式丙酮酸/磷酸转运子基因(Phosphoenolpyruvate/phosphate translocator1,PPT1)是细胞质体碳水化合物转运的一个关键基因,在植物莽草酸代谢和脂肪酸生物合成途径中起着重要作用。根据十字花科拟南芥PEP转运子AtPPT1基因序列与油菜数据库BBSRC Brassica DB中相应ESTs设计全长引物,以甘蓝型油菜(Brassica napus)幼嫩叶片基因组DNA和种子cDNA为模板,克隆到了甘蓝型油菜PEP转运子基因全长序列,命名为BnPPT1。该基因基因组gDNA全长为2 075 bp,含有8个内含子,编码区长度为1 224 bp,编码407个氨基酸。序列比对结果表明,BnPPT1与同属于十字花科拟南芥AtPPT1转运子同源性很高,仅有个别氨基酸的差异。进一步采用半定量RT-PCR分析表明,BnPPT1基因在油菜各器官中表达差异很大,在幼嫩的子叶和茎中有较高丰度的表达,在中早期发育的种子中表达丰度逐步升高,种子成熟后期没有表达,暗示该基因在油菜籽粒中油份等物质积累中有重要功能。; 杨坤吴学龙郎春秀刘智宏陈锦清; 关键词：基因克隆甘蓝型油菜

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杨坤