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分子伴侣过量表达对蛋白质分泌及可溶性的影响被引量：21: 2000年; 通过过量表达大肠杆菌分子伴侣 Sec B和 Gro EL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响 .在过量表达 Sec B的宿主菌中 ,周质空间分泌蛋白总量较对照组提高了约 71 % ,GL- 7- ACA酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 1 .5倍 ,碱性磷酸酯酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 54% ;在过量表达 Gro EL的宿主菌中 ,周质分泌蛋白总量较对照组提高了约 52 % ,青霉素 G酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 76% ,鲑鱼降钙素六聚体的可溶性组分的比例由原来的 45%增加到约 90 % ,而 MS2 -人白介素 - 3融合蛋白的包涵体有约 1 5%转变为可溶性组份 .上述结果表明 ,分子伴侣 Sec B和 Gro EL的过量表达促进了靶蛋白的分泌 ,Gro; 杨运桂童芹郑卫东钱友存杨胜利龚毅mail.srcb.ac.cn; 关键词：分子伴侣分泌可溶性表达蛋白质

大肠杆菌表达系统的优化及相关基因元件和宿主菌的研究: 该文通过过量表达大肠杆菌分子伴侣SecB和GroEL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响.通过酶活性的测定及Western印迹分析,分别在tac,T7及氧调控表达系统中研究ASP和WTSP对PAC分泌的影响.运用PC...; 杨运桂; 关键词：分子伴侣可溶性表达青霉素G酰化酶高密度发酵脯氨酰内肽酶; 文献传递

工程化大肠杆菌G830: 本发明公开了一种适用于高密度发酵的微生物，在所述微生物的染色体上整合有外源的透明颤菌血红蛋白基因，而且该微生物乙酸代谢的主要途径被阻断。新的工程菌G830不仅可消除乙酸的不利积累，而且对氧的利用能力大为提高，因而更适合在...; 龚毅杨运桂杨胜利; 文献传递

蛇毒神经毒素类似物的免疫学分析被引量：1: 2000年; 选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 1 0种神经毒素类似物进行硫氧还蛋白融合表达 ,表达产物基本上都是包涵体 .以硫氧还蛋白融合表达产物为抗原和上述 1 0种神经毒素类似物抗血清进行 Western blotting.结果显示 ,大多数神经毒素类似物之间没有免疫交叉反应 ,表明这些神经毒素类似物的抗原性差别较大。; 钱友存胡太山范春阳杨运桂杨胜利龚毅srcb.ac.cn; 关键词：免疫学分析

抗菌肽MagaininⅡ单链抗体基因的构建及其表达被引量：3: 2000年; 目的将克隆的抗体轻重链可变区基因拼接成单链抗体基因并将其在大肠杆菌中表达。方法通过RT—PCR从两株抗MagaininⅡ杂交瘤细胞株 (2D1 ,3F8)中克隆出VH 和VL 基因 ,然后利用重组PCR技术 ,将VH 和VL 基因通过柔性肽段(GLY4Ser)3 的Linker拼接成单链抗体基因(ScFv) ,将ScFv克隆到表达载体 pCANTAB5E上并将其分别在大肠杆菌E.coliHB2151及TG1 中进行表达。结果SDS PAGE和Western blot分析表明 ,ScFv在大肠杆菌E.coliHB2151中得到了分泌表达。间接ELISA结果显示可溶性ScFv及其表面展示噬菌体均具有抗原结合活性。结论成功地获得了ScFv 2D1和ScFv 3F8基因并在大肠杆菌中得到了功能性表达 ,为新型抗菌肽的设计打下了基础。; 胡泰山陈海旭杨运桂钱友存陈登鸿屈贤铭杨胜利; 关键词：重组PCR 单链抗体分泌表达抗菌肽

新的工程化大肠杆菌G830: 本发明公开了一种适用于高密度发酵的微生物,在所述微生物的染色体上整合有外源的透明颤菌血红蛋白基因,而且该微生物乙酸代谢的主要途径被阻断。新的工程菌G830不仅可消除乙酸的不利积累,而且对氧的利用能力大为提高,因而更适合在...; 龚毅杨运桂杨胜利; 文献传递

青霉素G酰化酶调节基因定点诱变的研究被引量：1: 2002年; 构建了大肠杆菌中青霉素 G酰化酶 ( PAC)的调节基因 ( pac R)翻译起始密码定点突变株。对突变后 PAC的表达调控特征进行了研究 ,结果表明 :突变株的 pac基因表达后能正常加工成2 4 ku、65 ku的 α亚基和 β亚基 ;突变后 ,虽然 PAC表达仍需要苯乙酸诱导 ,但是 ,可诱导性提高 ,形成低组成型表达 ,无葡萄糖及分解代谢物阻遏效应 ,因而 pac R对 PAC表达水平存在着影响 ,pac R基因是葡萄糖以及它的分解代谢物在分子水平上影响 PAC表达的另一作用因素。采用突变株进行发酵生产时 ,PAC产量较亲株提高 3倍 ,而且可以采用葡萄糖作为碳源 ,有利于改善; 徐京宁杨运桂龚毅杨胜利俞俊棠; 关键词：青霉素G酰化酶定点突变基因调控

大肠杆菌中青霉素G酰化酶成熟的限制性因素被引量：3: 2001年; 为了研究大肠杆菌中青霉素G酰化酶 (PenicillinGacylase ,PAC)成熟的限制性步骤 ,分别构建了PAC表达质粒pKKpacSP ,pETpacSP ,并将它们在大肠杆菌宿主中表达。通过酶活性的测定及Westernblotting分析 ,分别在PAC自身表达系统 ,Tac ,T7及氧调控表达系统中 ,研究PAC前体蛋白加工成α亚基、β亚基的效率及亚基折叠组装形成活性酶的能力。结果表明 :PAC成熟过程中的限制性步骤因宿主载体系统而异 ;PAC本身表达系统中 ,前体肽加工成α亚基、β亚基的效率为 5 7 2 % ,亚基组装能力为 0 72 ;Tac启动子表达调控系统中α亚基的折叠和稳定成为限制性步骤 ;T7及氧调控表达系统中 ,PAC前体肽加工成α亚基、β亚基的效率达 90 %左右 ,亚基组装成活性酶的能力分别为 1 82 ,2 ;低氧调控系统表达PAC时 ,成熟的效率最高 ,PAC表达的单位重量活性提高; 徐京宁杨运桂龚毅杨胜利俞俊棠; 关键词：青霉素G酰化酶大肠杆菌

分子伴侣GroEL对青霉素G酰化酶亚基折叠的影响: 2002年; 采用 Tac启动子控制表达质粒 ,在不同的宿主细胞中表达了青霉素 G酰化酶 ( PAC)。检测这些菌株所表达的 PAC活性 ,分析细胞内分子伴侣 Gro EL含量、PAC翻译后加工为 α、β亚基的状况 ,以及它们之间的关系。结果表明 :质粒 p KK- SP在不同宿主中表达时 ,翻译后加工状况有明显差异 ,单位质量细胞所表达的 PAC活性与翻译后加工效率相关 ,且与细胞内分子伴侣 Gro EL在菌体总蛋白中含量正相关。同时也阐明了亚基的折叠成为翻译后加工过程的限制步骤 ,细胞内分子伴侣 Gro EL有助于; 徐京宁杨运桂龚毅杨胜利俞俊棠; 关键词：青霉素G酰化酶翻译后加工分子伴侣 GROEL 宿主

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杨运桂