江凯
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：复旦大学生物医学研究院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 干细胞因子Oct4在肝细胞癌中的转录调控网络分析
- 孙璐孙淳李岩江凯张钦乐刘银坤
- 不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73糖基化修饰水平比较
- 2014年
- 利用抗体亲和层析纯化不同转移潜能人肝癌细胞系中的高尔基体蛋白73(GP73),比较不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73糖基化修饰水平,为GP73成为肝癌标志物提供依据。纯化的GP73通过质谱鉴定后,分别进行蛋白印迹(western blot)和凝集素印迹(lectin blot)分析,比较其在不同转移潜能肝癌细胞系的糖基化修饰水平。实验发现,GP73含有伴刀豆凝集素(ConA)、橙黄网胞盘菌凝集素(AAL)、小扁豆凝集素(LCA)和红腰果E型凝集素(PHA-E)识别的糖型,且单位GP73的LCA、PHA-E识别的岩藻糖和平分型糖型含量在肝癌细胞Huh7、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3中有升高趋势。研究表明,单位GP73岩藻糖和平分型聚糖结构随肝癌细胞的转移潜能升高而增多。
- 张舒江凯茅晓意刘银坤
- 关键词：糖基化人肝癌细胞系GP73凝集素聚糖
- 亲和纯化技术联合质谱分析筛选乳腺癌中p90核糖体S6蛋白激酶4相互作用蛋白被引量：3
- 2016年
- 背景与目的:p90核糖体S6蛋白激酶4基因(ribosomal S6 kinase 4 gene,RSK4)作为抑癌基因,能够抑制细胞增殖、迁移并诱导细胞的凋亡,但与其配合发挥相应功能的相互作用蛋白尚不明确。该研究利用Flag标签纯化技术和质谱分析筛选鉴定乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的RSK4相互作用蛋白。方法:构建含有RSK4全长和Flag亲和标签的真核表达载体pc DNA3.1/EGFP-RSK4-Flag,将其转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞株,72 h后收集细胞蛋白。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RSK4表达情况。运用标签分离纯化RSK4蛋白,液相质谱/质谱分析技术(liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定RSK4相互作用蛋白,通过生物信息学的方法(GO分析和IPA分析)归纳分析互作蛋白以及与RSK4相互作用机制。结果:通过标签纯化联合质谱分析成功鉴定出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38(serine/threonine-protein kinase 38,STK38)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38类(serine/threonine-protein kinase 38-like,STK38L)、MOB激酶致活因子2(MOB kinase activator2,MOB2)、蛋白精氨酸N甲基转移酶5(protein arginine N-methyltransferase 5,PRMT5)等24个RSK4相互作用蛋白。对所鉴定出的互作蛋白进行生物信息学分析,提示RSK4互作蛋白组参与包含细胞凋亡和细胞迁移运动等在内的多种生物信号通路。结论:利用亲和纯化技术联合质谱鉴定成功筛选出RSK4相互作用蛋白并通过生物信息学分析获得了RSK4参与乳腺癌细胞的凋亡、迁移相关生物调控网络。
- 刘日强刘天华张钦乐江凯郭坤张舒刘银坤杨华伟
- 关键词：真核表达基因转染
- 肿瘤中糖蛋白糖链结构与功能变化的研究进展被引量：3
- 2011年
- 在多种多样的蛋白质翻译后加工中,糖基化修饰是最普遍的一种,约50%的蛋白质是糖基化修饰的。如果把O连接的葡萄糖胺修饰的细胞核内蛋白和胞质蛋白包括进来,其比例会更多;尤其是那些涉及细胞与细胞相互作用的许多分子,它们都是糖蛋白。糖蛋白糖链参与诸如细胞生长、细胞黏附、肿瘤转移等许多重要的生理和病理过程。以糖蛋白N-糖链为例,分支结构可从蛋白表面伸出〉3 nm的大型的具有分支的可移动糖簇结构,足够长的糖簇结构可形成必须的独立结构域,从而发挥重要功能。
- 江凯张舒刘银坤
- 关键词：糖链结构肿瘤转移细胞相互作用翻译后加工
- 肝细胞生长因子(HGF)诱导肝癌Huh7细胞发生上皮间质转化(EMT)后细胞膜表面糖蛋白糖谱的变化被引量：11
- 2014年
- 目的应用凝集素芯片技术寻找肝癌细胞表面转移相关的特征性糖谱。方法应用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导建立肝癌上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)细胞模型。通过凝集素芯片比较诱导前后细胞膜的糖谱改变,采用凝集素印迹和荧光细胞凝集素免疫组化方法验证芯片结果。结果诱导后细胞对凝集素ACL、BPL、JAC、MPL、PHA-E、SBA和SNA的亲和作用减弱,而对凝集素AAL、ConA、DBA、GSLⅡ、ECL、HAL、LCA、LTL、NML、NPL、PHA-L、PTLⅡ和WFL的亲和作用增强。提示诱导后肝癌细胞表面出现了黏蛋白T/Tn抗原、平分型N-乙酰葡萄糖胺、α2,6唾液酸和末端α或β连接的N-乙酰半乳糖胺结构减少;而末端和核心岩藻糖、高甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺β1,6分支和复杂型寡糖分支结构增多。结论肝癌细胞发生EMT过程中细胞膜表面糖链结构改变,提示糖链结构与肝癌的转移密切相关,为有效控制肝癌转移、改善预后提供了新思路。
- 莫翠菊秦雪康晓楠彭契六江凯卢宇隋靖喆翟励敏刘银坤李山
