汤维芳
- 作品数：8 被引量：0H指数：0
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- ALK-5在小鼠失神经骨骼肌纤维化TGFβ1/Smad信号通路中的作用机制研究
- 目的 研究ALK-5受体特异性阻滞剂SB431542在小鼠失神经支配骨骼肌纤维化过程中的作用,探讨ALK-5在TGFβ1/Smad信号通路中的作用机制方法 1、90只C57BL/6雄性小鼠,分为正常对照组(假手术组)、P...
- 刘菲汤维芳陈东辉李孟郑宏良陈世彩
- 关键词：失神经支配骨骼肌纤维化
- ALK-5在小鼠失神经骨骼肌纤维化TGFβ1/Smad信号通路中的作用机制研究
- 目的：研究ALK-5受体特异性阻滞剂SB431542在小鼠失神经支配骨骼肌纤维化过程中的作用，探讨ALK-5在TGFβ1/Smad信号通路中的作用机制.方法：1.90只C57BL/6雄性小鼠，分为正常对照组(假手术组)、...
- 刘菲汤维芳陈东辉李孟高颖那郑宏良陈世彩
- TGF-β1及CTGF在小鼠失神经骨骼肌肌萎缩及纤维化过程中的上调作用
- 刘菲汤维芳陈东辉李孟高颖那郑宏良陈世彩
- CTGF在大鼠失神经面肌中的表达
- 目的:观察CTGF在大鼠失神经面肌中的表达方法:80只成年SD大鼠(220～250 g)随机分为失神经1、2、3、4、8、12、16、＞16周组,正常面肌作为对照组.动物经腹腔注射戊巴比妥钠全麻后,在茎乳孔处以5-0丝线...
- 刘菲郑宏良陈世彩陈东辉汤维芳
- 胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立
- 2013年
- 目的获得胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管共培养的条件，在体外建立稳定的神经一肌肉共培养体系，并形成功能性的神经肌肉接头。方法C2C12成肌细胞株体外扩增培养至60％～70％融合时，用分化培养液诱导分化；取孕15～16d的SD大鼠，提取胚胎大鼠脊髓前角运动神经元细胞，种植到分化5d的C2C12肌管细胞中，在神经元基础无血清培养液Neurobasal＋2％B27中共培养。倒置显微镜下观察各个阶段神经元形态及突起长度的变化、肌管形态变化及收缩特性、神经肌肉接头的形成，应用免疫荧光染色技术检测突触后膜乙酰胆碱受体（acetyleholinereceptor，AChR）特异性结合物”银环蛇毒素（ccbungarotoxin，α-BTX），并采用屏幕录像技术记录共培养体系中肌肉收缩现象。结果在共培养体系中，原代脊髓运动神经元与C2C12肌管细胞均能存活并进一步分化成熟。3d时，可见运动神经元伸出的轴突延伸至肌管膜表面或包绕肌管；1周时，肌管按同一方向排列，出现广泛的节律性收缩，同时免疫荧光染色结果显示α-BTX特异性结合突触后膜AChR；共培养10d后，运动神经元开始凋亡，肌管细胞逐渐出现萎缩现象。结论在体外培养条件下，无需特殊培养基和各种营养因子，运动神经元和骨骼肌细胞即可共同生存、生长并进一步发育，建立突触连接，触发一系列神经肌肉接头信号转导，引发肌管节律性收缩。
- 高颖娜李晓雨宋先敏陈世彩陈东辉汤维芳郑宏良
- 关键词：运动神经元肌收缩共同培养技术神经肌肉接头
- 不同生长基质对骨骼肌成肌干细胞分化融合的影响及初步分析
- 2014年
- 目的探讨骨骼肌成肌干细胞C2C12在体外分化为肌管的最佳生长条件。方法把C2C12细胞接种于基质胶(matrigel)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、多聚赖氨酸(PLL)预包被的24孔板,观察细胞生长情况并刺激分化5天后进行免疫荧光染色,分别计算肌球蛋白(myosin)阳性肌管的融合率。结果基质胶组和多聚赖氨酸组肌管融合率明显高于Ⅰ型胶原组(P<0.01),但是多聚赖氨酸组肌管相对较小且多核肌管数(≥3个核)相对较少。结论在3种基质中,基质胶是促进C2C12细胞分化融合的最佳基质,对于C2C12成肌提供了可靠保证。
- 李晓雨高颖娜汤维芳李孟郑宏良
- ALK-5在小鼠失神经骨骼肌纤维化TGFβ1/Smad信号通路中的作用机制研究
- 刘菲汤维芳陈东辉李孟高颖那郑宏良陈世彩
- 人肝细胞生长因子基因重组慢病毒载体的构建及其在成肌干细胞中的表达
- 2015年
- 目的构建人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因重组pCMV-G﹠NR-U6-hHGF慢病毒载体,并检测其在成肌干细胞系C2C12细胞中的hHGF表达,为治疗失神经喉肌纤维化的研究提供依据。方法采用RT-PCR法扩增并纯化得到hHGF基因片段,并将其克隆到pCMV-G﹠NR-U6上,再将重组慢病毒载体转化入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性菌落并行BamHI和HindⅢ双酶切鉴定。对筛选后的重组质粒阳性克隆行PCR鉴定和测序,将表达质粒与包装质粒共转染293T细胞包装hHGF慢病毒,荧光显微镜检测病毒滴度,再进一步转染C2C12细胞(分为空白对照组、空载体组、HGF重组慢病毒过表达组),最后行PCR和WB检测HGF的表达情况。结果 PCR鉴定和测序结果显示所构建的慢病毒载体正确无误,包装后的病毒滴度>1×109 IU/mL;慢病毒过表达组的HGF表达量均较空白对照组、空载体组明显增高,而且72h仍有稳定的表达。结论本实验成功构建了慢病毒载体pCMV-G﹠NR-U6-hHGF,并能够在离体培养的成肌干细胞系C2C12细胞中稳定高效表达HGF,为治疗失神经喉肌等骨骼肌纤维化、提高神经修复效果的实验研究提供了依据。
- 汤维芳刘菲陈世彩陈东辉李孟朱敏辉郑宏良
- 关键词：人肝细胞生长因子慢病毒喉肌
