王东茂
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：中国烟草总公司科技项目贵州省科技厅农业攻关项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学医药卫生更多>>
- 烟草肌醇半乳糖苷合成酶基因NtGolS1的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS,以辣椒GolS基因为探针,通过电子克隆法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码GolS基因的cDNA序列,暂被命名为NtGolS1。NtGolS1包含一个完整的开放读码框,编码343个氨基酸,具备糖基转移酶保守结构域;序列比对结果表明,NtGolS1蛋白与其他植物的GolS蛋白具有很高的相似性;系统进化树分析表明,NtGolS1与耐旱植物维柯萨的Gols亲缘关系最近。这些结果为进一步研究NtGolS1的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供理论基础。
- 林世锋王仁刚任学良王东茂张拓黄亚娟
- 关键词：烟草克隆
- 离子交换色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定中国人乳中的β-酪蛋白被引量：6
- 2013年
- 以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价。结果表明:当pH=4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液浓度为60 mmol/L时,分离得到的酪蛋白组分纯度最高。对所得酪蛋白沉淀进行DEAE阴离子交换色谱分离,得到3个洗脱液。对其中第3个峰进行Western-Blot法及基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定,证明该峰能与人β-酪蛋白抗体特异性结合,确认其为人乳β-酪蛋白;将质谱结果在Mascot数据库中进行数据检索,序列覆盖率为50%,进一步确定其为人乳β-酪蛋白。综上所述,我们建立了能够得到符合蛋白质组学研究要求的人乳β-酪蛋白的方法。
- 黄宇任皓威刘彪刘宁李萌王东茂
- 关键词：阴离子交换色谱质谱Β-酪蛋白纯化
- 烟草根系蛋白质双向电泳样品制备方法的比较被引量：6
- 2012年
- 为探索适于烟草根系蛋白质组学研究的样品制备方法,以栽培品种K326生长期根系为材料,比较了常规裂解液法、TCA/丙酮沉淀法、Trizol抽提法和酚法等4种总蛋白质的提取方法。对制备的样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)检测。结果表明:酚法最佳,所获蛋白在单向SDS-PAGE中形成条带数目多而清晰;经双向电泳分离用银染显色,可检测约548个蛋白点,图谱分辨率较好,蛋白点清晰,主要集中在等电点pH5～8、相对分子量25.0～70.0kD,可有效解析烟草根系的蛋白质组。
- 林世锋张拓史跃伟王东茂王志红杨志晓谢升东魏开华任学良
- 关键词：烟草根系蛋白质蛋白质组蛋白提取双向电泳
- 烟草LEA3基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因,以番茄LEA3基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到2个第3组LEA基因(NtLEA3-1和NtLEA3-2),并对其进行了序列分析。结果表明:2个LEA3基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码167和166个氨基酸,具有8个LEA3基元序列。亲水性分析表明NtLEA3-1和NtLEA3-2蛋白富含亲水氨基酸,是一种高度亲水性的蛋白,其蛋白二级结构中均以α-螺旋构象为主。NtLEA3-1和NtLEA3-2的氨基酸序列与番茄的一致性最高为79%,与其他已经发现的LEA3蛋白的一致性在42%～62%之间,表明NtLEA3-1和NtLEA3-2是2个新的烟草LEA3基因。
- 林世锋任学良王轶王东茂张拓王仁刚
- 关键词：烟草克隆
- 酶切质谱法和氰基化裂解法联合解析新药重组人门冬胰岛素二硫键被引量：3
- 2013年
- 目的:建立一种简化、快速、准确的分析含有相邻Cys的双链型二硫键的方法,并确定重组人门冬胰岛素的二硫键。方法:(1)ESI-Q-TOF质谱准确测定样品还原烷基化及烷基化前后的相对分子质量,计算二硫键数和自由巯基数;(2)采集Glu-C酶切肽质量指纹谱,MS-Bridge检索并确定1对链间二硫键;(3)简化氰基化裂解法步骤,LC-MS/MS测定关键肽段序列,自编软件结合人工解析,确定第2、3对二硫键。结果:(1)相对分子质量测定出重组人门冬胰岛素含3对二硫键;(2)酶切肽谱的序列覆盖率为100%,关键肽段m/z 1377.5568、m/z 2493.1045,测量偏差小于0.05,对应二硫键A20-B19。(3)Glu-C酶切液经氰基衍生后以ZipTip除盐代替HPLC制备,氨水裂解后用MALDI-TOF测肽谱,获得关键肽段m/z1530.7163,对应二硫键A6-A11,其串联质谱共匹配14个关键序列离子,碎片离子强度高,质量偏差小于0.01,证实该二硫键连接正确。结论:新药重组人门冬胰岛素主要的二硫键连接方式为A6-A11、A7-B7、A20-B19,与已知胰岛素一致。本方法降低了双链连接型胰岛素二硫键分析复杂度,简化了步骤,具有良好的实用性。
- 黄亚娟傅海媛侯利平孙云波张拓王东茂郑俊杰魏开华
- 关键词：肽质量指纹图谱质谱分析
- GASA基因超家族新成员——烟草抗菌肽基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 抗菌肽可以增强植物对病原微生物的抵抗能力,本研究利用生物信息学方法,获得了烟草品种K326的3种抗菌肽cDNA序列(NtSN1a、NtSN1b和NtSN2a),并对其进行了序列分析。结果表明,3种抗菌肽cDNA序列均具有完整的开放读码框,NtSN1a和NtSN1b均编码88个氨基酸,NtSN2a编码104个氨基酸。对推导的氨基酸序列分析发现,它们都具有典型的GASA基因超家族保守结构域,属于GASA基因超家族成员。系统进化分析表明,NtSN1a和NtSN1b与马铃薯抗菌肽snaking-1聚为一类,NtSN2a与马铃薯抗菌肽snaking-2聚为一类。这些结果为进一步研究抗菌肽基因的抑菌效应,比较其在烟草抗病防御反应中的作用奠定了基础。
- 林世锋任学良王东茂张拓王仁刚
- 关键词：烟草抗菌肽
- 烟草3个甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的甜菜碱醛脱氢酶(EADH)基因,以枸杞BADH基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到3个BADH基因(NtBADH1、NtBADH2、NtBADH3),并对其进行了序列分析。结果表明:3个BADH基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码504个氨基酸,具有醛脱氢酶家族高度保守的十肽(VTLELGGKSP)以及与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。烟草3个BADH与其他物种在蛋白质水平上表现较高的相似性,NtBADH1和NtBADH2在进化上与同科的番茄BADH蛋白距离较近,NtBADH3在进化上与同科的枸杞BADH蛋白距离较近。这些结果为进一步分析该类蛋白的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供了基础资料。
- 林世锋任学良王轶王东茂张拓王仁刚
- 关键词：烟草甜菜碱醛脱氢酶基因克隆
