田方
- 作品数：30 被引量：172H指数：7
- 供职机构：解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金军队医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 异位子宫内膜间质细胞的培养及MMP9的表达
- 子宫内膜异位症（Endometriosis,EMS）是生育期妇女常见病,其发病机理至今尚不清楚。目前的手术及内分泌药物治疗的效果局限、难以根治、复发率高。有研究表明异位内膜具有恶性肿瘤样的侵袭特征,而基质金属蛋白酶（ma...
- 王丽李亚里田方肖风君岳文
- 文献传递
- TRAIL胞外段基因克隆及其表达与纯化被引量：1
- 2002年
- 目的:克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular regionof the human TRAIL cDNA,TPAILex）,构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法:抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细胞,用RT-PCR、巢式-PCR方法从活化的淋巴细胞中获得人TRAIL基因及其胞膜外段oDNA,并克隆到pGEM-T Easy载体中,DNA测序鉴定。将TRAIL的胞膜外段基因插入表达载体pGEX-2T,构建重组表达质粒pGEX/TRAILex,用IPTC诱导表达TRAIL蛋白的胞膜外段,GST-Agarose4B层析柱纯化 GST-TRAILex融合蛋白,Western-blot鉴定纯化产物。结果:抗CD3 McAb能诱导正常人外周血单个核细胞TRAIL的高表达,成功地克隆了TRAIL胞膜外段基因,构建了重组表达载体pGEX/TRAILex,IPTG诱导后得到高效表达的TRAIL蛋白胞膜外段,经12％SDS-PAGE分析,可观察到一分子量和理论值相符（约54kD）的诱导表达带。Kodak软件分析表面GST-TRAIL胞膜外段融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的28％,进一步分析证实TRAIL蛋白的胞膜外段主要以可溶性的形式表达,用GST-Agarose4B层析柱纯化超声破菌后的上清,每升细菌培养液可得到9.8mg纯度的95％以上的GST-Tex。Western-blot结果证实54kD的表达带可与鼠抗TRAIL McAb起特异性反应。结?
- 周海胜田方肖凤君张立新李克勤
- 关键词：基因克隆基因表达蛋白质纯化肿瘤生物治疗
- Raji细胞抵抗阿霉素诱导细胞凋亡分子机制的实验研究被引量：5
- 2000年
- 目的 :观察 Raji细胞抵抗阿霉素诱导细胞凋亡的分子机制 ,从细胞凋亡的角度探讨肿瘤细胞耐药机制。方法 :MTT方法测定阿霉素和肽素诱导的细胞毒实验 ,碘化丙啶染色 FACS和 DNA降解断裂法分析阿霉素诱导的细胞凋亡 ,FACS分析 Raji细胞 bcl- 2的表达 ,Western bolt观察 Raji细胞 p5 3、bax分子的表达 ,RT- PCR检测 MDR1、MRP和 GSTπ的表达水平。结果 :Raji细胞对阿霉素和肽素均产生明显药物耐受 ,同时抵抗药物诱导的细胞凋亡 ;Raji细胞中 bcl- 2分子呈诱导性表达 ,不表达或弱表达 bax、p5 3分子 ;Raji细胞组成性高表达 MDR1、MRP、GSTπ等耐药相关分子。结论 :Raji细胞抵抗药物诱导的细胞凋亡是化疗耐受的重要原因。其中细胞膜表面分子 MDR1、MRP的高表达 ,细胞质中 bcl- 2诱导性高表达 ,bax、p5 3分子的弱表达是导致药物耐受和抵抗细胞凋亡的重要因素。
- 田方李春海颜春洪程国均陈高明
- 关键词：RAJI细胞药物耐受细胞凋亡肿瘤
- 基质蛋白水解酶与子宫内膜异位症的关系研究进展被引量：4
- 2001年
- 基质蛋白水解酶在肿瘤侵袭生长、转移中发挥重要作用。近年来研究表明基质蛋白水解酶与子宫内膜异位症发病机制也密切相关。异位内膜中基质金属蛋白酶1、2、7及纤溶酶原激活剂、组织蛋白酶D表达增高,异位内膜水解细胞外基质、基底膜能力增强,且腹腔中基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1浓度降低。因而异位症患者逆流到腹腔的子宫内膜易于种植到腹腔组织表面生长。但有关基质蛋白水解酶参与EMs的确切机理还有待于深入研究,从分子水平研究基质蛋白水解酶在EMs中表达水平及调节将有助于深入认识EMs的发病机理。
- 王丽李亚里田方
- 关键词：子宫内膜异位症基质金属蛋白酶纤溶酶原激活剂组织蛋白酶D
- TNF相关的凋亡诱导配体表达、纯化及其功能初步分析
- TNF 相关的诱导凋亡配体（TNF-Related Apotosis Induced -Ligand,TRAIL）是 TNF 超家族中一种新成员,也是一种Ⅱ型跨膜蛋白,与 Apo-1L（FasL）有较高的同源性,又称为 ...
- 周海胜田方肖凤君张立新李克勤
- 关键词：TRAIL基因克隆细胞凋亡融合蛋白表达
- 文献传递
- 快速克隆SET家族新成员SET07
- 2005年
- 目的:本实验基于生物信息学资源,快速克隆获得SET基因家族新成员SET07,并预测其相关生物学性质,为进一步探讨该基因的功能奠定基础。方法:以含有SET结构域的EST片段为基础,电子延伸获得含有SET结构域的新的编码基因,通过RT-PCR技术从胎脾组织中克隆得到该基因的cDNA序列,利用Northern印迹技术证实SET07基因的全长,并利用生物信息学工具预测其相关生物学性质。结果:获得新的SET家族成员,命名为SET07基因,证实该基因全长为3388bp。分析发现其开放阅读框架为1114bp,编码347个氨基酸,相对分子质量38×103,等电点9.57,在羧基端含有SET结构域,与H4-K20甲基转移酶同源。结论:上述结果提示SET07基因可能具有甲基转移酶的功能,在调节细胞生长周期、控制肿瘤的发生发展中发挥重要作用。
- 薛红田方黄石
- 关键词：生物信息学计算生物学甲基转移酶类基因文库
- 纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达被引量：25
- 2000年
- 目的 研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法 以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶 酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论 纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。
- 颜春洪李春海田方孙丽亚
- 关键词：纤粘连蛋白基质金属蛋白酶卵巢癌细胞
- 人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达被引量：10
- 2000年
- 基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及 型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .
- 颜春洪李春海田方朱运峰孙丽亚
- 关键词：基质金属蛋白酶-9酵母表达系统重组蛋白
- 利用寡聚核苷酸芯片对急性白血病进行分类预测及初步分型
- ＜正＞ 目的ALL与AML的鉴别诊断是化疗成功的关键。虽然目前基于细胞形态学、组织化学、免疫表型以及细胞遗传学分析的白血病诊断分型方法业已建立,但还远不足以全面反映临床白血病各亚型之间的异质性。基因组分析已成为目前白血病...
- 孙薏董陆佳李伍举田方王升启贾治林黄坚陈泽建
- 文献传递
- 卵巢癌耐药基因的筛选及耐药与细胞凋亡关系的研究
- 化疗在恶性肿瘤治疗中占有不可替代的重要位置,但多药耐药是导致化疗失败的主要原因,而导致多药耐药的原因还有待于进一步阐明。目前认为与肿瘤发生、转归有关的参与细胞凋亡的癌基因产物与化疗抵抗密切相关。肿瘤细胞对化疗药物的敏感与...
- 田方
