- 蛋白酶体激活因子REGgamma基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响被引量：3
- 2008年
- 目的观察蛋白酶体激活因子REGgamma（REGγ）基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响。方法构建真核表达重组体PcDNA3．1-REGγ并将其以脂质体转染法导人细胞，以600mg／L浓度的G418连续筛选转染细胞6周，获得稳定高表达该基因的细胞株。分别以噻唑蓝（MTT）、流式细胞仪（FCM）、软琼脂集落形成试验检测其对细胞生长的影响。免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果转染REGγ的细胞有外源REGγ基因的整合及表达，经Westernblot检测其表达较未转染组和仅转染空载体组明显增加。MTT法检测发现转染REGγ细胞生长加速；FCM检测提示转染REGγ组、未转染组和仅转染空载体组在S＋G2＋M增殖期的细胞比例分别为55．91％、44．09％、43．69％；软琼脂集落形成试验显示其平均集落形成率分别为10．23％、3．67％、4．06％。转染REGγ基因后PCNA表达明显增强。结论转染外源野生型REG7基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有加速其生长、促进其增殖的作用。
- 田甜王小毅李凡任国胜李佳
- 关键词：乳腺癌细胞周期增殖
- REGgamma基因真核表达质粒的构建及其在人乳腺癌细胞中的功能研究
- 第一部分
REGγ基因真核表达质粒的构建及其稳定转染细胞株的建立
目的:构建REGgamma/(REGγ/)基因的真核表达重组体pcDNA3.1-REGγ,并建立稳定转染REGγ基因的乳腺/(癌/)细...
- 田甜
- 关键词：基因转染技术乳腺肿瘤乳腺肿瘤乳腺肿瘤基因转染技术异种移植模型抗肿瘤试验
- 文献传递
- REGgamma在胃癌组织与不同分化胃癌细胞株中的表达及其临床意义
- 2009年
- 目的:探讨REGgamma(REGγ)在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达水平及其临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测70例胃癌组织和30例正常胃组织中REGγ/蛋白的表达水平,并分析其与胃癌生物学行为的关系:分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测正常胃粘膜细胞株(GES-1)、胃癌高分化(MKN-28)、中分化(SGC-7901)和低分化(BGC823)细胞株中REGγ mRNA转录情况和蛋白表达水平。结果:免疫组化结果表明在胃癌组织中,REGγ蛋白的表达阳性率(74.3%)显著高于正常胃粘膜组织(40.0%,P<0.01),且表达与肿瘤的大小(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、浸润程度(P<0.01)及远处转移(P<0.05)相关;RT-PCR结果表明在正常胃粘膜细胞株及胃癌高、中、低分化细胞株中,REGγ mRNA表达水平逐渐增强,分别为0.459±0.079、0.588±0.118、0.715±0.066、0.873±0.099(P<0.01),Western blot结果表明在正常胃粘膜细胞株及胃癌高、中、低分化细胞株中,REGγ蛋白表达水平逐渐增强,分别为0.712±0.065、1.176±0.185、1.533±0.127、2.061±0.398,结果差别有统计学意义(P<0.05)。结论:REGγ在正常胃粘膜组织和胃癌组织中呈一定比例的阳性表达,其表达水平与胃癌癌肿大小、是否有淋巴结转移、分化程度、浸润程度及是否远处转移等肿瘤的恶性生物学行为有关。REGγ表达与胃癌的分化程度相关,随着细胞分化程度的降低其表达逐渐增强,检测REG7 mRNA及蛋白的表达可望成为胃癌早期诊断和判断预后的分子指标之一。
- 李佳田甜王小毅李凡任国胜
- 关键词：胃肿瘤免疫组织化学蛋白质
- REGgamma基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨蛋白酶体激活因子REGgamma(REGγ)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的作用。方法:构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ,通过脂质体转染将REGγ基因导入MCF-7,以G418(800mg/L)连续筛选获得稳定高表达REGγ基因的细胞株,以转染空载体和未转染细胞作为对照。分别利用MTT法及免疫细胞化学方法检测各组细胞PCNA的表达分析REGγ基因对细胞增殖的影响;以Caspase-3分光光度法及Annexin V-FITC的流式细胞仪(FCM)来检测细胞凋亡的变化;以透射电镜(TEM)观察细胞超微结构的改变。结果:获得稳定转染且高表达REGγ的细胞株。经Western Blot检测转染REGγ基因的细胞(实验组),其REGγ蛋白表达明显高于对照组细胞(P<0.05);未转染组、空载体组和实验组细胞的倍增时间分别为34.6、35.1、26.7h,提示实验组细胞倍增时间缩短;MTT法绘制生长曲线提示实验组细胞生长明显加速;免疫细胞化学检测PCNA结果显示,未转染组、空载体组和实验组细胞的染色灰度值分别为89.61±14.32、87.95±16.38、133.47±8.14,表明实验组细胞PCNA表达明显增强(P<0.01);Caspase-3分光光度法检测显示,实验组细胞的OD值普遍低于对照组(P<0.05);Annexin V-FITC的FCM检测显示,实验组细胞的凋亡率明显低于对照组(P<0.01);TEM观察实验组细胞表现为核仁肥大,线粒体、高尔基体丰富或扩张,未见凋亡小体形成。结论:REGγ基因具有促进乳腺癌MCF-7细胞增殖并抑制其凋亡的作用。
- 田甜王小毅李佳李凡任国胜
- 关键词：乳腺癌MCF-7细胞细胞增殖细胞凋亡
- 硅胶假体隆鼻术后包膜挛缩临床分级及防治
- 硅胶假体的无毒性、生物适应性、化学稳定性、塑性好、便于操作等特性使得硅胶假体隆鼻在亚洲人群中应用广泛。但由硅胶隆鼻带来的一系列并发症是整形外科医生最头疼的问题，特别是亚洲人群鼻部软组织较厚但鼻软骨却较薄弱这一特点，使得亚...
- 田甜
- 关键词：硅胶假体隆鼻术包膜挛缩疗效评价
- Livin靶向RNA干扰对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响被引量：9
- 2008年
- 目的研究凋亡抑制蛋白Livin靶向RNA干扰MDA-MB-231对细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的机制。方法构建3个靶向Livin的siRNA真核表达载体,分别转染乳腺癌细胞MDA-MB-231后,通过RT-PCR、Western blot技术检测干扰前后MDA-MB-231细胞Livin、Caspase-3和Smac/DIABLO在mRNA、蛋白水平的表达;采用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用,流式细胞法测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡以及观察细胞形态变化。结果成功构建了针对Livin基因的3个特异性siRNA表达载体。它们不同程度地抑制了MDA-MB-231细胞Livin基因的表达,以si-Livin2抑制效率最高,它对Livin的mRNA和蛋白的抑制率分别达76.4%,70.2%。si-Livin2转染48 h后,与未转染组相比,细胞增殖活力受到抑制,转染48 h抑制率达36.1%。细胞周期重新分布,G0/G1期上升为(71.75±1.31)%,S期下降为(18.06±1.46)%;细胞凋亡率上升为(13.28±1.65)%;电镜下可见典型的凋亡细胞特征。细胞内Caspase-3, Smac/DIABLO的mRNA、蛋白表达有所上升。结论 Livin靶向RNA干扰通过上调Caspase-3, Smac/DIABLO表达有效地抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进凋亡。
- 李凡王小毅陈力田甜李佳任国胜
- 关键词：LIVINRNA干扰增殖凋亡
- 硅胶假体隆鼻术后包膜挛缩的临床分级及防治被引量：5
- 2018年
- 因硅胶假体的无毒性、生物适应性、化学稳定性、塑性好及方便操作等特性使得其在隆鼻术中广受欢迎,而亚洲人群鼻部软组织较厚、鼻软骨较薄弱,硅胶假体隆鼻后更易发生包膜挛缩。目前研究认为包膜挛缩的发生与感染、血肿、反复创伤、软骨过度切除等因素有关。由包膜挛缩后的临床表现确定其挛缩分级,根据分级情况采用手术切开、切除挛缩包膜、假体取出等相应的治疗方案,并且通过预防、正确的手术操作及抗菌药物的合理运用,可降低包膜挛缩的发生率。
- 田甜杨天荣
- 关键词：包膜挛缩
- 转染REGγ基因对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响
- 2009年
- 目的:研究转染蛋白酶体激活因子REGγ基因的乳腺癌MDA-MB-231细胞在裸鼠体内的成瘤作用及其机制。方法:以脂质体转染法将构建的重组质粒pcDNA3.1-REGγ导入MDA-MB-231细胞,以G418(600mg/L)筛选获得稳定高表达该基因的细胞株(实验组)。以转染空载体及未施加处理因素的细胞作为对照组。将此3组细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况并计算抑瘤率。RT-PCR检测REGγ基因在移植瘤中的表达,FCM检测移植瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltra-tinglymphocyte,TIL)中CD16的表达以及肿瘤细胞周期和细胞凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中p21的表达。结果:与对照组相比,实验组的移植瘤生长速度较快、体积较大,瘤体质量明显增加(P<0.05);REGγ基因在移植瘤中的表达增加(P<0.01);FCM检测提示CD16阳性率明显降低(P<0.05);G0/G1和G2/M期细胞减少,S期细胞明显增多,肿瘤细胞的凋亡率明显降低(P<0.05);p21的表达明显降低(P<0.05)。结论:REGγ基因在体内具有促进乳腺癌发生、发展的作用,其机制可能与加速细胞周期、抑制细胞凋亡、抑制自然杀伤细胞活化以及对p21的特异性降解有关。
- 田甜任国胜李晓涛
- 关键词：基因转染技术异种移植模型抗肿瘤试验
- 靶向Livin的siRNA提高MDA-MB-231细胞对阿霉素敏感性的可能机制
- 2008年
- 目的:采用RNA干扰技术下调Livin基因的表达,观察其提高乳腺癌细胞对阿霉素化疗的敏感性及机制.方法:构建3个靶向Livin的siRNA真核表达载体,转染乳腺癌细胞MDA-MB-231后,通过实时定量PCR,WesternBlot技术检测干扰前后Livin和Caspase-3的表达;采用MTT法检测细胞增殖的变化以及细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50),流式细胞法检测细胞周期,TUNEL法检测其诱导细胞对阿霉素化疗增敏作用,并观察细胞超微结构变化.结果:成功构建了针对Livin基因的3个特异性siRNA表达载体,si-Livin2对Livin的mRNA和蛋白抑制效率最高,分别为76.4%和70.2%,同时Caspase-3的mRNA和蛋白表达升高约157.1%和38.6%(P<0.05).si-Livin2转染48h后,与未转染组相比,细胞增殖活力受到抑制,si-Livin2联合阿霉素使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),显著提高了细胞对阿霉素敏感性,其凋亡率达到(38.35±2.64)%,IC50降低为(2.46±0.87)mg/L,差异具有统计学意义(P<0.05).透射电镜下可见细胞胞质浓缩,染色质聚集为小团块,电子密度增高.结论:靶向LivinsiRNA真核表达载体可以有效地下调MDAMB-231细胞Livin基因的表达,并且通过上调Caspase-3的表达抑制细胞增殖,显著增强其对阿霉素的敏感性.
- 李凡王小毅田甜陈力李佳任国胜
- 关键词：LIVIN基因阿霉素
- 人REG γ cDNA克隆及其稳定转染细胞株的建立
- 2009年
- 目的:构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ的稳定转染细胞株,为进一步深入研究REGγ的功能奠定基础。方法:提取MCF-7细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR获取全长REGγcDNA,经限制性内切酶EcoRⅠ、EcoRⅤ酶切后与PcDNA3.1连接构建重组体,再经内切酶酶切及DNA序列分析鉴定重组体构建正确。以Lipofectamine2000将重组体导入HBL-100细胞,由G418筛选出稳定转染细胞株。结果:经免疫细胞化学和RT-PCR检测并证实稳定转染细胞株中有REGγ的高表达。结论:真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ构建成功,并经抗生素筛选获得了稳定高表达REGγ的细胞株,为进一步研究REGγ的功能奠定了基础。
- 田甜王小毅李凡任国胜
- 关键词：CDNA克隆转染
