申萍
- 作品数：6 被引量：29H指数：3
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- 成人肝细胞微粒体乙基吗啡N-脱甲基酶活性及酶动力学研究被引量：1
- 2007年
- 目的观察成人肝细胞微粒体乙基吗啡N-脱甲基酶（EDM）的活性水平、酶动力学特征及乙醇和头孢噻肟对酶动力学的影响。方法肝组织除去筋膜和血红蛋白，加磷酸盐缓冲液4℃下匀浆，12000×g离心15min，取上清100000×g超速离心60min，沉淀加PBS／甘油缓冲液制成微粒体悬液，终点法测EDM酶活性。观察不同浓度乙醇和头孢噻肟对EDM酶活性及酶动力学参数最大反应速度Vm和米氏常数Km的影响。结果48例成人肝细胞微粒体EDM活性为（0．89±0．18）U，女性组（0．96±0．22）U明显高于男性组（0．81±0．16）U（P〈0．05）。乙醇和头孢噻肟对EDM酶活性均有抑制作用，底物浓度为1．0mmol／L时，抑制常数Ki分别为474mg／L（1．04mmol／L）和3．6％（0.62mmol／L）；头孢噻肟终浓度分别为0、200、400mg／L时，米氏常数Km分别为0．80、0．86和0．96mmol／L，Vm分别为1．46、1．39和1．35mmol甲醛／g微粒体蛋白／min；乙醇终浓度分别为0％、2．0％、4．0％时，Km分别为0．80、0．94、和1．1mmol／L，Vm分别为1．46、1．36和1．22mmol甲醛／g微粒体蛋白／min。结论成人肝细胞微粒体EDM酶活性水平女性组高于男性组；乙醇和头孢噻肟对EDM酶活性的抑制作用是竞争性抑制为主的混合性抑制。
- 周义文涂植光申萍
- 关键词：细胞色素P450酶系统头孢噻肟
- 天然抗菌肽分离纯化方法的建立被引量：3
- 2007年
- 目的寻找高效、广谱的新型天然抗菌肽，建立稳定、有效的分离纯化方法。方法家蝇免疫诱导后制成组织匀浆，经超速离心、分子筛过滤、SephadexG50层析、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）、透析浓缩等技术进行分离纯化，用K-B法鉴定抗菌活性。结果组织提取液经超速离心后，用pH6．8Tris-HCI尿素缓冲液作流动相，SephadexG50层析，收集到有明显抗菌活性的成分。再用pH6．8磷酸盐缓冲液作流动相，经RP-HPLC半制备柱进一步纯化，各成分分离效果良好，保留时间为18．008min处的谱峰，有明显的抗菌活性。用RP-HPLC分析柱显示其为单一成分，达到了色谱纯。该抗菌肽对大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantS．aureus，MRSA）均有抗菌活性。结论建立了有效的家蝇抗菌肽分离纯化方法，纯化的家蝇抗菌肽有广谱抗菌活性。
- 周义文申萍涂植光尹一兵陈辉孟江萍王小中卢亮陈如山陈正庚
- 关键词：家蝇抗菌肽抗菌活性纯化
- 中国成人肝微粒体P450酶活性研究被引量：7
- 2008年
- 目的观察中国成人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)、细胞色素b5(CYb5)的含量及常见几种药物代谢酶活性水平及在性别、民族间的分布差异。方法肝组织匀浆10000×g离心去除沉淀,再以100000×g超速离心60min,取沉淀加PBS甘油缓冲液,充分溶解制成微粒体悬液,用Lowry法测定蛋白含量;用双光道紫外分光光度计测定CYP450和CYb5的含量及P450酶活性。结果48例成人肝微粒体CYP450和CYb5含量分别为(0.46±0.07)nmol/mg和(0.44±0.04)nmol/mg;男性组CYP450和CYb5含量分别为0.49±0.05)nmol/mg和(0.46±0.06)nmol/mg,均高于女性组的(0.41±0.08)nmol/mg、(0.42±0.05)nmol/mg,P<0.05;汉族、回族和壮族3个民族P450和CYb5含量作q检验进行两两比较,各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。药物代谢酶NADPH细胞色素C还原酶(NR)、乙基吗啡N-脱甲基酶(EDM)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、苯并芘羟化酶(BPH)和戊巴比妥侧链羟化酶(PSCH)等酶活性水平分别为(0.71±0.13)nmol/(mg.min),(0.89±0.18)nmol/(mg.min),(0.99±0.17)nmol/(mg.min),(0.07±0.01)nmol/(mg.min),(4.15±0.65)μmol/(mg.min),其中EDM活性水平女性组高于男性组(P<0.05),PSCH活性水平男性组高于女性组(P<0.05),其他各种酶活性男女之间无显著性差异;上述5种酶活性水平经q检验,汉族、回族和壮族3个民族之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论测定了中国成人肝微粒体CYP450、CYb5含量及NR,EDM,ADM,BPH,PSCH等酶活性水平,男性组CYP450、CYb5含量及PSCH活性高于女性组,而EDM活性水平女性组高于男性组,上述7种指标在汉族、回族和壮族之间差异均无统计学意义。
- 周义文申萍陈曼刘银河涂植光尹一兵
- 关键词：细胞色素P450细胞色素B5药物代谢酶肝微粒体酶
- 天然抗菌肽的抗菌试验研究被引量：7
- 2004年
- 目的研究天然抗菌肽的抗菌活性。方法用损伤诱导使家蝇表达天然抗菌肽,通过Sephadex过滤层析技术纯化提取,用平板法和稀释法作抗菌活性试验。结果家蝇抗菌肽对铜绿色假单胞菌、大肠埃希氏菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)均有明显的抗菌活性。大肠杆菌与46mg/ml的抗菌肽提取溶液一起37℃孵育60min后,转种MH平板培养,无大肠杆菌生长。结论家蝇分泌的天然抗菌肽具有明显的广谱抗菌活性,对阴性杆菌和阳性球菌均有杀伤作用。
- 周义文涂植光尹一兵申萍
- 关键词：抗菌活性
- 家蝇抗菌肽分子结构及抗菌谱研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究家蝇抗菌肽的分子结构和抗菌谱,寻找广谱高效天然抗菌肽。方法家蝇被损伤感染诱导免疫后制成组织匀浆,用蛋白质纯化技术分离纯化抗菌肽,测定抗菌活性及抗菌谱,纳升电喷雾飞行时间质谱测定氨基酸序列。结果家蝇组织提取液经蛋白质纯化,得到一纯化的抗菌活性成份,纳升电喷雾飞行时间质谱测序,得到两个肽段的氨基酸序列:肽段1.QPNLYYNK和肽段2.PNNVYYTK。通过NCBInr蛋白质数据库检索,未发现有与之序列相匹配的蛋白质。该抗菌肽对11种临床标本分离菌株铜绿色假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、普通变形菌、异形柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、福氏痢疾杆菌、表葡菌、耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和白念珠菌的MIC分别为:3.89、2.22、4.44、6.67、3.33、6.67、5.0、6.67、4.44、4.44和13.33μmol/L。结论本文得到的抗菌肽是一个新型抗菌肽,有广谱抗菌活性,对革兰阴性菌和革兰阳性菌均有一定的抑制作用。
- 周义文申萍涂植光尹一兵陈辉孟江萍王小中陈如山卢亮陈正庚
- 关键词：家蝇抗菌肽抗菌谱分子结构
- 家蝇抗菌肽的免疫诱导及抗菌活性研究被引量：9
- 2008年
- 目的诱导家蝇产生抗菌活性肽,鉴定其抗菌活性。方法家蝇经针刺损伤感染大肠埃希菌,免疫诱导24h后制成组织匀浆,经低温盐析、超速离心、Sephadex G50层析、RP-HPLC等技术分离纯化抗菌肽。K-B法和稀释法测定抗菌活性。结果家蝇体内含有抗菌活性成分,家蝇经损伤免疫诱导后分泌抗菌肽的量明显增加,经分离纯化得到了一个色谱纯的抗菌活性肽。该抗菌肽对标准菌株大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)和金黄色葡萄球菌(ATCC25923)均有抗菌活性,其MIC分别为2.4μmol/L、3.6μmol/L和4.8μmol/L。结论免疫诱导可促进家蝇抗菌肽的分泌,分泌的抗菌肽有广谱抗菌活性,对革兰阴性菌和革兰阳性菌均有抑制作用。
- 周义文姬尚义申萍涂植光尹一兵陈辉孟江萍王小中卢亮陈如山
- 关键词：家蝇抗菌肽抗菌活性免疫诱导
