白银
- 作品数：12 被引量：48H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗膀胱癌单抗Fab段基因的克隆及表达被引量：3
- 2002年
- 目的:克隆抗膀胱癌单抗BDI的Fab段基因并在大肠杆菌中表达。方法:用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),从分泌抗人膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆k链和Fd段基因,克隆到Fab表达载体中,在大肠杆菌表达噬菌体抗体和可溶Fab;运用PCR介导的定位点突变改造V_H氨基端序列;用ELISA、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果:从分泌抗膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆了重链Fd段和k链基因,在大肠杆菌中获得有抗原结合活性的噬菌体抗体和可溶性Fab的表达,但活性很弱,将V_H氨基端序列矫正为亲本单抗原始序列后,明显改善了其活性,通过ELISA、免疫组化及模拟抗体库筛选证实了所获抗体片段的特异性结合及在抗体库技术中的可用性。结论:获得了功能性抗膀胱癌小分子抗体,并再次提示抗体氨基端序列对抗体活性的影响的重要性。
- 周丽君王琰白银张海荣余莉章
- 关键词：克隆FAB膀胱癌
- 抗膀胱癌人-鼠嵌合抗体分离纯化及生物性能的测定
- 膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率近年来呈明显上升趋势,严重威胁着人类健康。目前临床上常规采用的方法包括肿瘤的部分切除及辅助BCG或化疗药物的膀胱灌注治疗到膀胱全切除,但从根本上还不能够完全消除肿瘤的复...
- 周丽君王欲晓白银余莉章王琰
- 文献传递
- 抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达被引量：12
- 2001年
- 目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定。结果 :成功构建抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,并实现其真核表达。初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力。结论 :构建的抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想。
- 白银王琰周丽君黄啸丁义俞莉章
- 关键词：人-鼠嵌合抗体真核表达药物载体膀胱肿瘤膀胱癌
- 抗人膀胱癌人——鼠嵌合抗体真核表达载体的构建、改造和表达以及抗体的功能鉴定
- 首先从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的轻、重链可变区基因，插入嵌合抗体IgGl真核表达载体pKHL中，构建成抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗全权真核表达载体—pDHL-BDI，转染二氢叶酸还原酶（dihydrofolatereduc...
- 白银
- 关键词：嵌合抗体真核表达载体CHO细胞DHFR放射免疫
- 基因工程人-鼠嵌合抗体ch-BDI在荷瘤鼠体内外功能的研究
- 2003年
- 目的 鉴定抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体ch BDI在荷瘤鼠体内外功能 ,探讨其临床应用价值。 方法 通过超滤浓缩和亲合层析 ,得到较高纯度的ch BDI,用还原法标记99mTc,体外测定了其对人膀胱癌细胞的结合能力 ,应用放射免疫显像观察了其在荷瘤鼠体内的分布。 结果 99mTc标记的ch BDI的免疫活性分数约为 76% ,体外的亲合常数约为 3 5 6× 10 9M-1,在荷瘤鼠体内能够迅速浓缩聚集于肿瘤部位。 结论 抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体ch BDI在体内、体外均具有良好的与人膀胱癌组织的结合活性 。
- 白银俞莉章吕英谦艾军魁张春丽丁义王琰
- 关键词：膀胱肿瘤基因嵌合体放射免疫检测
- 人源化和人源抗体制备的研究
- 王琰陈晓穗周丽君王刚王卓智李竞乔媛媛刘晓琳王欲晓张海荣白银朱迎春
- 该研究旨在建立人源或人源化抗体的制备技术。克隆了多种鼠单抗的可变区基因，并在大肠杆菌获得功能性表达；构建了以上相应的多种人-鼠嵌合抗体并在真核细胞成功表达；建立了抗原表位定向选择法对鼠单抗进行人源化的技术，并进一步建立了...
- 关键词：
- 关键词：人源化人源抗体单克隆基因文库
- 通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达被引量：14
- 2003年
- 目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。
- 白银王琰张海荣周丽君吕英谦俞莉章
- 关键词：真核表达抗体CHO细胞
- ^(99)Tc^m-抗人膀胱癌-人鼠嵌合抗体在荷人膀胱癌裸鼠的放射免疫显像被引量：6
- 2003年
- 目的 研究99Tcm 抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体ch BDI对膀胱癌细胞的体外结合性能、在荷人膀胱癌裸鼠中的体内分布及对肿瘤的靶向定位性能。方法 用改进的Schwarz方法进行99Tcm 标记 ,经SephadexG 5 0柱分离纯化。用纸层析法测定标记率与放化纯 ;用Lindmo的方法测定免疫活性分数 ;用Scatchard作图法求得亲和常数。荷人膀胱癌裸鼠静脉注射99Tcm ch BDI 11.1MBq(30 μg) ,分别于 2、6、2 0及 2 4h行放射免疫显像。用感兴趣区 (ROI)技术获得全身和肿瘤放射性计数及肿瘤与对侧正常组织 (T NT)的放射性比值。 2 4h显像后处死裸鼠 ,测定体内放射性分布 ,计算每克组织百分注射剂量率 (%ID g)及T NT比值。结果 99Tcm ch BDI标记率为 (6 6 .5± 7.3) % ,放化纯 >90 % ,免疫活性分数为 76 % ,亲和常数为 3.5 6× 10 9L mol。荷人膀胱癌裸鼠放射免疫显像结果示 ,静脉注射后 6h肿瘤显影清晰 ,随时间延长更清晰。全身放射性计数随时间延长迅速降低 ,肿瘤放射性计数下降缓慢 ,T NT比值随时间增高。荷瘤裸鼠体内分布结果示 ,静脉注射后 2 4h肿瘤 %ID g为 17.4 ,除肾脏外 ,肿瘤与其他正常组织有很高的T NT比值 ,与脑、肌肉、小肠壁、骨骼及心壁的T NT比值分别为 136 .0、5 5 .1、39.3、2 9.7及 2 7 9。结论 ch BDI具有良?
- 张春丽白银王荣福付占立丁义俞莉章
- 关键词：膀胱癌^99TC^M
- 应用抑制消减杂交技术筛选人肾癌差异表达新基因被引量：8
- 2002年
- 背景与目的:认识肾癌差异表达基因有助于阐明肾癌发生、发展的分子机制,但至今有关肾癌差异基因尤其肾癌特异相关基因的研究仍不令人满意。本实验应用抑制消减杂交技术筛选人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的新基因,以期克隆出新的肾癌特异相关基因。方法:以肾癌组织mRNA为检测对象(Tester),正常肾组织mRNA为驱赶者(Driver),构建cDNA消减文库。随机挑取文库克隆进行酶切及测序,所得结果在GenBank中做同源性比对分析,对感兴趣的片段进行电子定位确定其在染色体的位置。用Northernblot、半定量RT-PCR方法检测新基因在肾癌组织与正常肾组织中的差异表达。结果:文库包含414个阳性克隆;随机挑取280个克隆提取质粒并酶切分析,其中265个有插入片段;将其中80个克隆进行测序,初步显示28、158、170、249号4个克隆为新基因片段,电子定位表明上述4个基因分别位于染色体21q22、4p15.3、9q34、22q11.2,已在GenBank中登录(BM181083,BI784487,BI863835,BI863386)。对其中28、170号克隆用Northern杂交、半定量RT-PCR检测,证实新基因在肾癌组织中表达较正常肾组织显著增高。结论:抑制消减杂交技术是筛选、克隆肾癌差异表达新基因的有效手段;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。
- 艾军魁黄啸王雨娟白银吕英谦叶雄俊辛殿旗那彦群张志文郭应禄
- 关键词：抑制消减杂交肾肿瘤基因
- 前列腺癌中神经型钙粘附素表达的意义
- 2002年
- 黄啸周利群白银曾荔夏同礼张志文那彦群郭应禄
- 关键词：前列腺癌基因表达肿瘤浸润肿瘤转移
