秦莉
- 作品数：68 被引量：107H指数：6
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- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化
- 目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白, 并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T 载体,PCR筛选阳性克隆并测...
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善雷明军潘晖榕林绮萍张仁利高世同黄达娜
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6纯化
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化
- 目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白, 并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T 载体,PCR筛选阳性克隆并测...
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善雷明军潘晖榕林绮萍张仁利高世同黄达娜
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6纯化
- 软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及其机理被引量：8
- 2006年
- 目的研究游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞(HepG2)产生胰岛素抵抗及其分子机理。方法用含0.25 mmol/L的软脂酸(软脂酸组)或100 nmol/L胰岛素(高胰岛素组)的DMEM培养基培养HepG2细胞,再用100 nmol/L胰岛素刺激后,测定其培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量以及胰岛素受体底物2(IRS-2)的蛋白水平。加入磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)的抑制剂wortmannin,再次检测IRS-2的蛋白水平。结果软脂酸组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组(P<0.05),而细胞内糖原含量显著减少(P<0.01)。软脂酸组胰岛素刺激的IRS-2蛋白水平显著低于正常对照组(P<0.01)。用wortmannin处理后,软脂酸组中的IRS-2蛋白水平差异无显著意义(P>0.05),而正常细胞组中IRS-2蛋白水平差异有显著意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的软脂酸培养24 h后,HepG2细胞可产生胰岛素抵抗,且胰岛素信号转导途径存在障碍;PI3K是胰岛素信号转导途径中的关键调节点,可能IRS-2和一些PI3K相关分子缺陷与游离脂肪酸诱导的肝胰岛素抵抗的形成有关。
- 万学东王西明夏炎枝段秋红秦莉关中宏
- 关键词：胰岛素抵抗游离脂肪酸胰岛素受体底物2HEPG2细胞
- SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化被引量：3
- 2005年
- 目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒pET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α。序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组体pET23a-M,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物。结果PCR扩增出约675bp的特异性片段,与预期片段大小相符,测序鉴定无有义突变;所构建的pET23a-M重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物约27kD;表达产物经金属螯和层析纯化;免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别。结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建了pET23a-M表达质粒,诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白,并以免疫印迹鉴定。本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础。
- 雷明军吴少庭戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍
- 关键词：SARSM蛋白基因表达蛋白纯化免疫印迹
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化被引量：5
- 2004年
- 目的 构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。 方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a(+ ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。 结果 从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。 结论 利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕张仁利高世同黄达娜
- 关键词：ESAT-6结核分枝杆菌原核表达系统重组表达质粒阳性克隆IPTG
- 软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及花生四烯酸防治作用的机制研究被引量：10
- 2005年
- 目的探讨高浓度软脂酸(PA)诱导HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的机制及花生四烯酸(AA)对IR的防治作用。方法(1)用高浓度软脂酸(PA)或10-7mol/L高胰岛素(HI)培养HepG2细胞建立具有IR的细胞模型,测定培养液中葡萄糖含量及细胞内糖原含量作为鉴定指标;(2)用Westernblot检测胞内糖原合酶(GS)和蛋白激酶B(PKB)蛋白水平;(3)用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin(WT)探讨其对胰岛素信号通路的影响;(4)观察AA是否对PA引起的IR有防治作用。结果(1)020mmol/LPA或HI培养HepG2细胞36h后,培养液中葡萄糖含量极显著增高,细胞内糖原含量极显著减少;(2)高浓度PA使磷酸化的PKB(PSer473)蛋白水平显著减少,磷酸化的糖原合酶(PSer641GS)蛋白水平极显著增加;(3)WT使对照组GS活性及胞内糖原含量极显著减少,HI组和PA组胞内糖原含量均无统计学差异,但各实验组PKB活性都极显著减少;(4)PA+AA组培养液中葡萄糖含量显著低于PA组,GS和PKB活性及胞内糖原含量显著增加。结论高浓度PA或HI培养HepG2细胞能够诱导IR,其机制可能是其引起胰岛素信号传递途径中自PKB下游到GS之间的信号通路受阻所致。AA能改善PA引起的IR。
- 夏炎枝王西明段秋红万学东秦莉关中宏
- 关键词：胰岛素抵抗游离脂肪酸蛋白激酶BHEPG2细胞
- SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备
- 采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814 位碱基),克隆到pMD18-T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2, 转化大肠杆菌J...
- 秦莉吴少庭王西明袁仕善黄达娜雷明军潘晖榕高世同张仁利屈伸
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化
- 目的;构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选...
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕张仁利高世同黄达娜
- 文献传递
- SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备
- 采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段（第2170到2814 位碱基）,克隆到pMD18-T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2, 转化大肠杆菌J...
- 秦莉吴少庭王西明袁仕善黄达娜雷明军潘晖榕高世同张仁利屈伸
- 人类SARS冠状病毒(SARS-Cov)溯源研究
- 庄志雄管轶刘小立何雅青张丹何建凡吴少庭刘建军房师松刘涛杨洪郑伯建赵锦扈庆华袁仕善秦莉程小雯
- 该项目在全球首次在果子狸和貉标本中分离到SARS样病毒，并开展病毒全基因序列的测定，发现该病毒序列与人的SARS病毒有99.8%的同源性，并且发现野生动物经营者血清SARS抗体明显高于一般人群，首次为研究人类SARS病毒...
- 关键词：
- 关键词：SARS冠状病毒流行病学分子病毒学PCR
