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JC病毒VLP—Z的制备及其生物活性鉴定被引量：1: 2009年; 目的利用先期重组的原核表达质粒pET15b—VP1-Z体外表达重组的蛋白VP1-Z；研究VP1-Z是否组装成VLP—Z，以及VLP—Z是否具有与野生型VLP相同的生物学活性。方法重组质粒pET15b—VP1-Z转染大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导重组蛋白VP1-Z表达；按照野生型VLP的制备方法纯化蛋白；Westernblot和考马斯亮蓝染色确定纯化蛋白及其纯度；电镜观察VLP-Z是否形成病毒样颗粒；血凝抑制试验检测VLP—Z是否具有血凝抑制活性；细胞免疫荧光检测VLP—Z能否转运进入细胞。结果超速离心法得到纯度及浓度较高的重组蛋白VLP—Z，其相对分子质量约50×10^3；电镜观察发现VLP—Z组装成病毒样颗粒，直径约45—50nm，较野生型VLP直径稍大；血凝抑制试验证实VLP-Z可以抑制人“O”型红细胞聚集；细胞免疫荧光显示，感染后VLP—Z可以转运进入HeLa细胞质及细胞核，与野生型VLP感染后相同。结论成功制备了VLP—Z，且VLP—Z具有与野生型VLP相同的生物学活性。; 翟海燕屈秋民折潇; 关键词：JC病毒病毒样颗粒基因治疗

定向基因传递载体pET15b-Z-VP1的构建被引量：1: 2010年; 目的在JCV VP1氨基末端插入SPA的IgG结合区(Z区),构建原核表达质粒pET15b-Z-VP1。方法PCR扩增JCV基因组VP1和SPA基因的Z片段;重组PCR连接Z片段和VP1;BamHⅠ和NcoⅠ双酶切将Z-VP1片段插入原核表达质粒pET15b。结果经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳纯化,分别得到VP1和Z片段;再用重组PCR将Z片段和VP1连接成Z-VP1重组基因;双酶切将Z-VP1插入pET15b的BamHⅠ和NcoⅠ两个酶切位点之间,并经酶切鉴定和DNA测序证实。Western blotting证明pET15b-Z-VP1在体外表达重组蛋白VP1-Z。结论成功在VP1氨基末端插入Z区,构建了原核表达质粒pET15b-Z-VP1,并体外表达重组蛋白VP1-Z。; 折潇屈秋民翟海燕; 关键词：基因治疗 JC病毒

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翟海燕