目的研究印记基因IGF2在胰腺癌干细胞中的印记表达情况。方法利用流式细胞分选技术通过CD133抗体从胰腺癌细胞株ASPC分离出胰腺癌干细胞;流式细胞术检测分离前后CD133^+细胞的比例;采用无血清悬浮培养法富集胰腺癌干细胞;通过成球实验、免疫荧光染色、流式细胞术测定肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)标志蛋白表达,以及通过软琼脂克隆形成实验等方法鉴定ASPC胰腺癌干细胞;以测序法分析IGF2在胰腺癌干细胞中的印记表达情况;应用qRT-PCR法研究胰腺癌干细胞中IGF2在基因水平上的表达;应用Western blot方法研究胰腺癌干细胞中IGF2在蛋白水平上的表达。结果利用流式细胞分选技术通过CD133抗体标记,从胰腺癌细胞ASPC中分离出胰腺癌干细胞,其可在干细胞培养液中成球培养,连续消化传代后仍保持与原代相同的形态特征;免疫荧光检测发现CSCs标志物CD133和乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)在胰腺癌干细胞表面持续阳性表达;软琼脂克隆形成实验显示CSCs的克隆形成能力增强;对分选前后肿瘤细胞CD133表达检测,显示超过90%的成球细胞为CD133阳性;通过测序法分析IGF2在胰腺癌干细胞中的印记表达情况,结果显示胰腺癌干细胞存在IGF2印记丢失(loss of imprinting,LOI),而与其对应的非干性肿瘤细胞(non-stem cancer cells,nSCCs)的印记状态为印记保持(maintance of imprinting,MOI);应用qRT-PCR法研究胰腺癌干细胞中IGF2在基因水平上的表达,结果显示与nSCCs相比,IGF2在CSCs中的表达明显升高;应用Western blot方法研究CSCs中IGF2在蛋白水平上的表达,结果显示与nSCCs相比,IGF2在CSCs中的表达明显升高。结论胰腺癌干细胞存在IGF2印记丢失,从而导致IGF2的高表达,IGF2印记丢失可能是胰腺癌干细胞的标志性特征之一。
