葛金英
- 作品数：92 被引量：196H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 表达猪干扰素(α、β或γ)的重组新城疫弱毒疫苗株
- 本发明涉及表达猪干扰素(α、β或γ-干扰素)的重组新城疫弱毒疫苗株，具体地，涉及表达猪干扰素(α、β或γ-干扰素)的重组新城疫LaSota弱毒疫苗株。本发明还公开了制备所述重组新城疫弱毒疫苗株的方法和该重组新城疫弱毒疫苗...
- 步志高葛金英
- 文献传递
- 新城疫病毒F蛋白碱裂解位点修饰及外源基因的插入对新城疫LaSota疫苗株致病力的影响被引量：7
- 2008年
- 新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗株反向遗传操作平台,将LaSota病毒F蛋白的碱裂解位点由GGRQGR↓L分别突变为GRRQRR↓F和GRRQRR↓L,在未加入TPCK胰酶的情况下分别成功拯救出突变修饰LaSota疫苗病毒株rL-FmF和rL-FmL,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等指标对其毒力进行评估,结果rL-FmF和rL-FmL的ICPI值由LaSota的0.36分别上升为1.18和1.05,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0,表明碱裂解位点的突变可显著增强致病力。为了检测外源基因插入对病毒致病力的影响,进一步以rL-FmF为载体,分别构建并拯救出表达H5亚型禽流感病毒血凝素HA和增强绿色荧光蛋白EGFP基因的重组病毒rL-FmF-HA和rL-FmF-EGFP,经测定ICPI分别为0.67和1.10,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0。结果表明,对rLaSota病毒F蛋白裂解位点2个非碱性氨基酸突变为碱性氨基酸,无论F2蛋白氨基端为F或L,均可显著增强其脑内接种致病力,接近中发型毒株标准,但对静脉内接种致病能力均无显著影响,而对鸡胚致死能力均保持rLaSota病毒缓发型特点(MDT≥90);外源基因的重组、表达可不同程度致弱病毒,其致弱程度与外源基因及其表达产物性质有关。结果提示,影响NDV致病力不仅仅局限于F蛋白裂解位点氨基酸序列;通过F裂解位点修饰及HA基因插入可以获得致病力较高但基本接近缓发型标准的重组病毒。
- 王永葛金英解希帝丁玉林步志高
- 关键词：新城疫病毒裂解位点致病力
- 红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立
- 2018年
- 为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。
- 单博文王金良刘仁强帅磊王喜军葛金英温志远夏咸柱步志高
- 关键词：狂犬病病毒活细胞成像
- 表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究被引量：4
- 2012年
- 为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应。本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力。
- 田美杰葛金英王喜军冯娜马良帅磊苏华高玉伟夏咸柱步志高
- 关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白重组新城疫病毒
- 埃博拉和马尔堡病毒囊膜糖蛋白嵌合型重组水泡性口炎病毒的构建及鉴定被引量：4
- 2016年
- 埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)属于丝状病毒科,能够导致人和动物发生致命的埃博拉出血热和马尔堡出血热,这两种病是重要的尚未传入我国的烈性人兽共患病。为研制安全有效的储备疫苗,本研究利用水泡性口炎病毒(VSV)反向遗传操作技术,将VSV自身糖蛋白(GP)分别替换为EBOV或MARV的GP,构建了表达扎伊尔型EBOV、苏丹型EBOV及MARV GP的嵌合VSV重组病毒r VSV△G/ZEBOVGP、r VSV△G/SEBOVGP及r VSV△G/MARVGP。Western blot和间接免疫荧光试验表明这3种GP蛋白在重组病毒感染的细胞中均能够正确表达。电镜观察结果显示,3种重组病毒均与亲本病毒具有相同形态特征,表明这3种外源GP蛋白均能够嵌合在重组病毒粒子表面。本研究构建的这3种重组病毒为进一步的动物免疫试验并评价其免疫效果奠定了基础。
- 邵钰王金良刘任强张会雷王喜军葛金英温志远步志高
- 关键词：埃博拉病毒马尔堡病毒囊膜糖蛋白水泡性口炎病毒
- 狂犬病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth(ERA)减毒活疫苗候选株的构建与筛选
- 本发明涉及一种狂犬病毒减毒疫苗突变株，其中狂犬病毒的糖蛋白的333位点由精氨酸突变为谷氨酸。本发明还涉及该狂犬病毒减毒疫苗突变株的制备方法和应用。
- 步志高夏咸柱葛金英王喜军杨松涛冯娜
- 狂犬病病毒糖蛋白跨膜区和膜内区的替换对其生物学特性的影响被引量：1
- 2015年
- 为研究表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G)重组新城疫病毒(r L-RVG)中RV G跨膜区(TM)及膜内区(CT)对RV G蛋白表达、病毒蚀斑的形成以及免疫原性的影响,本研究采用新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的TM和CT替换G蛋白的相应部分,构建出表达RV嵌合G蛋白(RVGTC)的重组NDV(r L-RVGTC)。激光共聚焦和western blot检测结果显示,r L-RVG和r L-RVGTC在BHK-21细胞中RVG表达量无显著差异;而且r L-RVG与r L-RVGTC在鸡胚中的病毒增殖滴度也无显著差异。但间接免疫荧光结果表明,r L-RVGTC在BHK-21细胞中丧失RV或r L-RVG形成病毒蚀斑的能力。并且以5×107半数鸡胚感染量(EID50)的r L-RVG和r L-RVGTC分别免疫小鼠后,r L-RVGTC诱导产生的RV中和抗体的滴度显著低于r L-RVG诱导的滴度。本实验结果显示TM和CT对RV G的病毒蚀斑形成及其免疫原性是必不可少的。
- 于桂梅周微微祖述龙王子龙陈曦葛金英步志高
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白F蛋白跨膜区
- 犬瘟热病毒CDV/R-20/8疫苗株的反向遗传操作系统及其应用
- 本发明涉及一种犬瘟热病毒(Canine distemper virus，CDV)CDV/R-20/8疫苗株的反向遗传操作系统及其应用，该系统包含：转录质粒，所述转录质粒能够表达所述犬瘟热病毒CDV/R-20/8疫苗株的基...
- 步志高夏咸柱王喜军冯娜葛金英高玉伟
- 文献传递
- 表达西尼罗病毒囊膜糖蛋白PrM/E重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究
- 2015年
- 西尼罗病毒(WNV)是一种可以导致人与动物死亡的人兽共患病的虫媒病毒。为构建表达WNV Pr M/E蛋白的重组新城疫病毒(NDV)La Sota疫苗株并对其免疫原性进行评价,本研究利用反向遗传学操作技术将人工合成的WNV pr M/E基因插入至NDV基因组P和M基因之间,构建重组病毒r La-WNV-Pr M/E。以重组病毒分别感染BHK-21细胞和免疫小鼠,利用RT-PCR、间接免疫荧光、ELISA和流式细胞术(FACS)检测Pr M/E蛋白的表达情况及免疫效果。结果显示,WNV-Pr M/E蛋白在BHK-21细胞中获得正确表达,免疫小鼠可以诱导其产生高水平的抗Pr M/E蛋白特异性Ig G,并且诱导产生WNV E蛋白表位特异性CD4+和CD8+T细胞免疫反应。以上结果表明本研究构建的r La-WNV-Pr M/E可以作为一种具有前瞻性和储备性且安全有效的西尼罗热防控候选疫苗,对我国应对该病的潜在威胁具有十分重要的意义。
- 杨洁温志远葛金英王金良华荣虹邵钰步志高
- 关键词：西尼罗病毒重组新城疫病毒
- 表达尼帕脑炎病毒F蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株
- 本发明提供一种表达尼帕脑炎病毒F蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株及其制备方法和应用。具体而言，本发明提供表达尼帕脑炎病毒F蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株rLa-NiVF(其保藏号为CGMCC No.5401...
- 步志高温志远葛金英
