袁进强
- 作品数：17 被引量：28H指数：5
- 供职机构：浙江农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 不同染色方法揭示纤毛原生动物草履虫接合生殖过程的新细节(英文)被引量：2
- 2011年
- 通过石炭酸品红、Hoechst 33342、蛋白银及免疫荧光标记等染色方法对草履虫接合生殖过程进行了重新观察,结果发现:1)新月核是第一次减数分裂前期小核的主要形态学特征,在核内有一未被石炭酸品红、Hoechst 33342着色区域,蛋白银染色则清楚显示该结构;2)4个单倍体减数分裂产物中的1个核进入口旁锥完成配前第三次核分裂,其余3核退化。蛋白银染色和抗α微管蛋白单克隆抗体进行免疫荧光标记显示,核进入口旁锥的时期在第二次减数分裂末期而非减数分裂结束后;3)配前第三次分裂末期,核间连丝的中间段有一被蛋白银识别的结构,但免疫荧光标记却无显示,只表现为纤维状结构与两侧核间连丝相连。观察结果为草履虫接合生殖过程中相关分子生物学机制研究奠定了必要的形态学基础。
- 高欣杨仙玉朱嘉骏袁进强王逸雯宋敏国
- 关键词：草履虫接合生殖
- 草履虫接合生殖过程中静止原核移向迁移原核
- 袁进强鲁庆彬高欣杨仙玉
- 日本蟾蜍聚集素cDNA的克隆与序列分析被引量：5
- 2013年
- 为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分,通过菌落PCR对日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行了筛选,获得了聚集素(clusterin,CLU)全长cDNA序列(GenBank登录号为JX035891)并对其进行了生物信息学分析。日本蟾蜍clucDNA全长为1 616 bp,包括1 332 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端30 bp及3'端254 bp的非翻译区(untranslated region,UTR)。根据cDNA序列推导的日本蟾蜍CLU前体蛋白由443个氨基酸残基组成,其中含20个氨基酸残基组成的信号肽,6个糖基化位点,10个可形成二硫键的半胱氨酸残基和2个卷曲螺旋区域。氨基酸序列同源性分析显示,日本蟾蜍CLU与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性为65%,与其他7种动物的同源性则介于41%-48%之间。
- 袁进强徐跃杨仙玉诸葛慧张姝芳
- 关键词：聚集素基因克隆
- 中华大蟾蜍重组Gal-3C的原核表达、纯化及抗血清制备
- 2016年
- 半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)与肿瘤的发生发展密切相关,已有文献表明其羧基端galectin-3C(Gal-3C)具有一定的肿瘤抑制作用。为了获得Gal-3C的抗血清,实验以已有的重组质粒pGM-Gal-3为模板,利用PCR方法扩增中华大蟾蜍Gal-3C基因片段,并将其插入到表达载体pET28b上,构建中华大蟾蜍Gal-3C的原核表达载体pET28b-Gal-3C;将构建好的重组质粒pET28b-Gal-3C转入感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导蛋白质表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot检测目的蛋白Gal-3C的表达;以纯化的重组蛋白Gal-3C免疫小白鼠,制备鼠抗中华大蟾蜍Gal-3C的抗血清,用Western-blot检测抗血清的特异性及其效价。结果显示成功构建了中华大蟾蜍pET28b-Gal-3C重组质粒,并诱导得到了目的蛋白的表达,而且将表达产物免疫小鼠后获得了特异性良好的抗中华大蟾蜍Gal-3C的抗血清。以上结果为抗肿瘤药物的研究和发展奠定了基础。
- 刘怡君贾宇坤袁进强蒋桂瑾岳继萍李玉兰杨仙玉
- 关键词：中华大蟾蜍半乳糖凝集素原核表达载体重组蛋白表达
- 猪日本乙型脑炎检测技术研究进展被引量：10
- 2011年
- 猪日本乙型脑炎是由黄病毒科乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患的病毒性传染病。人与多种动物均能感染,其中猪是主要的储存宿主和扩散宿主,猪感染该病毒后引发猪的繁殖障碍,使养猪业遭受重大经济损失,因此学者们一直在致力于寻找可以快速检测和诊断日本乙型脑炎的方法,为预防和治疗该病提供基础条件。文章对猪日本乙型脑炎检测技术,包括病毒分离鉴定方法、血清学方法、分子生物学方法等方面的研究进展进行了较为全面的综述。
- 赵凡凡游卫云王晓杜高利荣袁进强王婷周圻
- 关键词：乙型脑炎
- 比较中华大蟾蜍不同个体间galectin-3 cDNA分子多样性被引量：2
- 2013年
- 从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)某一个体的皮肤第一链cDNA中克隆到多个编码半乳糖凝聚素3(Gal-3)的cDNA。为分析该现象在中华大蟾蜍中的普遍性,分离并纯化3个不同个体的皮肤总RNA并合成其第一链cDNA,然后以此为模板,通过DNA聚合酶链式反应(PCR)扩增gal-3的开放阅读框序列。序列分析结果表明,从3个不同个体中均克隆到多个不同的gal-3 cDNA的ORF,在3组不同的试验中,出现完全相同的克隆或者完全相同的缺失以及相同的多核苷酸多态性位点,支持gal-3 cDNA多样性的客观存在,揭示gal-3cDNA的多样性是该物种的特征。
- 周品品万文彬袁进强潘李念徐跃杨仙玉
- 关键词：中华大蟾蜍GALECTIN-3分子多样性
- 日本蟾蜍MCL-1 cDNA的克隆及生物信息学分析被引量：6
- 2013年
- 克隆日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1),并进行序列分析。通过菌落PCR对日本蟾蜍皮肤cDNA质粒文库筛选获得目的基因。运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构和功能。序列分析表明mcl-1基因(GenBank登录号为JX219482)的cDNA全长为1 090 bp,5′端和3′端非翻译区域分别为19bp和432 bp,ORF由639个碱基组成,编码由212个氨基酸残基组成的蛋白质。经氨基酸序列同源性比对发现,日本蟾蜍与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性为60%,与其他7种动物的同源性在38%-55%之间。MCL-1氨基酸序列构建的进化树与传统动物分类学相符。日本蟾蜍MCL-1与人类同源蛋白具有相似的结构特征,对其cDNA序列的进一步分析,将为研究其生物学功能和药物研发奠定基础。
- 张姝芳袁进强黄慧诸葛慧徐跃杨仙玉
- 关键词：基因克隆
- 日本蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与生物信息学分析被引量：5
- 2013年
- 为研究蟾蜍皮肤中多肽类有效成分,通过菌落PCR(polymerase chain reaction)对日本蟾蜍(Bufojaponicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行筛选,对测序结果进行分析及同源性比较,获得转胶蛋白-2(transgelin-2,TAGLN2)的5′端缺失的部分cDNA序列(GenBank登录号为JX197456),长为997 bp,包括348 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端31 bp及3'端618 bp的非翻译区(untranslated region,UTR),编码由115个氨基酸残基组成的蛋白质。推导的氨基酸序列含有一个调宁蛋白同源性结构域(calponin homology,CH)、两个可形成二硫键的半胱氨酸残基、3个α螺旋区域和5个潜在的磷酸化位点。氨基酸序列同源性分析显示,本文获得的日本蟾蜍N-端截短型TAGLN2与热带爪蟾(Xenopus(Silurana)tropicalis)和非洲爪蟾(Xenopus laevis)相对应部分的同源性分别为90%和89%,与其他7种动物的同源性介于71%～85%之间。
- 诸葛慧袁进强张姝芳杨仙玉
- 关键词：基因克隆生物信息学分析
- 中华大蟾蜍galectin-3 cDNA的克隆、序列分析及原核表达载体的构建被引量：9
- 2012年
- 通过PCR扩增出中华大蟾蜍Bufo gargarizans半乳糖凝聚素3(gal-3)cDNA全长开放读码框(ORF)并克隆至pGM-T载体,经DNA测序确定获得全长ORF序列(GenBank登录号为JN993733).序列分析表明中华大蟾蜍gal-3的ORF是由789个碱基组成,编码262个氨基酸残基组成的蛋白质.推导氨基酸序列同源性比较发现,中华大蟾蜍与非洲爪蟾Xenopus lavis同源性最高,为51%,与其他10种动物的同源性在41%～50%之间.SMART分析显示gal-3蛋白在136-259位氨基酸存在保守的半乳糖结合域.Net Phos预测gal-3在Ser-6和Ser-186有潜在的丝氨酸磷酸化位点.gal-3氨基酸序列构建的进化树符合传统动物分类学特点.经菌落PCR、双酶切和DNA测序确认gal-3的ORF正确插入原核表达载体pET-28b,表明原核表达用重组质粒构建成功,为研究其蛋白功能和生物学功能奠定了基础.
- 徐跃宋敏国杨仙玉袁进强
- 关键词：中华大蟾蜍基因克隆原核表达载体构建
- 日本蟾蜍皮肤胸腺素α原cDNA的克隆及序列分析被引量：2
- 2013年
- 为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分,通过菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对日本蟾蜍Bufo japonicus formosus皮肤cDNA质粒文库进行了筛选,获得胸腺素α原(prothymosin-α,ProTα)全长cD-NA序列,并对它们进行了生物信息学分析。日本蟾蜍ProTαcDNA全长为1 480 bp,包括339 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),5′端125 bp及3′端1 016 bp的非翻译区(untranslated region,UTR)。根据cDNA序列推导的日本蟾蜍ProTα由112个氨基酸残基组成,无信号肽结构。氨基酸序列同源性分析显示,日本蟾蜍ProTα与食用蛙Rana esculenta同源性为82%,与其他11种动物的同源性则介于54%～73%。ProTα具有显著的抗肿瘤作用。分析日本蟾蜍ProTαcDNA序列,可为研究其生物学功能和药物研发提供实验依据。
- 宋敏国袁进强杨仙玉张姝芳诸葛慧徐跃
- 关键词：动物学基因克隆
