赵丽
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 供职机构：南开大学医学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- rhBMP-6的表达和纯化被引量：2
- 2003年
- 骨形态发生蛋白 (bonemorphogenetic protein,BMP) -6属于转化生长因子 (transforming growth fac-tor) -β超基因家族 ,在骨的形成中具有重要作用 ,并受雌激素选择性上调 .本研究利用 RT-PCR从人胎盘组织中扩增 BMP-6成熟肽的 DNA片段 ,克隆到 p GEX-5 X-1中 ,构建 GST-BMP6融合蛋白表达载体 p GEX-BMP-6,转化 E.coli DH5 α.克隆质粒转化的工程菌 ,经 IPTG诱导 4h后 ,高效表达 GST-BMP6融合蛋白 ,在 SDS-PAGE上出现一新蛋白带 ,分子量约为 42 k D,约占总蛋白的 2 5 % ,表达产物以包涵体形式存在 .菌体超声破碎 ,经 0 .3 %N-十二烷基肌氨酸钠 (SKL)溶解包涵体 ,离心后的上清液加入 0 .6% Triton X-1 0 0螯合 SKL.然后利用谷胱甘肽 Sepharose-4B亲和层析纯化 .结合 GST-BMP6的介质经洗涤、Xa因子酶切得到纯度达 95 %的 rh BMP-6蛋白 .
- 阳菊华杨爽赵丽罗绍光张杰秦刚朱天慧
- 关键词：蛋白纯化大肠杆菌蛋白表达转化生长因子骨形成
- 重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析被引量：11
- 2003年
- 利用RT_PCR从人胎盘组织中获取BMP_6成熟肽的cDNA片段 ,并克隆到表达载体pET_15b中 ,构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET_BMP6 ,转化E .coliBL2 1(DE3)。IPTG诱导 4h后 ,工程菌高表达rhBMP_6成熟肽 ,在SDS_PAGE上出现预期的新蛋白带 (≈ 15kD) ,约占菌体总蛋白的 10 % ,表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于 8mol L尿素 ,在变性溶解状态下经阳离子交换层析 ,得到目的蛋白纯度达 95 %以上。再经稀释复性后 ,约 80 %的rhBMP_6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示 :rhBMP_6可以提高C3H10T1 2细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix(Osx)和骨钙素 (Osteocalcin)等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达 。
- 阳菊华赵丽杨爽吴双庆张杰朱天慧
- 关键词：纯化活性
- 基因工程生产rhBMP-6成熟肽
- 朱天慧阳菊华杨爽吴双庆赵丽吕树军
- 该课题在国内首先建立了hBMP-6成熟肽及GST-BMP6成熟肽融合蛋白的原核表达系统，并依据其特性建立一套较完善、合理的纯化方案，获得纯度达90%以上的目的蛋白。经体外活性分析均具有较高的诱导成骨细胞分化的功能，从而为...
- 关键词：
- 关键词：蛋白纯化活性分析
