邓海燕
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金江西省卫生厅科技计划项目江西省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小RNA-1慢病毒载体介导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究被引量：6
- 2013年
- 目的通过微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC),探讨miR-1对MSC向心肌细胞分化的影响。方法采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠MSC并进行流式细胞学鉴定;构建表达miR-1慢病毒载体;将miR-1慢病毒载体转染大鼠MSC(MSCmiR-1)连续培养15d,光镜下观察转染后细胞形态,分别于0、4、6、15dqRT-PCR检测miR-1、心肌相关基因锌指结构蛋白(GATA-4)、肌钙蛋白I(cTnI)、α肌动蛋白(α-actin)的表达;免疫荧光观察cTnI的表达;Western blot检测α-actin的表达。结果原代大鼠MSC呈长梭形、漩涡状生长,流式细胞学检测显示,98%以上细胞表达CD44和CD29,不足1%细胞表达CD45;成功构建miR-1重组慢病毒载体,病毒滴度为3×108 TU/μl;转导miR-1后,MSCmiR-1高表达心肌特异性相关基因GATA-4、α-actin、cTnI,并随时间逐渐增强,转染4d免疫荧光检测可见cTnI在部分MSCmiR-1中表达,于15d时表达最强,Westernblot进一步证实了α-actin在MSCmiR-1中表达。结论转导miR-1至大鼠MSC中可促使其向心肌样细胞的分化。
- 邓海燕曾俊义魏云峰王梦洪郑泽琪彭景添张婉文通张玉崚
- 关键词：慢病毒属间质干细胞
- 大鼠miR-1慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建并鉴定大鼠miR-1慢病毒过表达系统。方法采用EcoRⅠ酶双酶切将目的基因从合成载体上酶切后连接入EcoRⅠ线性化慢病毒载体,连接产物转化后进行阳性克隆鉴定。成功构建的miR-1重组质粒与慢病毒辅助包装质粒及Lipofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒浓缩液并标定病毒滴度。重组慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察转染效率及miR-1表达水平。结果测序结果显示目的基因与Genebank序列完全一致;孔稀释法检测病毒滴度为3×108 TU/μL;以感染复数(MOI)50感染大鼠MSCs,感染效率达90%以上,聚合酶链反应显示miR-1高水平表达。结论成功构建大鼠miR-1慢病毒表达载体并可高效转染大鼠MSCs,为进一步研究miR-1基因的相关功能提供了合适的载体。
- 邓海燕曾俊义魏云峰
- 关键词：MIR-1慢病毒载体293T细胞绿色荧光蛋白
- microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化过程中Notch信号分子的表达变化被引量：4
- 2014年
- 目的探讨微小RNA-1对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响及分化过程中Notch信号分子的表达变化。方法全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠MSCs并进行流式细胞学鉴定,miR-1慢病毒载体感染大鼠MSCs(MSCsmiR-1)按培养时间将细胞分成4组:对照组、培养4、6和15 d组;光镜下观察细胞形态变化,q PCR检测miR-1及心肌细胞特异性基因GATA-4、c Tn I、α-actin表达,免疫荧光检测c Tn I表达,Western blot检测α-actin表达;q PCR检测Notch信号通路相关基因的表达变化。结果原代大鼠MSCs呈长梭形、漩涡状生长,98%以上细胞表达CD44和CD29,不足1%的细胞表达CD45。MSCsmiR-1中miR-1表达水平持续上升,同时伴随心肌特异性基因GATA-4、c Tn I和α-actin的表达逐渐增强,感染4 d后可见c Tn I在部分MSCsmiR-1中表达,同时可检测到α-actin在MSCsmiR-1中表达;MSCsmiR-1向心肌样细胞分化过程中,Notch信号分子Jagged1、Notch1、Notch3和Hey2表达水平逐渐下调,于15 d时下调幅度最大。结论传导miR-1至大鼠MSCs中可促使其向心肌样细胞的分化;且分化过程中伴随着Notch信号分子Jagged1-Notch1/Notch3-Hey2表达水平下调。
- 邓海燕曾俊义魏云峰王梦洪郑泽琪张婉文通
- 关键词：MIR-1骨髓间充质干细胞心肌样细胞
