郝斐
- 作品数：15 被引量：10H指数：2
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 特异性靶向绒山羊安全位点H11的sgRNA及其应用
- 本发明提供了特异性靶向绒山羊安全位点H11的sgRNA和利用CRISPR/Cas9系统介导完成定点敲除以及定点整合EGFP基因的应用。本发明首先利用生物信息学方法预测出H11位点的完整序列(SEQIDNO.1)，然后针对...
- 刘东军张耀光高源郝斐宋卫国
- Edar基因敲除绒山羊胎儿成纤维细胞系的构建
- 基因打靶技术是20世纪80年代后半期兴起的一种对生物遗传信息精细改造的生物技术手段，本研究应用基因打靶技术构建Edar基因敲除绒山羊胎儿成纤维细胞系。毛囊的周期性变化是多基因参与并紧密联系和相互制约的复杂生理生化过程。绒...
- 郝斐
- 关键词：基因打靶成纤维细胞毛囊发育
- 文献传递
- 转卵泡抑制素基因对绵羊肌源性细胞中肌肉抑制素基因的调控被引量：2
- 2013年
- 【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量PCR和western blotting等方法进行检测分析。【结果】①转基因细胞系的生长趋势与非转基因细胞相似,转基因SMSCs细胞增殖的速度高于转基因SFFCs细胞;②流式细胞仪分析表明,转基因细胞系转染后70%以上细胞均处于G0/G1期,保持旺盛的分裂能力、具有单一峰值、细胞的整倍性好、细胞电子体积显著增大;③实时定量PCR及western blotting检测结果表明,转基因细胞系中FST的RNA及蛋白水平相比非转基因细胞系均上调;④转基因SMSCs和肌管相比转基因SFFCs细胞的FST表达量高,转pSPFCDs-red转基因细胞中FST的表达水平比转pCFCDs-red细胞系高。【结论】骨骼肌特异性启动子SP及α-actin能够在SMSCs及肌管中有效启动FST目的基因的表达,且在肌管中具有较高的表达量,SP启动子的启动效率较高于α-actin。在肌源性细胞中,FST的上调可以引起MSTN蛋白水平的下调,FST对骨骼肌细胞的生长发育具有一定促进作用。
- 岳群华袁建龙郝斐靳木子王景园杨文亮刘东军仓明
- 关键词：FST骨骼肌卫星细胞肌管
- 牛和小鼠胎儿成纤维细胞混合制成的饲养层对牛胚胎干细胞的体外培养被引量：1
- 2012年
- 【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构致密、与滋养层界限明显;②小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞在1﹕1比例混合下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰优于其它比例组合;③获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT4、SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体。【结论】小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以1﹕1的比例混合下制成的饲养层可更好地支持牛胚胎干细胞的体外培养,获得的克隆形态最好。
- 丛姗王瑞温建勋郝斐李硕梁浩刘东军
- 关键词：胚胎干细胞成纤维细胞
- 一种基于CRISPR/Cas9技术介导山羊Tβ4基因定点敲入的方法
- 本发明利用CRISPER‑Cas9系统介导完成山羊Tβ4基因定点敲入，其是依据山羊的CCR5基因序列，构建基于CRISPER‑Cas9系统的gRNA表达载体及Tβ4同源重组载体。然后将优化后的CRISPER‑Cas9载体...
- 李晓聪梁浩郝斐潘伟王志钢刘东军
- 文献传递
- 绵羊羊水、胎儿肾脏组织中表达Oct-4细胞的分离培养及其分子学特性研究
- 2014年
- 试验旨在建立从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离培养表达Oct-4细胞的新方法,同时,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)初步探索二者在分子生物学特性方面的联系及差异。采用0.01%胰酶培养液,从同一只受孕中期绵羊的羊水和胎儿肾脏组织中各分离1株细胞。Real-time PCR分析结果表明,从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离的细胞均表达胚胎干细胞相关标志基因Oct-4、胚胎生殖细胞标志基因SSEA-1、主要组织相容性抗原MHC-Ⅱ、细胞凋亡基因Bax及抑制细胞凋亡基因Bcl-2,不表达MHC-Ⅰ、Nanog及TERT,因此,将羊水中表达Oct-4的细胞暂命名为羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid stem cells,AFSC),胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞暂命名为肾脏组织干细胞(renal tissue stem cells,RTSC)。相对定量分析结果显示,二者的Oct-4、Bax及Bcl-2基因的相对表达量存在明显差异。绵羊羊水中表达Oct-4的细胞(AFSC)和胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞(RTSC)体外悬浮培养7d均能形成类胚体。试验成功建立了从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离培养表达Oct-4细胞的新方法,实时荧光定量PCR分析初步显示绵羊羊水中表达Oct-4的细胞和胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞具有相同的起源,并在体内处于一种动态的变化之中。
- 王凤武郝斐袁建龙刘东军荣威恒
- 关键词：绵羊羊水OCT-4细胞
- 利用CRISPR-Cas9系统与体细胞核移植技术制备EDAR基因打靶绒山羊的研究
- 本研究利用CRISPR-Cas9系统和体细胞核移植技术制备了EDAR基因打靶绒山羊动物模型，观察到了EDAR基因打靶绒山羊头顶没有毛发、皮肤毛囊异常等特征，并且采用第二代高通量测序技术结合生物信息学的方法对EDAR基因打...
- 郝斐
- 关键词：绒山羊基因打靶体细胞核移植
- 特异性靶向绒山羊安全位点Rosa26的sgRNA及其应用
- 本发明提供了特异性靶向绒山羊安全位点Rosa26的sgRNA和利用CRISPR/Cas9完成定点敲除以及定点整合EGFP基因的应用。本发明首先利用生物信息学方法预测Rosa26位点的完整序列，然后针对该位点设计了两个sg...
- 刘东军张耀光高源郝斐宋卫国
- CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法
- 本发明利用CRISPER/Cas9系统介导完成山羊VEGF基因定点整合，其是依据山羊的<I>FGF5</I>基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体；然后将优化后的Ca...
- 呼啸刘东军郝斐高源梁浩
- 文献传递
- 绵羊羊水干细胞外源基因高效转染及快速筛选方法的建立
- 2013年
- 试验旨在建立绵羊羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFSC)外源基因高效转染及快速筛选方法,同时保持其多潜能特性。采用脂质体法,以pCMV-DsRed为报告质粒,转染绵羊AFSC,36h后,流式细胞仪分析外源基因的瞬时转染效率为69.17%。以浓度为6 mg/mL的G418筛选5h获得纯化转基因绵羊AFSC单克隆。转基因绵羊AFSC RT-PCR检测表达Oct-4、SSEA-1,体外悬浮培养可形成类胚体。结果表明,转基因标记绵羊AFSC保持了发育全能性的潜能,构建的转基因绵羊AFSC可以示踪性研究其在体内的分化路径和最终宿主。
- 王凤武郝斐魏著英刘东军荣威恒
- 关键词：绵羊报告质粒基因转染
