陈县城
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划创新研究群体科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫tetraspanins胞外环2编码基因的克隆表达及其免疫原性的初步研究被引量：1
- 2008年
- 目的克隆和表达日本血吸虫(中国大陆株)tetraspanins胞外环2编码基因(Sj-tsp-2),初步研究其免疫原性。方法通过全基因合成方式获得目的基因片段,构建重组质粒pET32a-Sj-tsp-2,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,在非变性条件下纯化融合蛋白。结果通过核苷酸测序证实重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白和目的肽段与预计大小基本一致。Western Blotting和ELISA结果说明,该融合蛋白具有良好的免疫原性。免疫定位分析显示,Sj-TSP-2主要在日本血吸虫体被表达。结论本实验成功克隆和表达了日本血吸虫Sj-tsp-2基因,并纯化获得其融合蛋白,为进行动物保护性实验奠定了基础。
- 付译节杨莉刘康袁创陈县城魏于全
- 关键词：日本血吸虫TETRASPANINS克隆融合蛋白免疫原性
- 小鼠sFlt重组腺病毒抑制小鼠Lewis肺癌的生长
- 2005年
- 背景与目的实体肿瘤组织的生长具有血管依赖性,肿瘤新生血管生成已证实为肿瘤生长的控制点之一。本研究拟探讨编码小鼠可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt1)的复制缺陷型腺病毒对肿瘤新生血管和肿瘤生长的影响。方法应用小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)株建立肺癌模型进行抗肿瘤的研究,以编码sFlt1的复制缺陷型重组腺病毒(sFlt1Adv)作为治疗组,编码绿色荧光蛋白的复制缺陷型重组腺病毒(GFPAdv)和生理盐水作为对照组,皮下接种小鼠LLC一周后,经尾静脉给药2次(间隔2周),第二次给药后2周,处死全部实验鼠,剥离肿瘤组织并称重,用3%多聚甲醛固定,用抗CD31作免疫组织化学染色。结果sFlt1Adv治疗组肿瘤明显小于GFPAdv对照组和生理盐水组(P<0.01),其抑瘤率达到71.8%;治疗组的肿瘤微血管密度低于GFPAdv对照组和生理盐水组(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒能抑制肿瘤组织的新生血管形成,从而抑制肿瘤的生长,有较好的应用价值。
- 阚兵姜愚杨金亮陈县城胡敏魏于全
- 关键词：血管内皮生长因子受体1小鼠LEWIS肺癌细胞
- 日本血吸虫tetraspanins胞外环2编码基因的克隆和表达
- 2008年
- 目的克隆和表达日本血吸虫(中国大陆株)tetraspanins胞外环2(EC-2)编码基因(Sj-tsp-2)。方法在日本血吸虫基因组中筛选获得与曼氏血吸虫tetraspanins基因胞外环2结构域序列同源的片段,经过一定修饰,采用全基因合成方式获得目的基因片段,构建重组质粒pET-32a-Sj-tsp-2,并转化至BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导表达,在非变性条件下亲和纯化融合蛋白。结果通过核苷酸测序证实重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白和目的肽段与预计大小基本一致。Western blotting结果说明,该融合蛋白具有良好的免疫原性。结论本实验成功表达了日本血吸虫Sj-tsp-2基因,并纯化获得其融合蛋白,为进行动物保护性实验奠定了基础。
- 付译节杨莉刘康袁创陈县城
- 关键词：日本血吸虫TETRASPANINS克隆融合蛋白
- MIG(CXCL9)表达载体构建及体外活性鉴定
- 2006年
- 目的构建M IG(CXCL 9)真核表达载体,为利用M IG研究肿瘤基因治疗奠定基础。方法从pBLA ST-M IG上切下含M IG全长的cDNA序列,定向插入pORF-m cs真核表达质粒,构建pORF-M IG重组质粒;然后经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染CO S-7细胞;再进一步用免疫印迹法鉴定重组质粒的表达活性,用趋化试验鉴定生物学活性。结果pORF-M IG重组质粒经酶切分析和测序证实含有M IG的全长cDNA序列,转染CO S-7细胞后高效表达M IG蛋白,对活化的淋巴细胞有趋化作用。结论成功构建了M IG(CXCL 9)真核表达质粒,为进一步利用pORF-M IG研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。
- 张汝田聆肖飞文艳君李炯侯建梅张伶李刚姚兵陈县城梅开
- 关键词：趋化因子转染肿瘤基因治疗
- 靶向EGFR的RNA干扰诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡的研究被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的靶向EGFR基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549的凋亡诱导作用。方法:构建靶向人EGFR基因的表达shRNA的质粒(pShEGFR),转染A549细胞,应用RT-PCR分析EGFR mRNA的表达情况,采用MTT法检测A549细胞的生长状况,通过流式细胞仪以及PI染色法进行细胞凋亡的定量检测和形态学分析。结果:pShEGFR转染组A549细胞中EGFR mRNA的表达水平,较转染同一载体连接无关序列的对照组(pShNEG组)、单纯脂质体组及PBS阴性对照组A549细胞均明显降低,F=425.640,P=0.000,其中较PBS阴性对照组细胞降低了74.5%。转染pShEGFR的A549细胞与3种不同对照组细胞相比,生长受到明显抑制,F=107.428,P=0.000,生长抑制率达54.9%,而转染pShNEG组和单纯脂质体组的A549细胞生长抑制率则分别为20%和3.1%。流式细胞仪检测结果显示,pShEGFR组细胞存在32.8%的凋亡率,PI荧光染色可见pShEGFR组细胞呈现出典型的凋亡形态学变化。结论:质粒介导的靶向人EGFR基因的pShEGFR能够有效地干扰NSCLC细胞系A549中EGFR基因的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡。
- 游佳赵新宇陈县城徐宁邓洪新
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡
- AS-mCLB1重组质粒体外抗肿瘤及化疗增敏作用被引量：3
- 2007年
- 研究反义全长小鼠细胞周期蛋白B1重组质粒(pAS-mCLB1)体外抗肿瘤及化疗增敏作用。扩增后少量抽提并纯化pAS-mCLB1,通过脂质体将其转染入小鼠露易丝肺癌(LL/2)细胞,RT-PCR和Western印迹测定细胞内细胞周期蛋白B1的表达,观察转染后细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。细胞转染48h后,用化疗药物健择(gemcitabine;0.2μmol/L)处理24h,MTT法测定健择对细胞的杀伤作用。研究提示pAS-mCLB1转染后LL/2细胞形态明显异常,细胞内细胞周期蛋白B1表达显著下调,细胞周期阻滞于G1期,增殖受抑,凋亡增加;健择对pAS-mCLB1转染后LL/2细胞的杀伤作用显著增强。重组质粒pAS-mCLB1体外具有明显的抗肿瘤作用,并能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,估计上述作用与其下调肿瘤细胞内细胞周期蛋白B1表达,从而诱导细胞周期阻滞及凋亡等作用相关。
- 张伶魏于全宋英蒋磊陈平陈县城李继承
- 关键词：细胞周期蛋白B1细胞周期阻滞化疗敏感性
