陈志瑾
- 作品数：67 被引量：190H指数：8
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选被引量：1
- 2004年
- 目的 测定重组人肽抗生素 h PAB- β及其突变体的抗菌活性 ,筛选理想的活性分子。方法 应用平板法和 MIC测定法检测重组表达的 h PAB- β及突变体 h PAB- β38、h PAB- β34对 8株实验室保存菌株及 10株临床分离菌株的杀菌能力 ,并以化学合成的肽抗生素 h PAB- β作对照 ;根据各目的分子抗菌能力的强弱 ,筛选理想的目标分子 ,并分析突变体结构的变化对其功能的影响。结果 重组 h PAB- β及突变体 h PAB- β38与化学合成的天然分子抗菌活性相当 ,对革兰氏阳性菌的 MIC在 12 5～ 2 5 0 μg/ml之间 ,对革兰氏阴性菌的MIC在 31～ 12 5 μg/ml范围内 ;突变体 h PAB- β34活性下降 4倍左右 ;结构分析表明 h PAB- β38与 h PAB- β参与二级结构中 α螺旋和 β片层构成的氨基酸残基完全相同 ,而 h PAB- β34则有显著不同 ,α螺旋少了 2个残基 ,3个 β片层中除 β2与 h PAB- β相同外 ,β1和 β3的构成均多 2个残基 ,推测 h PAB- β34二级结构的改变是其活性降低的主要原因。结论 重组肽抗生素 h PAB- β具有抗菌活性 ,删除 3个端残基的突变体 h PAB- β38活性不变 ,可作为 h PAB- β走向临床应用的一个新侯选者。
- 饶贤才陈志瑾金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军胡金川谭银玲胡福泉
- 关键词：肽抗生素突变体抗菌活性
- 重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化
- 2004年
- 目的 探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法 将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果 融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论 已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。
- 胡金川汪正清胡福泉金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军陈志瑾饶贤才
- 关键词：抗生素重组蛋白纯化融合蛋白
- 毕赤酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化被引量：6
- 2008年
- 目的在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法。方法采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-Ⅱ过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析。最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定。结果在培养至工程菌菌体湿重约200～250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L。发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的(体积浓缩约2/3)。再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的产物的纯度达98%以上,得率达32.5%。且纯化的目的蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性。结论酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的蛋白、酵母色素及脱盐的目的,为规模化制备hPAB-β创造了前提。
- 陈志瑾丛延广周莹冰侯瑞胡福泉饶贤才
- 关键词：毕赤酵母肽抗生素发酵纯化
- 碘液在芽孢染色中的应用研究被引量：1
- 2016年
- 目的探寻一种满意的芽孢染色方法 ,同时该方法能克服染料加温后挥发给实验操作人员带来的身体伤害。方法以碘液为媒染剂,用冷染方法替代传统芽孢加温染色,然后进行细菌涂片、干燥、固定、染色。初染液为石炭酸复红5 min,碘液媒染1 min,95%乙醇脱色5 s,碱性美兰复染1 min。比较石炭酸复红染色后加碘液、石炭酸复红染色不加碘液、石炭酸复红加温染色不加碘液的染色效果。结果石炭酸复红染色后加碘液与石炭酸复红加温染色不加碘液的染色效果相同,石炭酸复红染色不加碘液也能看出芽孢,但不明显。结论用碘液助染可获得满意的芽孢染色结果,且用该法可减少石炭酸挥发给实验操作人员带来的危害。
- 金晓琳金浩龙侯瑞熊坤陈志瑾
- 关键词：碘苯酚
- 革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用被引量：11
- 2009年
- 目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。
- 王景穆媛嫒黎庶陈志瑾熊坤丛延广
- 关键词：突变株基因功能
- 重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选
- 2003年
- 饶贤才陈志瑾金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军胡金川谭银玲胡福泉
- 关键词：突变体活性测定基因工程基因表达
- 酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化及其抗单纯疱疹病毒活性分析
- 肽抗生素/(Peptide antibiotics/)为生物体基因编码的小肽,通常由12～60个氨基酸残基构成,分子量小于5kDa。它们在动、植物中的广泛分布,提示其在生物体的生长及抗感染中发挥重要作用。虽然发现了一些阴...
- 陈志瑾
- 关键词：高密度发酵表达纯化单纯疱疹病毒病毒培养
- 文献传递
- 酵母表达肽抗生素hPAB-β抗单纯疱疹病毒活性分析
- 肽抗生素(Peptide antibiotics)为生物体基因编码的小肽,通常由12～60个氨基酸残基构成,分子量小于5kDa。它们在动、植物中的广泛分布,提示其在生物体的生长及抗感染中发挥重要作用。虽然发现了一些阴离子...
- 陈志瑾饶贤才丛延广杨杰王冬梅胡珍原薇薇
- 文献传递
- 鞭毛抗原与细菌的群集运动被引量：1
- 2006年
- 群集运动是指在培养基表面某些运动细菌依赖鞭毛的群体迁移行为,涉及繁殖体细胞分化成群集细胞,发生形态、代谢以及蛋白表达等显著变化。菌细胞密度、表面接触和生理学信号均可成为群集运动的刺激因素。群集运动的关键是鞭毛的生物合成,flhDC鞭毛操纵子是支配分化和迁移的细菌调控网络的焦点。
- 陈志瑾丛延广饶贤才
- 关键词：群集运动分子机制鞭毛抗原
- 甲型副伤寒沙门菌减毒疫苗株的制备
- 本实验室以甲型副伤寒沙门菌CMCC50093为野生株，先经实验室培养初步筛选，进而采用自杀载体pYG4，通过同源重组的方式敲除yncD基因，获得一株甲型副伤寒沙门菌减毒疫苗株候选。通过与野生株生物学性状比较分析，该疫苗株...
- 熊坤陈志瑾胡晓梅胡启文饶贤才丛延广
- 关键词：生物学性状
- 文献传递
