陈永清
- 作品数：135 被引量：363H指数：10
- 供职机构：兰州大学第二医院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目甘肃省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 转化生长因子-β_1对大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40重构的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:采用大鼠心房纤维化的模型,探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白(Cx)40重构的影响及阿托伐他汀的防治作用。方法:将30只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组(A)、盐酸异丙肾上腺素组(B)、盐酸异丙肾上腺素+阿托伐他汀组(C)。8周后处死,Masson染色法测大鼠心房纤维化程度,免疫组化法显示大鼠心肌组织TGF-β1和Cx40分布特征,并半定量统计分析。rt-PCR测大鼠心肌组织中Cx40mRNA表达情况。结果:与A组相比,B组大鼠心肌组织TGF-β1含量显著升高(P<0.01),心房纤维化程度增加,Cx40含量显著减少(P<0.01),且分布紊乱;与B组相比,C组大鼠心肌组织中TGF-1β含量减少(P<0.05),心房纤维化程度明显减轻,Cx40含量升高(P<0.05),分布基本恢复正常;与A组相比,C组大鼠各指标均无明显变化(P>0.05)。结论:心肌组织中TGF-β1含量增加可能是心房纤维化和Cx40重构的机制之一;阿托伐他汀可通过降低心肌组织中TGF-β1含量显著改善心房纤维化程度和Cx40重构。
- 张卫泽李丹丹马凌陈永清王菲宋振华惠玲玲王智刚
- 关键词：心房纤维化阿托伐他汀
- 构建线粒体钙离子摄入蛋白1慢病毒表达载体及在H9C2细胞中的应用被引量：1
- 2016年
- 背景:线粒体钙离子摄入蛋白1(mitochondrial calcium uptake 1,MICU1)是维持细胞线粒体钙稳态的重要分子,MICU1对线粒体钙稳态的调节可能在糖尿病心肌病的发生及发展中起着重要作用,但目前机制尚不明确。目的:构建MICU1基因的慢病毒表达载体,产毒感染H9C2细胞,评价MICU1基因在H9C2细胞中的表达效果,为后续在细胞水平研究糖尿病心肌病的发生及发展建立平台。方法:PCR提取H9C2细胞MICU1基因,SpeⅠ、EcoRⅠ双酶切后,将MICU1基因片段插入慢病毒载体pR RLsin.CMV.e FP中,构建慢病毒表达质粒pR RLsin.CMV.MICU1-e FP。使用pC MVDR8.91、pC MV-VSVG共转染于293T细胞中包装产毒,用于感染H9C2细胞。通过RT-PCR及Western blot检测感染后H9C2细胞中MICU1 m RNA及蛋白的表达。共聚焦显微镜检测Rhod-2染色H9C2细胞后线粒体钙水平。结果与结论:(1)MICU1基因成功插入pR RLsin.CMV.e FP慢病毒表达质粒;(2)转染pR RLsin.CMV.MICU1-e FP慢病毒表达质粒后,可见293T细胞表达绿色荧光蛋白,并且MICU1的蛋白表达明显升高;(3)病毒液感染H9C2细胞后,MICU1的蛋白及m RNA水平较未感染组及空质粒包装组明显升高;(4)Rhod-2染色后观察发现,MICU1能够明显增强线粒体钙水平;(5)结果表明,pR RLsin.CMV.MICU1-e FP慢病毒能够高效感染H9C2细胞,为构建永生化细胞系奠定基础。
- 荆哲刘峰舟刘燕陈永清
- 关键词：慢病毒感染线粒体蛋白质类H9C2细胞
- 辛伐他汀对血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响被引量：3
- 2001年
- 目的 探讨辛伐他汀 (Simvastatin ,Sim)对血管升压素 (AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响 ,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法 采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法测定DNA合成、四氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞数目 ,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用及甲羟戊酸 (Meval onate,MVA)干预的影响。结果 ①CFs(2 0 0个细胞 )的3H TdR掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6mol/LSim和 1 0 - 5mol/LSim组的3H TdR掺入率分别为 (1 1 75± 2 0 2 6 6 )、(771± 1 6 4 86 )cpm ,明显低于对照组 (1 95 5± 3 72 45 )cpm(P <0 0 1 ) ;②MTT比色法A490 值随Sim浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6、1 0 - 5mol/LSim组的A490 值分别为 0 2 1 5± 0 0 4 1和 0 1 6 3± 0 0 1 8,均较对照组A490值 0 3 93± 0 0 4 8显著降低 (P <0 0 1 ) ;③ 1 0 - 5mol/LSim +1 0 - 3mol/LMVA组的3H TdR掺入率、MTT比色法A490 值分别为 (1 995±3 5 3 83 )cpm和 0 41 8± 0 0 4 5 ,均显著高于 1 0 - 5mol/LSim组 (P <0 0 1 )。结论 辛伐他汀可抑制AVP诱导的CFsDNA的合成和细胞数目增加 ,提示Sim可抑制CFs增殖 ,其机制可能通过甲?
- 徐琳赵连友范延红田建伟杨学东张海涛陈永清彭育红
- 关键词：辛伐他汀甲羟戊酸血管升压素心脏成纤维细胞
- β_1整合素反义寡核苷酸抑制精氨酸加压素诱导下心脏成纤维细胞DNA合成的作用
- 2010年
- 目的:探讨β1整合素反义寡核苷酸(ASODN)对精氨酸加压素(AVP)诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)DNA合成功能的抑制作用。方法:以胰蛋白酶消化法分离、培养SD大鼠的CFs,采用MTT吸光度法及3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法,原位酶联免疫吸附测定(ELISA)等技术,观察基础状态下β1整合素ASODN对CFs细胞数目及DNA合成功能的影响;β1整合素ASODN对AVP诱导的β1整合素表达,CFs增殖及DNA合成功能的影响;基础状态下设空白对照组、反义链组和正义链组;AVP诱导下设空白对照组、1×10-7mol/L AVP组、反义链+1×10-7mol/L AVP组和正义链+1×10-7mol/L AVP组,每组均为8个复孔。结果:①反义链组的CFs细胞数目及3H-TdR掺入率明显低于空白对照组及正义链组,并且均有统计学意义(P<0.01);正义链组与对照组比较无统计学意义。②1×10-7mol/LAVP组和正义链+1×10-7mol/LAVP组的β1整合素表达水平,CFs细胞数目均高于空白对照组(P<0.05),β1整合素ASODN与AVP共同作用组的β1整合素表达水平,CFs细胞数目明显低于1×10-7mol/LAVP组和正义链+1×10-7mol/L AVP组,并且均有非常显著性意义(P<0.01)。③1×10-7mol/L AVP组和正义链+1×10-7mol/L AVP组的CFs3H-TdR掺入率均高于空白对照组(P<0.05),β1整合素ASODN与AVP共同作用组的CFs3H-TdR掺入率明显低于空白对照组、1×10-7mol/L AVP组和正义链+1×10-7mol/L AVP组,并且均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:β1整合素ASODN不但抑制基础状态下CFs生长及DNA合成代谢,而且抑制AVP刺激β1整合素表达、CFs增殖、DNA合成的作用,说明针对特异性靶基因片段合成的ASODN可能抑制β1整合素遗传信息传递的某个环节,干扰细胞内外信息的传递,影响β1整合素介导的CFs与细胞外基质的黏附,从而产生拮抗AVP刺激心脏间质重构形成的作用。进一步提示应用反义药物防治高血压心脏间质重构的可能性。
- 彭育红赵连友汝磊生杨学东陈永清范延红
- 关键词：心肌成纤维细胞反义寡核苷酸类
- 血管紧张素Ⅱ对大鼠心房Cx40重构的影响及贝那普利的干预作用被引量：1
- 2007年
- 目的采用大鼠肾上腹主动脉部分结扎的模型,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心房缝隙连接蛋白(connexin,Cx)40重构的影响及贝那普利的干预效果。方法将30只雄性Wistar大鼠随机数字表法分为对照组(C组)、腹主动脉结扎组(A组)、结扎+贝那普利组(B组)。喂养8周后处死,用放射免疫法测血浆及心肌组织AngⅡ含量,用免疫组化方法检测大鼠心房Cx40的分布特征,半定量分析Cx40的含量。结果与C组相比,A组血浆、心肌AngⅡ含量均明显升高(P<0.01),而B组则无明显变化(P>0.05)。A组大鼠心房Cx40含量减少(P<0.01),并向侧边分布增加;而B组Cx40含量较A组增加(P<0.01),且分布不均一程度减轻。结论AngⅡ升高可导致心房Cx40重新分布和表达减少;贝那普利通过降低AngⅡ水平,可有效减轻心房Cx40的重构。
- 邵鹏张卫泽陈永清马凌张明旭
- 关键词：缝隙连接蛋白40贝那普利
- IL-1β对AVP诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用被引量：8
- 2000年
- 目的 探讨白介素 1β(IL 1β)对精氨酸加压素(AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CF)胶原合成的影响。方法 采用3H 脯氨酸掺入法 ,观察IL 1β对AVP诱导的CF胶原合成的影响。结果 ( 1)在基础状态下 ,1×10 5U/LIL 1β组CF3H 脯氨酸掺入率为 ( 94 7± 2 1 4)cpm/ 5× 10 3 细胞 ,较对照组〔( 16 5 7± 31 2 )cpm/ 5× 10 3 细胞〕显著降低 (P <0 0 5 ) ;( 2 )CF3H 脯氨酸掺入率随AVP作用浓度的增加而增高 ,其中 10 7,10 6mol/LAVP组的CF3H 脯氨酸的掺入率分别为 :( 5 41 3± 95 8和 5 6 5± 72 4)cpm/ 5×10 3 细胞 ,明显高于对照组〔( 16 5 7± 31 2 )cpm/ 5× 10 3 细胞 ,P均 <0 0 1〕 ;( 3)IL 1β可以浓度依赖的方式抑制 10 7mol/LAVP诱导的CF3H 脯氨酸掺入率 ,其中 1× 10 5U/LIL 1β +AVP组和 2× 10 5U/LIL 1β +AVP组CF3H 脯氨酸的掺入率分别为 :( 2 71 3± 42 2和 2 19 7± 37 1)cpm/ 5× 10 3 细胞 ,较AVP组明显降低 (分别为P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论IL 1β可抑制基础状态下和AVP诱导的CF合成胶原 。
- 徐海丽赵连友杨学东乔怀宇彭育红陈永清
- 关键词：IL-1Β心脏成纤维细胞胶原合成精氨酸加压素
- 心脏肥大细胞密度在自发性高血压大鼠心肌重构中的作用被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨心脏肥大细胞在自发性高血压大鼠(SHR)心肌重构中的作用。方法:应用病理检查、计算机分析结合逆转录-聚合酶链式反应等方法,观察SHR及对照Wistar Kyoto大鼠(WKY)的收缩压(SBP)、左心室重量指数(LVI)、心肌细胞直径、肥大细胞密度、心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积比(PVCA)和心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的变化。肥大细胞密度与LVI、CVF及PVCA之间的关系采用相关分析。结果:与WKY组比较,SHR组SBP、LVI、心肌细胞直径、心肌细胞短径、肥大细胞密度、CVF、PVCA、心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原含量均明显增加(P<0.01)。心脏肥大细胞密度与LVI、CVF及PVCA存在明显的正相关(相关系数分别为0.67、0.87和0.95, P<0.01)。结论:心脏肥大细胞密度增加可能是促进SHR心肌重构的重要原因。
- 王先梅赵连友陈永清武利军黄志刚牛晓琳
- 关键词：肥大细胞自发性高血压大鼠心肌重构胶原
- 心脏糜酶对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响被引量：4
- 2005年
- 目的:观察心脏糜酶对自发性高血压大鼠(SHR)心肌组织胶原合成和心肌纤维化的影响。方法:应用病理检查、计算机分析结合逆转录-聚合酶链式反应等方法,检测SHR应用糜酶抑制剂(Chy-Ⅰ)组、SHR组及Wistar Kyoto大鼠(WKY)组的收缩压、心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积比(PVCA)和心肌糜酶及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果:Chy-Ⅰ组心脏CVF、PVCA分别为(26.8±8.7)%和0.4±0.1,SHR组分别为(46.4±7.8)%和1.9±0.9,WKY组为(24.4±10.7)%和0.4±0.1,Chy-Ⅰ组比SHR组明显下降(P<0.01),与WKY组无明显差别(P>0.05)。Chy-Ⅰ组心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和糜酶mRNA表达相对含量均明显低于SHR组(P<0.01), 与WKY组无明显差别(P>0.05)。应用Chy-Ⅰ后大鼠血压无改变。结论:心肌组织糜酶参与胶原的合成,参与细胞外基质的形成和降解,促进自发性高血压大鼠心肌纤维化。
- 赵连友王先梅武利军陈永清牛晓琳黄志刚
- 关键词：糜酶自发性高血压大鼠心肌纤维化胶原
- 尾加压素II对新生大鼠心肌细胞肥大的影响被引量：7
- 2004年
- 目的 :观察尾加压素Ⅱ (UⅡ )对心肌细胞 (MC)肥大的影响及其与钙离子的关系 ,为探讨高血压左室肥厚发生机制提供理论依据 .方法 :以培养的SD乳鼠心肌细胞为实验模型 ,通过测定MC表面积、蛋白含量和蛋白合成速率 ,以及免疫荧光观察MC内肌原纤维的变化趋势来探讨UⅡ对MC肥大的影响 .结果 :①随着UⅡ浓度的增加 ,MC表面积明显增加 ,呈剂量依赖性 ,其中 1 0 -8和 1 0 -7mol/LUⅡ组MC表面积分别为 (2 0 4 6 .3± 2 6 8.4 )和 (36 6 2 .2± 2 5 9.2 ) μm2 ,均明显高于空白对照组的 (936 .2± 99.8) μm2 ,差异有非常显著意义 (P <0 .0 1 ) .②随着UⅡ浓度的增加 ,MC的蛋白含量和蛋白合成速率呈递增趋势 ,其中 1 0 -8和 1 0 -7mol/LUⅡ组MC蛋白含量分别为 (1 .6 0± 0 .37)和 (1 .89± 0 .2 5 )ng/cell,明显高于对照组(0 .83± 0 .1 6 )ng/cell,差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1 ) .蛋白合成速率分别为 (2 5 0 8.33± 2 99.81 )和 (2 898.83± 6 2 5 .4 1 )cpm/well,与对照组 (1 0 2 6 .83± 91 .6 7)cpm/well比较 ,差异非常显著 (P <0 .0 1 ) .③ 1 0 -7mol/LUⅡ作用心肌细胞 2 4h后 ,荧光显微镜下观察到细胞边界增大 ,肌原纤维发生增粗与重排 .结论 :UⅡ能够诱导心肌细胞的肥大 ,为研究高血压及其他心血管?
- 陈军红赵连友郑强荪陈永清王斌
- 关键词：心肌细胞肥大
- p27蛋白与心血管疾病被引量：1
- 2001年
- p2 7蛋白作为细胞周期的负性调节因子 ,能抑制细胞增殖 ,使其停滞于 G1 期。心血管系统中有大量以增殖异常为细胞学本质的疾病 ,p2 7蛋白参与这些疾病的发生、发展 ,进一步研究 p2 7蛋白的作用将为阐明其发病机制、寻求有效治疗途径提供重要线索。
- 陈永清赵连友
- 关键词：P27蛋白细胞周期调控心血管疾病
