韩少波
- 作品数：15 被引量：32H指数：5
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制被引量：2
- 2013年
- 目的 研制鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法 用纯化的鼠疫菌F1抗原作为包被抗原,HRP标记的F1抗原作为酶标抗原,建立鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、敏感性、特异性、准确性和稳定性验证。结果 鼠疫菌F1抗原的最佳包被浓度为0.6μg/ml,HRP标记的F1抗原的最佳工作浓度为1︰7 000。制备的试剂盒检测精密性质控品的板内变异系数为6.5%,板间变异系数为7.1%;检测高、中、低浓度内部质控品和精密性质控品的回收率在95%～112%之间;检测阳性血清和阴性血清的敏感性为100%;与正常人血清、正常兔血清、正常小鼠血清、兔抗假结核耶尔森菌血清、小鼠抗假结核耶尔森菌血清均无交叉反应;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论 成功制备了鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,达到了体外诊断试剂的注册要求,可用于鼠疫的临床监测、诊断及预后判断。
- 常娅莉席仲兴吴智远徐秉臣张正雷韩少波热娜雷刚彭林锋卜培英袁浩嘉王秉翔
- 关键词：F1抗体酶联免疫吸附测定
- 二甲基三十六烷基铵-卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应被引量：2
- 2009年
- 目的探讨二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应。方法采用热酚法制备BCG—PSN，与DDA联合作为融合蛋白AMM（Ag85B—MPT64 190-196-Mtb8．4）佐剂免疫小鼠，设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂（IFA）及单独应用DDA或BCG—PSN一种佐剂的各组作为对照。应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应。结果分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，用特异性抗原Ag85B刺激后，AMM＋DDA＋BCG—PSN疫苗组、AMM＋DDA组和卡介苗组小鼠每1×10^6个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64，均明显高于AMM＋PBS组（40±4）、AMM＋IFA组（10±3）、AMM＋BCG．PSN组（132±18）和生理盐水组（8±4），差异有统计学意义（t值为2．923—7．118，均P〈0．05）；与单用DDA组比较，添加DDA和BCG—PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2／IgG，较高（0．125和0．025），但γ-干扰素分泌水平没有增高。结论AMM＋DDA＋BCG—PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应，DDA＋BCG—PSN（尤其是DDA）具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应。
- 宋楠楠王秉翔史大中傅林锋雒彧于红娟韩少波焦磊郄亚卿王洪海张颖祝秉东
- 关键词：结核疫苗亚单位卡介苗
- 鼠疫溶菌疫苗免疫小鼠的体液免疫应答被引量：6
- 2008年
- 为选择以F1抗原为主要有效成分的鼠疫溶菌疫苗(Whole cell lysate of Yersinia pestis vaccine,WCLY)的免疫程序,设计了这组试验。在37℃培养鼠疫EV菌,通过超声波裂解法制备鼠疫溶菌疫苗。设计(0,2周)、(0,4周)、(0,2,4周)三种免疫程序,以每剂总蛋白量7.9μg、31.5μg和126.0μg三个剂量皮下接种NIH小鼠。分别在第一针免疫后2、4、8、12周采集血清,通过间接ELISA检测抗鼠疫菌F1抗原和总抗原抗体。结果显示:免疫后血清抗体上升很快,2周内即可测出;无论哪种免疫程序,至12周时抗体滴度仍保持高水平;加强免疫后,抗体水平在4周或8周达到较高,可与活疫苗免疫者相比;溶菌疫苗的接种剂量为7.9μg时,动物只出现轻度不良反应。提示鼠疫溶菌疫苗需要两剂免疫,最短可间隔2周,接种剂量应不超过7.9μg,疫苗中应富含F1抗原。
- 傅林锋常娅莉裴明玉韩少波马维民王秉翔
- 关键词：鼠疫菌体液免疫应答
- 炭疽活疫苗家兔免疫力与血清抗芽胞IgG关系的研究被引量：6
- 2003年
- 炭疽疫苗是预防炭疽流行和炭疽生物恐怖的重要手段。已有动物实验表明 ,炭疽活疫苗的保护力优于以保护性抗原为主要成份的无细胞疫苗 ,但两类现行疫苗都有待重新评价和改进。炭疽疫苗的效力必须用适当的实验室方法进行检测与分析才能了解其性质和细节。试验中力图探寻炭疽活疫苗家兔免疫力与血清抗芽胞抗体水平的关系。用“皮上划痕人用炭疽活疫苗”免疫家兔 ,以特定制备的炭疽芽胞抗原用ELISA法检测血清抗炭疽芽胞IgG抗体水平 ,并用强毒炭疽杆菌攻击进行效力试验。免疫家兔血清几何平均抗芽胞IgG滴度在免疫后一个月内持续升高 ,14d达到 2 0 6 ,2 8d时达到 776 ,这时其抵抗 2 0MLD毒菌攻击的保护率为 80 % ,符合中国生物制品规程要求的保护力。一个月后抗体水平开始下降 ,4 2d时滴度降至 2 2 3。实验所揭示的炭疽减毒活疫苗诱导的家兔抗芽胞IgG抗体与抗炭疽保护力之间的关系 ,既为评价现行疫苗提供了资料 。
- 王秉翔韩少波尤明强虞雪梅胡海涛
- 关键词：炭疽杆菌炭疽疫苗
- 卡介苗多糖核酸—DDA佐剂的制备及应用
- 本发明为卡介苗多糖核酸——DDA佐剂的制备及其应用，涉及生物工程，尤其是结核亚单位疫苗的免疫佐剂，目前唯一使用的结核病疫苗是BCG，但是BCG在不同地区、不同人群中的保护效率差异很大，以细胞免疫为主的结核亚单位疫苗要解决...
- 祝秉东王秉翔宋楠楠付林峰雒彧韩少波于红娟裴明玉郄亚卿马维民王洪海
- 文献传递
- 炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点被引量：5
- 2014年
- 【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。
- 高志奇王东澍冯尔玲王秉翔惠一鸣韩少波焦磊刘先凯王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌分子分型
- 炭疽灭活和裂解芽胞抗原免疫家兔后血清中的IgG抗体应答
- 2010年
- 炭疽杆菌芽胞在炭疽免疫中发挥基本作用。实验中以炭疽活芽胞疫苗为原形,建立了制备灭活和裂解炭疽芽胞的方法,研究了各种灭活和裂解炭疽芽胞疫苗不同浓度、不同剂次免疫家兔的抗芽胞和毒素IgG应答,总结分析了各种灭活和裂解炭疽芽胞疫苗用于新疫苗成分之一的可能性。甲醛灭活炭疽芽胞疫苗设芽胞浓度2.5×108剂量组、5×108剂量组、1×109剂量组,于0、4、8周时3次免疫。在3剂免疫后血清抗炭疽芽胞IgG水平持续升高,首次免疫后4、8、12周时家兔血清中抗芽胞IgG几何平均滴度可达到600～16000。裂解炭疽芽胞疫苗的制备和动物免疫中,只采取了2.5×108芽胞浓度,两剂免疫,免疫时间为0、4周。在首次免疫后4、8、12周时家兔血清中抗芽胞IgG几何平均滴度分别为362、776和388。各时间点采集的家兔血清未能测出或只测出极微量的抗炭疽毒素IgG。通过上述研究认为,以裂解炭疽芽胞抗原作为炭疽疫苗成分之一,其抗原性和免疫原性是适宜的;免疫剂量可以设定为2.5×108芽胞浓度上下;免疫次数可定为2剂间隔1个月。
- 韩少波尤明强惠一鸣傅林锋胡丽娜魏东王秉翔
- 关键词：炭疽杆菌炭疽疫苗
- 鼠疫菌V抗原的单抗系统建立和免疫学定量检测
- 目的：制造鼠疫菌V抗原的鼠单克隆抗体，经抗体表位分析建立单抗系统，并通过此单抗系统建立免疫学检测鼠疫菌V抗原含量的方法，进行鼠疫疫苗研制中V抗原的质量控制。
方法：用鼠疫菌V抗原免疫雌性BALB/c小鼠，取小鼠...
- 常娅莉惠一明王秉翔焦磊胡丽娜傅林锋王革卜培英裴明玉万艳韩少波
- 关键词：鼠疫耶尔森菌双抗体夹心免疫学检测
- 文献传递
- 重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺。方法研究LcrV工程菌pET-V/BL21(DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺。收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定。结果经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36%,含量为1.6 g/L。发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95%,蛋白总回收率达8.5%以上。各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求。结论已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础。
- 胡丽娜常娅莉魏东万艳马维民傅林锋王革吴智远韩少波王秉翔
- 关键词：大肠杆菌发酵纯化
- 卡介苗多糖核酸—DDA佐剂的制备及应用
- 本发明为卡介苗多糖核酸——DDA佐剂的制备及其应用，涉及生物工程，尤其是结核亚单位疫苗的免疫佐剂，目前唯一使用的结核病疫苗是BCG，但是BCG在不同地区、不同人群中的保护效率差异很大，以细胞免疫为主的结核亚单位疫苗要解决...
- 祝秉东王秉翔宋楠楠付林峰雒彧韩少波于红娟裴明玉郄亚卿马维民王洪海
- 文献传递
