魏立
- 作品数：33 被引量：123H指数：7
- 供职机构：上海市伤骨科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委医学引导类科技项目上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低氧诱导因子-1α在绝经后骨质疏松中调控作用的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的探讨在绝经后骨质疏松的发生、发展过程中,低氧诱导因子-lα(HIF-1α)对于成骨细胞功能的调控作用。方法 2004年10月至2006年5月,应用 Cre-Loxp 重组酶技术,建立成骨细胞条件性敲除 HIF-1α小鼠,取3个月龄雌性野生型和敲除型小鼠各24只行卵巢切除术,术后0、4、8周取材行 HE 染色、四环素荧光双标记、Micro-CT、RT-PCR、Western-blotting 检测。结果与野生型小鼠相比,敲除型小鼠骨小梁的数目、体积、厚度,骨密度,骨矿沉积速度,血管内皮生长因子(VEGF)、RunX2、ALP、OC 基因在 mRNA 水平的表达,VEGF、RunX2在蛋白水平的表达均明显降低,尤其以术后8周最为明显。结论在绝经后骨质疏松的发生、发展过程中,成骨细胞条件性敲除 HIF-1α后成骨功能降低,HIF-1α能够调控成骨细胞的成骨功能。
- 刘晓东邓廉夫王君齐进周琦王晋申魏立朱雅萍Clemens TL
- 关键词：骨质疏松绝经后成骨细胞低氧诱导因子-1Α
- 成骨细胞与骨髓间充质干细胞DNA甲基化差异的实验研究
- 2008年
- 目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)与成骨细胞(OB)在体外传代培养过程中DNA甲基化的差异,并分析BMSCs与OB成骨表型基因甲基化状态与其mRNA表达的相关性。方法采用甲基化特异性-聚合酶链反应(MSP)方法检测BMSCs、OB基因组DNA中骨钙素(OC)、Osterix(OSX)、Runx2等成骨表型和转录基因与抑癌基因p16的甲基化状态,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述成骨表型基因的mRNA表达。同时以茜素红染色法鉴定OB。结果OC、OSX、Runx2基因在体外培养的各代BMSCs中呈高甲基化状态,未检出这些基因的mRNA表达;在OB中,OC、OSX、Runx2基因均呈低甲基化状态,且相应基因mRNA均呈阳性表达。p16在BMSCs和OB中均呈低甲基化状态。BMSCs与OB分别在体外稳定培养5代,各代的成骨表型基因的甲基化状态和mRNA表达量的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论DNA甲基化模式在BMSCs和OB中呈现出细胞特异性差异,且基因甲基化状态可能控制着相应基因的表型表达。在体外稳定培养、传代的条件下,BMSCs和OB均能呈现基因组稳定的特征,未发生明显的DNA甲基化模式的改变,为临床安全应用BMSCs奠定了理论基础。
- 袁石福张伟滨沈宇辉朱雅萍王珺魏立
- 关键词：DNA甲基化表观遗传学基因沉默
- 利塞膦酸钠对骨质疏松大鼠牙槽骨Bcl-2、BAX表达的影响被引量：1
- 2018年
- 目的:观察利塞膦酸钠对骨质疏松大鼠下颌牙槽骨显微结构、抗凋亡因子Bcl-2、凋亡因子BAX表达以及骨细胞凋亡的影响。方法:30只6月龄雌性SD大鼠,随机分为3组(每组10只),即Sham组(假手术组)、OVX组(接受双侧卵巢切除术)和RIS组(接受双侧卵巢切除术,然后给予利塞膦酸钠);造模3个月后,取各组大鼠下颌骨进行micro-CT扫描,并通过TUNEL染色以及Bcl-2、BAX免疫组织化学染色检测下颌骨骨细胞的凋亡。采用SPSS 13.0软件包对组间数据进行比较。结果:与Sham组相比,OVX组牙槽骨丧失和骨细胞凋亡明显增多;RIS组与OVX组相比,骨细胞凋亡显著减少,BV/TV显著增加,Bcl-2表达增加,Bcl-2/BAX比值增加(P<0.05)。结论:利塞磷酸钠增加下颌牙槽骨中Bcl-2的表达和Bcl-2/BAX的比值,部分逆转去卵巢骨质疏松大鼠的牙槽骨丧失,减少下颌骨骨细胞凋亡。
- 魏立周琦江莉婷李宁高益鸣
- 关键词：卵巢切除术二膦酸盐骨细胞凋亡
- 低氧/低氧诱导因子-1α通路对成骨细胞与破骨细胞耦联的调控作用被引量：2
- 2012年
- 目的探讨低氧/低氧诱导因子(HIF)-1α通路对成骨细胞与破骨细胞耦联的调控作用。方法取出生2～3 d条件性基因敲除小鼠颅盖骨的成骨细胞与4～8周龄C57BL/6小鼠股骨破骨细胞的前体细胞,建立基因敲除小鼠成骨细胞与破骨细胞前体细胞共培养体系(野生型、HIF-1α-/-、Vhl-/-、HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养)。采用RT-PCR技术检测成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA和骨保护素(OPG)mRNA的表达以及破骨细胞中标志酶基因TRAP mRNA的表达,甲苯胺蓝染色观察破骨细胞溶骨形成的骨陷窝。结果 RT-PCR检测结果显示:与野生型共培养比较,HIF-1α-/-共培养的成骨细胞中RANKL mRNA表达上调、OPG mRNA表达下调(均P<0.05),破骨细胞TRAP mRNA表达上调;Vhl-/-共培养和HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养的成骨细胞中RANKL mRNA表达下调、OPG mRNA表达显著上调(均P<0.05),破骨细胞TRAP mRNA表达下调;随着共培养时间的延长,成骨细胞中RANKL mRNA和OPG mRNA表达均逐渐减少,而破骨细胞TRAP mRNA表达均逐渐增加。甲苯胺蓝染色倒置显微镜观察显示:共培养第9天,破骨细胞骨吸收陷窝出现;随着共培养时间的延长,骨吸收陷窝面积和深度逐渐增加;与野生型共培养比较,HIF-1α-/-共培养的破骨细胞骨吸收陷窝较大且较深,Vhl-/-和HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养的破骨细胞骨吸收陷窝较小且较浅。结论低氧/HIF-1α通路激活后,成骨细胞抑制破骨细胞的分化功能;低氧/HIF-1α通路阻断后,成骨细胞促进破骨细胞的分化功能。
- 王络文邓廉夫朱雅萍魏立齐进
- 关键词：成骨细胞破骨细胞共培养低氧诱导因子-1ΑVHL
- 大鼠髁突软骨细胞冻存复苏后的生物学特性观察被引量：3
- 2012年
- 目的观察低温冻存1月后,不同年龄大鼠髁突软骨细胞的生物学特性。方法体外培养出生后1天、7天、14天、28天共4组SD大鼠髁突软骨细胞。对冻存复苏后的细胞进行形态学观察;甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色检测其对糖胺聚糖(GAG)、Ⅱ型胶原的合成能力;台盼蓝拒染试验测定细胞成活率;MTT法观察细胞增殖能力;实时定量-聚合酶链式反应(real time-PCR)检测冻存后细胞增殖核抗原(PCNA)基因表达情况。结果低温冻存后,各年龄组大鼠髁突软骨细胞仍能保持软骨细胞特有的形态及特性;细胞成活率均大于90%;生长曲线近似"S"型;冻存后各年龄组细胞pcna基因表达较冻存前无显著统计学差异(P>0.05)。结论低温冻存1月后的大鼠髁突软骨细胞成活率高,并保持了其生物学特性及增殖活性。
- 江莉婷朱雅萍魏立高益鸣
- 关键词：髁突软骨细胞冻存生物学特性
- 不同氧环境中破骨细胞特异性基因的表达被引量：2
- 2014年
- 背景:课题组以往研究证实,氧浓度过低乃至处于低氧时(体积分数2%O2),破骨前体细胞的增殖及破骨细胞的分化和功能都受到抑制,但体外培养的破骨细胞在不同氧环境下的基因表达未见有相关报道。目的:实验拟观察不同氧环境下破骨细胞各特异性基因的表达规律,探寻氧环境改变影响破骨细胞分化的表达机制。方法:将破骨前体细胞株经质量浓度均为10μg/L的核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导成为成熟的破骨细胞,然后分别置于常氧、组织氧、低氧(体积分数20%,7%,2%)条件下培养,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞形成的变化,并分别在培养第1-7天收集细胞,通过定量PCR方法检测核因子κB受体活化因子,肿瘤坏死因子受体相关因子6,抗酒石酸酸性磷酸酶,组织蛋白酶K基因mRNA的表达。结果与结论:低氧条件下抗酒石酸酸性磷酸酶阳性的破骨细胞数显著低于组织氧和常氧培养时形成的抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数(P<0.05)。不同氧环境下,破骨细胞中核因子κB受体活化因子mRNA的表达无明显改变,组织氧和常氧培养下肿瘤坏死因子受体相关因子6 mRNA的表达在培养第5天最高(P<0.05)。随着氧浓度的降低,抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K mRNA表达时间延后,组织氧培养条件下此2者的表达可以保持在最高水平。结果证实,与常氧和低氧条件相比,破骨细胞在组织氧培养条件下培养时更易促进其分化,从而维持其活性和功能。
- 梁静周琦魏立胡方琼王君
- 关键词：破骨细胞骨组织构建抗酒石酸酸性磷酸酶核因子ΚB受体活化因子组织蛋白酶K
- 低氧诱导因子-1α和VHL对小鼠软骨内成骨过程的调控机制被引量：1
- 2009年
- 目的研究低氧诱导因子1α(HIF-1α)和von Hippel-Lindau(VHL)在成骨细胞水平对小鼠软骨内成骨过程的调控机制。方法以HIF-1α或VHL基因条件性敲除小鼠为实验对象,分别于4、8、12周龄时,采用组织化学染色观察、显微CT扫描、骨小梁面积测量、钙元素含量检测、四环素荧光双标记观察、Real-time PCR及Western blotting等方法,观察和比较基因敲除小鼠与野生型小鼠(对照组)软骨内成骨过程的差异。结果与野生型对照小鼠比较,HIF-1α基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中血管内皮生长因子(VEGF)表达减少,新骨形成速度减慢,钙元素含量和骨小梁面积减少(P<0.05);而VHL基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中VEGF表达增加,新骨形成速度加快,钙元素含量和骨小梁面积增加(P<0.001)。结论在小鼠软骨内化骨过程中,VHL/HIF-1α信号通路对VEGF表达具有调控作用,通过调节血管形成,最终影响骨量形成。
- 邵进邓廉夫齐进周琦王君魏立王晋申钱念东
- 关键词：低氧诱导因子-1ΑHIPPEL-LINDAU软骨内成骨
- 低氧抑制关节软骨细胞凋亡机制的研究
- 2019年
- 关节软骨无直接血液供应,软骨细胞不仅处于低氧环境,也缺乏生长因子。本研究旨在探讨处于低氧环境的关节软骨细胞如何适应生长因子的缺乏。一、材料与方法1,材料:流式细胞仪、投射电镜、原位缺口末端标记法(TUNEL)检测试剂盒、膜联蛋白V(Annexin V)试剂盒、二氧化碳培养箱、低氧培养箱等。
- 任步方邓廉夫王君周琦朱亚萍魏立
- 关键词：关节软骨细胞低氧环境细胞凋亡机制原位缺口末端标记法ANNEXIN
- IGF-1信号通路相关蛋白在大鼠髁突软骨细胞增殖分化中的表达被引量：5
- 2013年
- 目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time PCR及Western印迹法检测细胞内IGF-1R、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。饥饿培养24 h后,实验组加入质量浓度为100 ng/mL的重组大鼠IGF-1细胞因子(rrIGF-1)继续培养24、48 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Real-time PCR技术检测各组髁突软骨细胞内IGF-1R、IGF-2R、Raf1、GSK-3、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、Bax、integrin、TGF-βmRNA表达情况;对照组培养液不加rrIGF-1。结果:各鼠龄组SD大鼠髁突软骨细胞内IGF-1表达均阳性,IGF-1R mRNA及蛋白表达相对平稳,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达逐渐增强,在出生14 d后表达下降(P<0.05)。加入100 ng/mL rrIGF-1后,髁突软骨细胞增殖速度显著增加,细胞凋亡减少,Real-time PCR结果显示实验组IGF-1R、GSK-3、Bax、integrin mRNA表达整体呈下降趋势;IGF-2R、Raf1、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、TGF-βmRNA表达水平总体呈上调趋势,差异有统计学意义。结论 :IGF-1介导的信号转导途径参与了髁突软骨细胞的增殖、分化以及软骨形成早期的调控,并可能与integrin、TGF-β等其他蛋白相互作用,共同参与髁突发育过程。
- 江莉婷魏立谢银银周琦朱雅萍高益鸣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1髁突软骨细胞
- 骨折愈合过程中低氧诱导因子-1α的表达及其调节作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨骨折愈合过程中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及其调节作用。方法建立小鼠胫骨骨折模型，骨折后1、3、7、14、21、28d取材，应用X线摄片、Micro-CT和四环素荧光双标记技术，观测骨痂组织的演变和新骨形成状况；采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学方法，检测骨痂组织细胞HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）和成骨性标志物（Runx2和ALP）的表达状况，分析HIF-1α与骨折愈合进程的关系。结果在早期骨痂组织中，募集于骨折处的细胞以及由此演化的成骨细胞、软骨细胞及骨细胞在低氧环境中均表达HIF-1α。骨折后第7天，HIF-1α阳性细胞百分率达到峰值，持续高表达7d后逐渐下降，骨折后第28天基本恢复至骨折前水平；细胞VEGF表达特征的变化与HIF-1α的表现相似；早期骨痂细胞的骨形成功能活跃，骨痂体积较大，至骨折后14d达到峰值后随骨改建的发生而逐步减小，骨痂矿化沉积主要发生于骨折愈合的中晚期（14—28d）。结论骨折愈合过程中，参与骨折愈合的细胞属低氧感应细胞并表达HIF-1α；HIF-1α可调节细胞自身的状态，通过调控早期骨痂细胞的功能和刺激血管新生而参与调节骨折的愈合。
- 罗涛齐进周琦王君王晋申魏立刘晓东邓廉夫
- 关键词：骨折愈合骨痂低氧诱导因子-1Α
