魏莉
- 作品数：17 被引量：65H指数：4
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金陕西省社会发展科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- KLF4 siRNA慢病毒载体构建和鉴定
- 2016年
- 目的:构建上皮锌指蛋白4(Krüppel-like factor 4,KLF4)siRNA慢病毒载体并进行初步鉴定,为研究KLF4在宫颈细胞癌中的分子机制奠定基础。方法:利用公用网站中提供的RNA干扰序列设计原则,设计4个RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的单链DNA oligo,然后退火配对产生双链,再通过其两端所含酶切位点直接连入酶切后的RNAi慢病毒载体上;将连接产物转入制备好的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子后,送测序验证,测序结果经比对确认正确的克隆,制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒,共转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。收集上清液感染宫颈癌He La细胞,通过q RT-PCR及Western Blot鉴定KLF4 siRNA慢病毒干扰效果。结果:成功构建KLF4 siRNA慢病毒载体。KLF4 siRNA慢病毒感染He La细胞后,q RT-PCR及Western Blot测定结果显示,KLF4表达明显降低。结论:KLF4 siRNA慢病毒载体构建及包装成功,可有效抑制KLF4表达,为研究KLF4生物学功能奠定基础。
- 刘海霞魏莉任晓丽宋晖陈必良
- 关键词：慢病毒载体SI宫颈癌
- 硫酸镁冷湿敷对侵蚀性葡萄胎化疗病人静脉留置针留置时间的影响及护理研究
- 侵蚀性葡萄胎是妊娠滋养细胞疾病的一种，具有恶性肿瘤行为，治疗方法以化疗为主。近年来，静脉穿刺留置针技术的临床应用日趋广泛。文章就留置针留置时间的相关影响因素及对策、临床护理研究进展、硫酸镁冷湿敷法进行了对比性研究。通过采...
- 李雪张红菊魏莉刘利
- 关键词：侵蚀性葡萄胎化学治疗
- 文献传递
- 抑制ATM表达对^(60)Co照射下宫颈癌细胞损伤修复机制的影响被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨抑制毛细血管扩张-共济失调突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)表达对人宫颈癌细胞株HeLa在60Co照射下细胞损伤修复机制的影响。方法:电穿孔法将人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒pSup-ATM转染宫颈癌HeLa细胞;G418筛选建立稳定转染株;RT-PCR、W estern-b lot、免疫荧光法检测ATM基因表达的抑制情况;W estern-b lot法检测60Co照射前后各组细胞ATM、p53Ser15磷酸化、CHK2Thr 68磷酸化、p53、CHK2蛋白的表达水平;流式细胞术检测60Co照射后各组的细胞周期变化。结果:ATM基因在HeLaATM细胞中表达明显低于在HeLa、HeLans细胞中的表达水平,成功地建立了ATM低表达的宫颈癌细胞模型。HeLaATM细胞在60Co照射后p53Ser15磷酸化、CHK2Thr68磷酸化、p53蛋白表达均显著降低,细胞周期呈现为G2期延长,G1/G2倒置。结论:抑制ATM基因表达可显著抑制宫颈癌细胞对60Co辐射损伤的修复。这一机制可能与HeLaATM细胞中ATM蛋白表达缺失,ATM依赖性的细胞损伤修复通路受阻有关。
- 魏莉辛晓燕王建薛涛曹云新雷迎锋张红菊
- 关键词：宫颈肿瘤小分子干扰ATM基因HELA细胞
- KLF4在宫颈癌中的表达与临床意义被引量：8
- 2015年
- 目的:探讨转录因子KLF4在宫颈癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测78例宫颈癌、14例宫颈原位癌、15例慢性宫颈炎及13例正常宫颈组织中KLF4蛋白的表达并分析其与临床病理指标间的关系。结果:KLF4在宫颈癌、宫颈原位癌、慢性宫颈炎及正常宫颈组织中的阳性表达率分别为26.9%,71.4%,73.3%和84.6%,在宫颈癌中的阳性表达较其它各组明显下降(P<0.05)。KLF4在宫颈癌中的表达与组织分型无关(P>0.05),在不同细胞分化等级与临床分期间KLF4表达有明显差异(P<0.05),主要表达于分化较好的组织中,随着分化程度的降低及临床分期的进展KLF4阳性表达率呈下降趋势,在伴有淋巴结转移的宫颈癌组织中KLF4的阳性表达率较不伴转移者显著下降(P<0.05)。结论:KLF4在宫颈癌中的表达与其进展呈负相关,在宫颈癌的发生发展过程中发挥抑癌基因作用,有望成为预测宫颈癌发生及判断患者预后的新的参考指标。
- 宋晖魏莉李佳陈必良辛晓燕
- 关键词：KLF4宫颈肿瘤免疫组织化学
- Clusterin蛋白在大肠杆菌中的表达及其多抗制备
- 2013年
- 目的:在大肠杆菌中表达Clusterin蛋白,并制备其兔抗Clusterin蛋白的多克隆抗体。方法:从MCF-7细胞提取mRNA,逆转录为cDNA,以此为模板PCR扩增Clusterin编码基因;将Clusterin编码区cDNA插入的pRSET-A原核表达载体,构建pRSET-A-clusterin;将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导6×His-Clusterin融合蛋白的表达,经亲和纯化柱与凝胶柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后,将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂混合制备成油包水悬液,常规免疫新西兰大白兔制备多抗,Western-blot检测该抗体识别内源性clusterin的特异性。结果:成功构建了Clusterin蛋白的原核表达载体pRSETA-clusterin;经表达并纯化的Clusterin蛋白纯度达到98%以上,免疫新西兰大白兔后制备得到了特异性的抗Clusterin的多抗。结论:成功地表达并纯化了Clusterin蛋白,并制备了特异性抗Clusterin多抗。
- 潘鹭翔魏莉杨敬吕欣董阳超徐志凯雷迎峰
- 关键词：CLUSTERIN原核表达蛋白纯化多抗
- 不同方法阴道准备效果观察被引量：2
- 2013年
- 阴道准备是保证妇科手术顺利进行、术后伤口愈合以及减少手术并发症的重要环节。常用的准备方法包括：阴道灌洗和阴道擦洗，临床实践发现，阴道灌洗上药会导致部分病人出现不适甚至过敏。本研究拟通过比较上述两种方法之间的差异，探讨不同用药方法对围术期阴道内环境的影响。
- 张红菊魏莉马真胜白雪霞
- 关键词：围术期阴道用药阴道内环境手术感染
- ATM基因siRNA真核表达载体的构建及其对转染宫颈癌细胞株ATM表达的抑制作用被引量：2
- 2005年
- 目的:研究特异性siRNA对宫颈癌ATM基因的阻 抑效果以及用RNAi效应对宫颈癌做基因治疗的可行性. 方法:构建可表达人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒 pSuppressorNeo ATM,电穿孔法转染Siha宫颈癌细胞株.应用 RT PCR,Westernblot,流式细胞术、免疫荧光法等方法检测转 染的宫颈癌细胞中ATM基因的表达水平.结果:RT PCR, Western blot均表明瞬时转染pSuppressorNeo ATM的宫颈癌 细胞中ATM基因的表达受到明显抑制,流式细胞术、免疫荧 光法检测表明ATM蛋白含量明显下降.结论:pSuppressor Neo ATM质粒构建成功,瞬时转染宫颈癌细胞后可以明显抑 制ATM基因的表达.
- 魏莉辛晓燕王健雷迎锋薛小平
- 关键词：ATM基因RNA干扰宫颈癌转染
- 趋化因子受体CXCR4及CCR5真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建人CXCR4及CCR5真核表达重组质粒,转染人卵巢癌细胞SKOV3,建立稳定转染细胞系并观察其表达效果。方法:从人外周血单个核细胞中提取RNA,采用反转录PCR技术扩增CXCR4及CCR5的基因编码序列,将序列克隆至真核表达载体pEGFP,经酶切和测序鉴定后,应用脂质体转染技术将质粒cancer.pEGFP-CXCR4和pEGFP-CCR5分别导入不表达CXCR4及CCR5蛋白的SKOV3细胞,经G418抗性筛选得到阳性细胞克隆并扩大培养成系。分别采用免疫荧光染色和流式细胞术方法(FCM)检测稳定转染细胞株CXCR4和CCR5的表达。结果:构建了真核表达载体pEG-FP-CXCR4和pEGFP-CCR5;得到了抗G418阳性细胞克隆;免疫荧光染色和FCM检测结果显示,转染质粒的SKOV3细胞表达CXCR4和CCR5。结论:成功建立稳定表达趋化因子受体CXCR4和CCR5的卵巢癌细胞株,为CXCR4和CCR5在卵巢癌中的研究工作提供依据及平台。
- 谢婷婷魏莉宋辉于月成
- 关键词：CXCR4CCR5SKOV3细胞
- 局部晚期宫颈癌术前新辅助同步放化疗与术后辅助同步放化疗临床疗效研究被引量：33
- 2018年
- 目的:探讨局部晚期宫颈癌术前新辅助同步放化疗(CCRT)与术后辅助CCRT的临床疗效。方法:回顾性分析2013年1月至2016年12月西京医院妇产科行机器人宫颈癌根治性手术(RS)ⅠB2~ⅡB期宫颈癌患者444例临床资料,根据术前是否接受CCRT分为两组:术前CCRT+RS组(264例)和RS+术后CCRT组(180例)。比较两组患者术中、术后情况及放化疗毒副反应和复发、生存等情况。结果:①术前CCRT+RS组行CCRT后的总有效率(CR+PR)为92.6%,其中CR率9.1%,PR率87.1%。②两组的手术时间、术中出血量、术后住院时间、术后肛门排气时间和术后尿管留置时间差异无统计学意义(P>0.05)。③因两组患者的FIGO分期的构成比比较差异有统计学意义(P<0.05),两组随访的疗效进一步分层(ⅠB2、ⅡA、ⅡB期)比较,ⅡA期患者,其术前CCRT+RS组3年远处转移率、死亡率低于RS+术后CCRT组(P<0.05);3年无瘤生存率、3年总生存率高于RS+术后CCRT组(P<0.05)。而ⅠB2期和ⅡB期患者两组比较,其3年内的随访疗效差异均无统计学意义(P>0.05)。④RS+术后CCRT组患者1~2级急性膀胱毒性及下肢水肿的发生率高于术前CCRT+RS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:局部晚期宫颈癌采用术前新辅助CCRT联合RS的综合治疗方法可提高近期ⅡA期无瘤生存率和总生存率,不增加手术风险,可减少下肢水肿和1~2级急性膀胱反应的发生率。该结论仍需大样本的临床来验证。
- 葛俊丽孙季冬李佳吕小慧荆茹魏莉陈必良
- 关键词：局部晚期宫颈癌根治性手术术后辅助治疗
- siRNA沉默KLF4表达促进HeLa细胞上皮间质化被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨Klf4表达水平对Hela细胞上皮间质转化的影响。方法:设计合成针对Klf4的siRNA和阴性对照siRNA,并转染至Hela细胞。用含10ng/ml TGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导Hela细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。倒置显微镜下观察记录细胞的形态学改变。Western blot法和细胞免疫荧光法检测Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1及间质标志分子N-cadherin的表达变化。结果:在TGFβ1的诱导作用下,Hela细胞呈现出梭形、类成纤维细胞的形态,发生了上皮间质转化。Western blot和细胞免疫荧光检测结果显示,Hela细胞在TGFβ1诱导作用下,Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达减少,间质标志分子N-cadherin表达增多。转染了si Klf4的Hela细胞经TGFβ1诱导后,与转染了阴性对照siRNA的细胞相比,上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达略有减少,而间质标志分子N-cadherin的表达则明显增多。结论:抑制Klf4表达可以促进Hela细胞的上皮间质转化。
- 任晓丽宋晖刘海霞魏莉陈必良
- 关键词：上皮间质转化HELA细胞转化生长因子Β1
