黄冠
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- 小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向平滑肌样细胞分化过程中myocardin的表达被引量：2
- 2008年
- 目地探讨血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化为平滑肌细胞的可行性及myocardin在此过程中的表达变化。方法采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞,血小板源性生长因子BB(50μg/L)联合高浓度胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞,分别于诱导前,及诱导4d和8d后用免疫细胞化学法检测细胞平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin的表达。结果免疫组织化学显示,诱导前及诱导4d和8d时,平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin三种蛋白的表达逐渐增强,平均灰度值逐渐降低,不同时间点之间比较差异有显著性(P<0.05)。结论血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清可有效诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化。Myocardin在此分化过程中可能起了重要作用。
- 孟寒阮秋蓉瞿智玲黄冠余俊
- 关键词：平滑肌样细胞血小板源性生长因子BB胎牛血清MYOCARDIN
- 低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用
- 2009年
- 目的探讨低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化及myocardin在其分化过程中的作用。方法不同浓度血清培养骨髓间充质干细胞条件下加以低密度脂蛋白刺激。细胞分为常规培养组,常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组。免疫细胞化学检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达、RT-PCR法检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA的表达。结果免疫细胞化学结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达增强(P<0.05);20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组与20%胎牛血清组比较上述三种蛋白表达增强(P<0.05);平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链蛋白的表达与myocardin表达呈正相关(r=0.9018,P<0.05;r=0.7969,P<0.05)。RT-PCR结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达明显增强(P<0.05);20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组比较上述三个指标的表达也增强(P<0.05)。平滑肌肌动蛋白、平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达与myocardin正相关(r=0.9295,P<0.05;r=0.8940,P<0.05)。结论高浓度血清,低密度脂蛋白均可诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化,低密度脂蛋白联合20%胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用最强。myocardin可能在此过程中起重要作用。
- 陈雪孟寒许梅王珊珊黄冠阮秋蓉
- 关键词：骨髓间充质干细胞低密度脂蛋白MYOCARDIN细胞分化平滑肌样细胞
- MYOCARDIN的表达和在平滑肌细胞分化中的作用被引量：1
- 2008年
- 目的在用血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)联合20%胎牛血清(FBS)诱导骨髓间充质干细胞(BM-SC)向平滑肌细胞(SMC)分化过程中,通过对促血管SMC分化因子myocardin和平滑肌分化标志物基因α-actin,SM-22等表达的研究,探讨myocardin在促血管SMC分化中的重要作用。方法采用骨髓干细胞培养基和贴壁法从小鼠骨髓中分离BMSC,然后细胞分为两组,诱导其向SMC分化:(1)20%FBS单独诱导;(2)PDGF-BB(50ng/ml)联合20%FBS诱导BMSC。分别于诱导0d,4d,8d,12d后用逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法检测细胞myocardin,α-actin,SM-22的mRNA表达和蛋白表达情况.结果RT-PCR和免疫组化结果显示在对小鼠BMSC的诱导过程中,检测出了myocardin,同时还有平滑肌分化标志物基因α-actin,SM-22等的表达。0d,4d,8d两诱导组细胞的myocardin,α-actin,SM-22的mRNA和蛋白表达水平随着诱导时间延长而增强(P<0.05),而诱导8d及12d时表达基本趋于稳定,与SMC相比无明显统计学差异(P>0.05);并且各项指标的表达水平在PDGF-BB与20%FBS联合诱导时比20%FBS单独诱导表达增强。不同诱导组之间统计学比较有差异(P<0.05)。结论PDGF-BB联合20%FBS可有效诱导BMSC向SMC分化,myocardin在此过程中起着关键性作用,且PDGF-BB,20%FBS两者联合诱导比20%FBS单独诱导作用要强。
- 王珊珊阮秋蓉孟寒余俊许梅黄冠陈雪
- 关键词：骨髓间充质干细胞平滑肌样细胞分化
- myocardin在骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化过程中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的探讨通过条件培养液（CM）和高浓度血清即20％的胎牛血清（FBS）联合作用下，myocardin在骨髓来源的间充质干细胞向平滑肌细胞（SMC）定向分化过程中的表达特点。方法采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞，CM联合20％FBS诱导骨髓间充质干细胞，同时设立持续10％FBS、单20％FBS及单CM诱导下的骨髓间充质干细胞对照组和SMC阳性对照组，分别于诱导前及诱导3、7、10和14d时观察细胞形态的变化，并在相应的时间点用免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应法、Western blot半定量分析法检测myocardin以及SMC表面各种标志基因的表达变化，用透射电镜检测诱导后细胞内肌丝存在以此来证实诱导分化成功。结果光镜观察显示诱导前至诱导3、7、10和14d时，骨髓间充质干细胞由纺锤形、多角形、扁平形和小圆形等多种形态逐渐转变为单一的长梭形，在诱导21d后显示出明显的峰-谷特征。免疫荧光结果显示表达myocardin的阳性细胞数量逐渐增多，表达部位由胞质逐渐移向胞核，而表达平滑肌标志基因α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、平滑肌肌动蛋白重链（SM-MHC）的细胞也随之增加，同时联合诱导后3、7、10和14d表达myocardin和平滑肌标志基因（α-SMA或SM—MHC）的双阳性细胞数量逐渐增加。RT-PCR结果显示myocardin的mRNA表达逐渐上调，在诱导7d达到高峰后表达基本稳定（P〈0．05）；平滑肌标志基因α-SMA及SM22α的表达随着myocardin表达上调而增加（r=0．81，P〈0．05），诱导10d后表达基本稳定。Western blot结果显示myocardin蛋白和平滑肌标志基因α—SMA蛋白表达量在诱导后明显增加（r=0．84，P〈0．05）。透射电镜结果显示诱导21d后的分化细胞中有肌丝的存在。在不同时间点各组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CM联合高浓度的血清可有效诱导骨髓间充质干细胞向SMC分�
- 李燕瞿智玲黄冠孟寒余俊阮秋蓉
- 关键词：间质干细胞
- myocardin基因沉默在PDGF—BB诱导小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化中的作用被引量：2
- 2009年
- 目的构建myocardin特异性siRNA真核表达载体，体外观察其对myocardin基因的沉默效应及对小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）向平滑肌样细胞分化过程中的影响。方法培养小鼠骨髓间充质干细胞并利用血小板源生长因子（PDGF—BB，50mg／L）联合高浓度胎牛血清（20％FBS）诱导其向平滑肌样细胞分化；构建含u6启动子和myocardin特异短发卡RNA（shRNA）编码序列的质粒载体pGen—myo-shRNA，以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil—Con（pCon）为阴性对照，分别转染诱导培养后第6天的小鼠MSC，48h后用RT．PCR技术检测细胞内myocardin在mRNA水平的表达；同时用免疫组织化学方法检测平滑肌肌球蛋白重链（SMmyosinheavychain，SM-MHC）的表达来鉴定平滑肌样细胞的分化。结果成功构建myocardin特异性siRNA真核表达载体，利用其沉默myocardin基因后，干扰组相比空白对照组myocardinmRNA表达下调42．86％，差异有统计学意义（P〈0．01）；且免疫组织化学结果表明：干扰组SM—MHC阳性表达低于空白对照组（P〈0．01）。结论小鼠骨髓间充质干细胞中存在少数细胞具有分化成为平滑肌样细胞的潜能；构建的pGen-myo—shRNA重组质粒能有效抑制myocardin基因的表达，且对小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化有抑制作用。
- 黄冠许梅余俊孟寒陈雪李燕阮秋蓉
- 关键词：小分子干扰平滑肌
