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乔梁: 作品数：23 被引量：46H指数：3; 供职机构：重庆师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家科技基础性工作专项更多>>; 相关领域：生物学医药卫生文化科学农业科学更多>>

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中华按蚊几丁质酶基因家族的全基因组鉴定与分析被引量：1: 2022年; 本研究基于生物信息方法对中华按蚊的几丁质酶基因家族进行全基因组鉴定与分析。利用BLAST、HMM及Softberry网站中的基因预测程序进行序列鉴定、检验及补充,筛选出23个中华按蚊几丁质酶基因及类似基因,并进行系统发生分析,将中华按蚊几丁质酶基因分为八大家族,其外显子数为2~13个,跨度较大;基因分布分析结果表明AsCht5-1、AsCht5-2、AsCht5-3、AsCht5-4和AsCht5-5位于Scaffold14,在染色体上成簇分布。以上鉴定与分析结果为后续对中华按蚊几丁质酶基因功能的研究奠定了一定基础。; 刘燕邱品品刘蒨莹向凯杨小林乔梁; 关键词：中华按蚊几丁质酶基因

中华按蚊中基于卵巢导向肽和Gal4-UAS结合特性的外源DNA投递系统构建: 2023年; 【目的】利用P2C可以定向进入卵巢以及Gal4蛋白可与UAS序列稳定结合的特点,在中华按蚊Anopheles sinensis中建立高效的非胚胎期外源DNA投递技术系统。【方法】注射P2C-Gal4-DsRed重组蛋白至吸血后20 h时的中华按蚊雌成蚊腹部,通过冰冻切片荧光观察和Western blot检测分析重组蛋白P2C-Gal4-DsRed在卵巢中的投递效率;制备P2C-Gal4 DNA BINDING重组蛋白,构建包含12×UAS重复基序的转基因质粒和辅助质粒,通过电泳迁移实验分析重组蛋白P2C-Gal4 DNA BINDING和12×UAS重复基序间的体外结合;分别将体外孵育的P2C-Gal4 DNA BINDING+辅助质粒ITF36-12×UAS和P2C-Gal4 DNA BINDING+转基因质粒ITF2-12×UAS afm复合物注射入吸血后20 h时的中华按蚊雌成蚊腹部,于血餐后40 h时提取其卵巢组织DNA,并通过特异性引物PCR扩增和测序分析外源DNA在活体中的投递情况。【结果】100%注射P2C-Gal4-DsRed的中华按蚊雌成蚊卵巢在绿色滤光片下呈现明显的红色荧光,表明P2C-Gal4-DsRed重组蛋白能够被高效地导入雌成蚊卵巢中;P2C-Gal4 DNA BINDING重组蛋白能够与12×UAS重复基序以及含有该重复基序片段的质粒稳定结合;分别有91%和93%的注射了P2C-Gal4 DNA BINDING+ITF36-12×UAS和P2C-Gal4 DNA BINDING+ITF2-12×UAS afm的雌成蚊卵巢组织中能够检测到外源DNA片段。【结论】在中华按蚊中成功建立了基于P2C卵巢导向肽和Gal4-12×UAS重复基序结合特性的外源DNA投递技术体系;通过此技术平台能够便捷、快速和高效地实现质粒等DNA分子在中华按蚊卵巢中的投递,这为进一步简化转基因、过表达及基因敲入等遗传操作奠定了基础。; 杨小林凌瑕孙全陈洁向凯邱品品洪俊峰闫振天王蓉陈斌乔梁; 关键词：中华按蚊

CRISPR/Cas9介导的HDR型基因驱动技术在蚊虫遗传防控中的研究进展被引量：1: 2022年; 基因驱动(gene drive)是指特定基因或遗传元件以超孟德尔遗传(super-Mendelian inheritance)的形式由亲代传递给子代的现象.近年来,基于基因驱动的遗传特点及其分子机制方面的理论基础,在CRISPR/Cas9基因编辑系统的支持下,基因驱动型遗传控制技术成为了蚊虫基础生物学与防治领域的前沿研究热点,并涌现出一些切实有效,且兼顾生态稳定的重要成果.本文就基因驱动的基本原理、CRISPR/Cas9介导的HDR型基因驱动技术策略、减少驱动抵抗和潜在风险的改进策略以及基因驱动的模拟分析等几方面的研究进行了综述,以期为高效与安全的驱动型蚊虫遗传防控技术体系的开发提供参考.; 洪俊峰杨小林向凯邱品品刘燕刘燕闫振天何正波乔梁; 关键词：蚊虫

通过合作学习进行生物教学课程设计: 2018年; 合作学习是一种新型的教育方法,也是一种富有创意和实效的教学理论与策略。其符合高中生物课程标准理念的要求。在高中生物教学中,合作学习有利于学生对知识点的理解和掌握,提高课堂教学的质量,并且能够逐渐培养学生的获取和收集信息、分析和解决问题、交流表达的能力。学生在合作学习中能相互交流、共同认知生物与自然。同时通过合作学习的方法来设计教学方案,能够有效地提高课堂质量。因此,在生物教学领域中,有效结合使用合作学习的方法是十分有必要的。本文将合作学习理论引入《现代生物进化理论的主要内容》这一部分的教学实践中,设计了通过学习小组讨论的方式进行合作学习的教学方案。在经过教学实践后,学生在课堂上的积极性、课堂参与率和学习兴趣都有很大的提升和增强,并且加强了学生对知识的掌握程度,提高了课堂教学的质量。; 乔梁刘丹娜; 关键词：高中生物教学教学方案生物进化

中华按蚊RNAi技术平台的建立及应用被引量：1: 2017年; 【目的】建立一套经济、便捷及高效的RNAi技术平台。【方法】以中华按蚊(Anopheles sinensis)为模式物种,从材料固定、注射部位、注射剂量等方面进行改进,并利用该平台沉默中华按蚊黑色素代谢途径中在蛹期表达的一个关键基因,以验证该技术平台的操作性。【结果】建立了中华按蚊显微注射平台,通过摸索和改进注射操作技术,利用该平台成功地实现了幼虫、蛹和成蚊的显微注射;同时,有效地沉默了该关键基因的表达,获得了黑化缺陷的蛹表型。【结论】该平台体系的建立,不仅为中华按蚊功能基因的研究提供了分析手段,同时也为其他涉及显微注射的技术体系提供了参考。; 杜明辉陈斌乔梁; 关键词：中华按蚊基因功能 RNAI 显微注射

中华按蚊AsCYP9 J5参与对溴氰菊酯的抗性: 2023年; 【目的】研究中华按蚊Anopheles sinensis细胞色素P450基因AsCYP9J 5是否与溴氰菊酯抗性有关。【方法】PCR克隆中华按蚊AsCYP9J 5的开放阅读框并进行生物信息学分析。采用RT-qPCR检测AsCYP9J 5在中华按蚊溴氰菊酯敏感品系(WX-LS)和抗性品系(YN-LR和CQ-LR)雌蛹和雌成蚊以及WX-LS雌蛹头、胸、腹部前3节(腹部前端)、腹部剩余部分(腹部后端)和25 mg/mL溴氰菊酯诱导体外培养的雌蛹头中的表达量。基于上述AsCYP9J 5表达量,于YN-LR和CQ-LR化蛹后20 h时雌蛹头部注射ds AsCYP9J 5和ds EGFP进行RNAi,采用RT-qPCR检测成蚊中AsCYP9J 5的表达量,统计溴氰菊酯处理后成蚊半数击倒时间(half knockdown time,KT 50)、击倒率和死亡率。通过分子对接模拟预测AsCYP9J5与溴氰菊酯相互作用的氨基酸残基。【结果】克隆获得AsCYP9J 5开放阅读框,全长1626 bp,编码541个氨基酸,无信号肽和跨膜结构域。AsCYP9J 5在YN-LR和CQ-LR不同发育阶段表达量不同,化蛹末期至羽化后9 h在YN-LR中的表达量显著高于在WX-LS中的,在化蛹后30 h至羽化后72 h期间CQ-LR中高表达,各发育阶段(化蛹后20 h除外)CQ-LR中的表达量均显著高于在WX-LS中的;AsCYP9J 5在WX-LS雌蛹头部的表达量最高,其次是在胸部,而在腹部前端和腹部后端的表达量接近并最低。溴氰菊酯诱导12 h时WX-LS雌蛹头部AsCYP9J 5的表达量比对照组上调了11倍,诱导24 h时AsCYP9J 5的表达量略低于对照组。与注射ds EGFP的对照组相比,注射ds AsCYP9J 5的YN-LR和CQ-LR处理组成蚊AsCYP9J 5的表达量分别下调了约68%和38%,分别约提前10和20 min出现明显的击倒现象,击倒率明显升高,死亡率分别增加了28.6%和24.0%,表明沉默AsCYP9J 5导致中华按蚊对溴氰菊酯的敏感度显著增加。分子对接模拟结果显示,溴氰菊酯可以进入AsCYP9J5的结合口袋,并且与Arg-488形成二元的Pi-阳离子相互作用,与AsCYP9J5的Phe-109发生稳定的T型Pi-Pi叠合,与Cys-348和Th; 郭迎澳韩宝珠乔梁陈斌; 关键词：中华按蚊溴氰菊酯抗性细胞色素P450 RNAI 分子对接

中华按蚊气味结合蛋白AsinOBP62基因的克隆、表达及与人体挥发物的结合特性: 2021年; 嗅觉系统在蚊虫追寻宿主、寻找配偶、选择产卵场所等行为中起着重要的作用,气味结合蛋白与气味分子结合是昆虫嗅觉识别的第一步生化反应.为研究中华按蚊气味结合蛋白在追寻宿主中的作用,通过反转录PCR(RT-PCR)克隆气味结合蛋白62(odorant binding protein 62,AsinOBP62)基因,利用定量PCR分析AsinOBP62在不同组织(触角、喙、下颚须及头胸腹部)、不同发育时期(蛹期、羽化1 d、3 d)和吸血前后的表达水平,通过荧光竞争结合实验测定AsinOBP62蛋白与16种人体气味物质和2种趋避剂的结合能力.结果显示,AsinOBP62基因开放阅读框长507 bp,编码168个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸残基,属于Classic亚家族成员.定量PCR结果显示,AsinOBP62主要在成蚊触角中表达,羽化后AsinOBP62的表达水平逐渐增强.吸食血液后,AsinOBP62的表达水平显著下降.荧光竞争结合实验显示,在测定的18种气味物质中,AsinOBP62与12种化合物具有结合活性,表明AsinOBP62对人体挥发物具有明显的选择性.其中,与2-甲基吡啶结合能力最强,解离常数K_(i)=34.34μmol/L.根据AsinOBP62基因的表达特点和重组蛋白的结合特性,推断AsinOBP62基因可能在雌蚊追寻宿主的过程中起着重要的作用.; 何兴菲张嘉俊乔梁陈斌何正波; 关键词：中华按蚊基因克隆原核表达

蚊虫抗拟除虫菊酯数量性状位点的研究进展被引量：2: 2016年; 蚊虫是重要的医学昆虫,对人类危害极大。近些年来,由于拟除虫菊酯杀虫剂的广泛使用,导致蚊虫体内产生了抗药性。为了解析抗药性的分子基础和遗传特性,当前采用了一种新的方法即数量性状位点(Quantitative trait loci,QTL)定位。综述了近些年来蚊虫抗拟除虫菊酯QTL的研究的最新进展,包括蚊虫QTL定位研究的理论基础、QTL定位鉴定抗性位点、抗性基因差异表达分析及功能调控。蚊虫抗拟除虫菊酯QTL的研究发展迅速,相关研究成果对蚊虫的防治和病媒疾病的控制具有重要意义;在现有方法的基础上,可以利用高通量测序和关联分析来深入解析蚊虫QTL,为进一步探究蚊虫抗药性提供新的契机。; 刘柏琦陈斌乔梁; 关键词：蚊虫数量性状位点抗性基因

利用RNAi研究中华按蚊黑色素代谢基因及表皮蛋白基因AsCP1的功能: 在蚊虫中，利用RNAi 手段是研究基因功能的一种高效和便捷的方法。在这里，我们以中华按蚊为模式，利用本实验室已发展成熟的RNAi 技术体系去探索儿茶酚胺代谢路径中关键基因和表皮蛋白在蚊虫发育中所扮演的角色。; 杜明辉梁欣闫振天付文博许柏英陈斌乔梁; 关键词：中华按蚊 RNAI

中华按蚊AsBe3基因的克隆、生物信息学分析与分子对接: 2020年; 【目的】克隆中华按蚊(Anopheles sinensis)羧酸酯酶基因AsBe3,并对该基因进行生物信息学和分子对接分析。【方法】克隆AsBe3基因编码序列,并在AsBe3蛋白的理化性质、系统发生关系、二级结构、多重序列比对、系统发育关系等方面对进行了预测和分析;通过同源建模和分子对接,分析AsBe3蛋白与氟氯氰菊酯形成稳定复合物的关键氨基酸残基。【结果】通过克隆得到了编码AsBe3基因的序列,大小为1302bp。在系统发育关系方面,AsBe3蛋白在8种不同物种中具有很高的保守性。AsBe3蛋白是疏水性蛋白,相对分子质量为48.45kDa,无信号肽和跨膜区。氟氯氰菊酯与AsBe3蛋白的结合自由能约为-42.3kJ·mol^-1,理论上AsBe3蛋白能够代谢氟氯氰菊酯。【结论】研究结果为后续对AsBe3基因进行生物学功能研究奠定了基础,为下一步开展AsBe3蛋白代谢研究提供了基础数据,也为阐释羧酸酯酶代谢抗性的分子机制提供了理论依据。; 陈晓洁韩宝珠乔梁陈斌; 关键词：中华按蚊生物信息学分子对接

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