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付晓: 作品数：10 被引量：1H指数：1; 供职机构：天津医科大学更多>>; 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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Tudor-SN蛋白参与调控DNA损伤应答分子机制的研究: 细胞DNA是内外环境中众多不利因素攻击的靶标,受损的DNA会诱发一系列疾病并威胁到基因组的稳定性。为了对抗不利因素造成的DNA损伤,细胞在长期进化过程中,形成了包括损伤监视、染色质重塑、周期调控、损伤修复、凋亡诱导等在内...; 付晓张春燕张锴苏超孟浩辛灵彪任媛媛张玮孙晓明Olli Silvennoinen姚智杨熙杨洁; 关键词：组蛋白修饰; 文献传递

重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达: 2011年; 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。; 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁; 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类 HELA细胞

Tudor-SN蛋白参与调控DNA损伤应答分子机制的研究: 细胞DNA是内外环境中众多不利因素攻击的靶标，受损的DNA会诱发一系列疾病并威胁到基因组的稳定性.为了对抗不利因素造成的DNA损伤，细胞在长期进化过程中，形成了包括损伤监视、染色质重塑、周期调控、损伤修复、凋亡诱导等在内...; 付晓张春燕张锴苏超孟浩辛灵彪任媛媛张玮孙晓明Olli Silvennoinen姚智杨熙杨洁; 关键词：组蛋白修饰

PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布: 2010年; 目的将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP—C2质粒，使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达，观察其在HeLa细胞中的表达及定位。方法以重组质粒pEGFP—C2-PSF为模板，PCR法扩增出目的基因，将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP—C2上，构建重组质粒pEGFP—C2-PSF（I—V）。将构建成功的pEGFP—C2-PSF（I—V）质粒脂质体法转染HeLa细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布。结果成功构建质粒pEGFP—C2-PSF（I～V），并在HeLa细胞中实现表达；Western印迹检测到融合蛋白GFP—PSF（I～V）；在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位。结论人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEG—FP—C2-PSF（I～V）构建成功，可用于标记PSF蛋白的不同功能片段，为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础。; 张馨予东莉洁付晓杨振霞杨洁; 关键词：重组质粒融合蛋白

重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达: 2010年; 目的将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.; 苏超朱梦瑜高星杰王鑫廷张桂敏付晓葛林杨洁; 关键词：PGEX-4T-1 重组质粒融合蛋白

Tudor-SN蛋白与乳腺癌细胞生物学行为的关系研究: 目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其复发和转移严重威胁患者的生命.在恶性肿瘤发生转移的过程中,肿瘤的高侵袭性和迁移能力的提高是重要的前提条件.Tudor-SN蛋白(又称p100,SND1蛋白)是一种高度同源性的,且...; 刘欣王保亚苏超高星杰朱梦瑜段中潮钱宝鑫付晓杨洁; 关键词：TGF-Β信号通路 SMAD蛋白乳腺癌

Tudor-SN蛋白参与DNA损伤应答的机制探讨: 目的:各种来自机体内外环境中的损伤因素,如机体代谢产生的活性氧、紫外线、电离辐射、基因毒性药物等均能引发基因组DNA的结构性损伤、拷贝数变化、表达调控紊乱等。为了对抗这些不利因素的影响,细胞在长期进化过程中,形成了一整套...; 付晓; 关键词：细胞凋亡组蛋白修饰 ATM; 文献传递

活细胞内人AGTR1-3′UTR的荧光标记及应激定位分析: 2014年; 利用噬菌体衣壳蛋白MS2和带有序列特异性茎环结构(含有MS2蛋白结合位点)的RNA之间的高度亲和力,对外源性人血管紧张素1型受体(angiotensin II receptor type 1,AGTR1)mRNA 3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)片段进行红色荧光标记,进而在活细胞(HeLa)内研究该mRNA片段的应激生物学行为。通过在pSG5空载体质粒上先后插入两个双链DNA目的片段AGTR1-3′UTR和24×MS2,构建重组质粒pSG5/AGTR1-3′UTR/24×MS2,并将该质粒与重组质粒pERFP/MS2和pEGFP/C1-G3BP共转染入Hela细胞。荧光显微成像结果显示,AGTR1-3′UTR-24×MS2 mRNA片段能够携带具有入核信号的MS2-RFP融合蛋白离开胞核进入胞浆,而且在亚砷酸盐刺激下,红色荧光标记的AGTR1-3′UTR-24×MS2 mRNA片段可在胞浆中形成与应激蛋白G3BP-GFP共定位的颗粒。该结果表明,针对AGTR1-3′UTR片段的MS2-RFP荧光标记系统构建成功,该荧光标记系统能有效避免假阳性的荧光信号。在细胞受到氧化应激时,AGTR1-3′UTR会被招募至胞浆中的应激颗粒结构中,启示了AGTR1-3′UTR区域对于调控AGTR1 mRNA在细胞内的应激定位具有重要作用。; 张毅高星杰付雪苏超史雪彬段中潮付晓何津岩杨洁; 关键词：重组质粒荧光标记

SND1低表达宫颈癌CasKi细胞稳定株的构建及其生物学功能变化被引量：1: 2017年; 目的构建SND1低表达的人宫颈癌CasKi细胞稳定株,探讨SND1低表达对CasKi细胞生物学功能的影响。方法 CasKi细胞随机分为六组,空白对照组不做处理,阴性对照组、干扰1~4组分别转染TRC2-p LKO-puro Vector的空载慢病毒液及SND1 shRNA(1~4)慢病毒液,用嘌呤霉素筛选CasKi细胞稳定株。分别用Western blotting技术、RT-PCR技术检测CasKi细胞内SND1蛋白、mRNA表达,确认转染效率。用CCK-8法检测CasKi细胞增殖活力(OD_(450)值),用细胞划痕实验检测CasKi细胞相对迁移距离。结果空白对照组细胞全部死亡,阴性对照组及干扰1~4组细胞部分存活,证明细胞稳定株转染构建成功。干扰1~4组SND1蛋白、mRNA相对表达量与空白对照组、阴性对照组比较,P均<0.05;干扰3、4组与其他组比较,P均<0.05。干扰3、4组OD_(450)值、相对迁移距离与空白对照组、阴性对照组比较,P均<0.05。结论成功构建了SND1低表达的CasKi细胞稳定株;SND1低表达的CasKi细胞增殖和迁移能力降低。; 孟浩付晓张春燕辛灵彪任媛媛杨洁何津岩; 关键词：子宫颈肿瘤 CASKI细胞细胞迁移

Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建: 2011年; 目的实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段（SN5α、SN5β）的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.; 钱宝鑫朱梦瑜高星杰刘欣苏超付晓王保亚王鑫廷杨洁; 关键词：PEGFP-C2 重组质粒

付晓

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