冯若飞 作品数:187 被引量:348 H指数:9 供职机构: 西北民族大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中央高校基本科研业务费专项资金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 化学工程 更多>>
一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法 本发明提供一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法,包括以下步骤:获取绵羊FSH‑αβ氨基酸序列,对其进行密码子优化,在上游依次添加了BamH I酶切位点、kozak序列和TG,下游添加了CTP序列和EcoRI酶切位点,得... 冯若飞 王兴陇 李向茸 张海霞 李琼毅 李倩TMEM43基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 2018年 根据Genbank中登录的TMEM43基因序列设计并合成引物,建立了TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.利用该方法构建标准曲线,并对灵敏性及重复性进行验证.最后对随机选取的几种人源细胞及不同物种细胞进行检测.结果显示,建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法线性关系好,以标准品构建的标准曲线相关系数R2=1;灵敏性比普通PCR高10倍,能成功检出不同细胞中TMEM43表达量.表明建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法可用于TMEM43基因表达的检测及定量分析,可为临床TMEM43相关疾病的检测及分析提供实验依据. 张海霞 赵克学 邓盈盈 梁浩勤 李倩 韩玉梅 马忠仁 冯若飞关键词:SYBR 脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用 被引量:9 2013年 目的建立脑心肌炎病毒( EMCV) TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针,建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法,且对体系进行优化;对该法进行灵敏性、特异性验证;采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测,并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0.995;灵敏性比普通PCR高100倍,且仅能特异性检出 EMCV;对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98.0%。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法,该法灵敏性高、特异性好,可用于EMCV的检测及定量分析。 张海霞 冯若飞 王丹 凡静静 谢晶莹 马忠仁 冯玉萍关键词:脑心肌炎病毒 实时荧光定量PCR RIG-I样受体信号通路介导的小RNA病毒免疫逃逸研究进展 被引量:2 2021年 病毒与宿主在长期的斗争中共同进化,病毒形成各种逃逸机制来躲避宿主的免疫应答。本文针对小RNA病毒科成员如何通过逃逸RIG-I样模式识别受体介导的先天免疫反应进行介绍,为深入了解RNA病毒的逃逸机制奠定基础,同时也为相关疫苗及药物的研制提供思路。 毕英杰 谢晶莹 李倬 冯若飞关键词:小RNA病毒 免疫逃逸 猪瘟弱毒株与猪口蹄疫(o型)灭活抗原二联苗 本发明公开了猪瘟弱毒株与猪口蹄疫(o型)灭活抗原二联苗,其特征在于:按每瓶20‑50头份计算:猪瘟抗原毒液0.25‑0.625份、口蹄疫抗原0.8‑2份、耐热保护剂1.575‑3.9375份。对O型口蹄疫灭活抗原进行高倍... 令世鑫 令瑛 柏家林 马忠仁 乔自林 冯若飞 李明生文献传递 新生牛跟腱胶原蛋白海绵与细胞的生物相容性 被引量:10 2007年 目的:采用新生牛跟腱制备生物医用胶原蛋白海绵,通过分别接种Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤原代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸原代细胞至胶原蛋白海绵组织支架上,观察新生牛跟腱胶原蛋白海绵与3种细胞的生物相容性。方法:实验于2006-02/05在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。①用新生牛跟腱经冰醋酸、胃蛋白酶等消化,经盐析、透析及冻干等处理后,制备成胶原蛋白海绵。②在六孔板中,将Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤原代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸原代细胞分别接种于经紫外线、臭氧灭菌后的胶原蛋白海绵上,经37℃体积分数为0.05的CO2恒温培养;并用另一组细胞在凯氏瓶中培养作对照实验。用奥林帕斯倒置相差显微镜及JVC摄像系统观察、拍摄与记录细胞生长情况,并于培养11d,用考马斯亮蓝和苏木精-伊红染色,证实相差显微镜观察的结果。结果:①胶原蛋白海绵制备结果:用新生牛跟腱制备得到具有一定孔隙度的胶原蛋白海绵,经紫外线、臭氧灭菌后可进行细胞培养。②3种细胞在胶原蛋白海绵上和六孔板底的生长情况:3种细胞接种后5h,在胶原蛋白海绵周围的六孔板孔底可看到Vero细胞已贴壁、伸展,个别细胞有分裂现象,在胶原蛋白海绵表面,隐约可见圆形细胞排列。Vero细胞和天祝白牦牛胚胎皮肤原代f2细胞接种72h、岷县黑裘皮羔羊睾丸原代f2细胞接种48h时,孔底细胞已经铺满单层,但与对照孔比较,生长速度较慢。②3种细胞用考马斯亮蓝细胞骨架染色和苏木精-伊红染色的结果:培养到第11天,3种来自不同动物、不同组织的细胞接种的胶原蛋白海绵支架孔中均有大量细胞良好生长,胶原海绵外观变得挺拔、透明、有韧性。结论:新生牛跟腱胶原蛋白海绵,对Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤原代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸� 冯玉萍 马忠仁 乔自林 李明生 冯若飞 周雪雁 侯兰新 李倬关键词:跟腱 胶原 细胞培养 生物相容性材料 西安市宝鸡市新生荷斯坦小牛BVDMD血清学调查 被引量:5 2006年 冯若飞 马忠仁 乔自林 李明生 冯玉萍 李倬 侯兰新关键词:血清学调查 小牛 牛病毒性腹泻病毒 感染动物 继发性感染 血小板减少 人源细胞间黏附分子-1基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用 被引量:1 2019年 目的建立并验证细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并用该方法检测不同细胞中ICAM-1的基因水平。方法根据GenBank中登录的ICAM-1基因序列设计并合成引物,建立ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,验证方法的适用性、线性范围、灵敏性、特异性及精密性。同时采用该方法对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)、人星形神经胶质瘤细胞(u251)、人原发性肝癌细胞(PLC/PRF/5)、人胚肾细胞(HEK293)及人脐静脉内皮细胞(HuvEc)进行检测。结果该方法的溶解曲线峰单一,无非特异性产物和引物二聚体;标准质粒在6.74×104~6.74×109 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好的线性关系,线性方程为y=-3.576 log x+42.982,R2=1.000;建立方法的灵敏性是普通PCR法的10倍;该方法检测不同物种细胞无交叉反应,仅能检出人源细胞ICAM-1;批内和批间CV均<1%。不同组织来源的细胞内ICAM-1基因含量不同,其中MRC-5细胞含量最高。结论成功建立了ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,且具有良好的特异性、灵敏性及精密性,可用于ICAM-1基因的定量检测。 张海霞 李生军 陈琳 陈琳 李倩 李倩 李向茸 李向茸 马忠仁 次仁扎西 冯若飞关键词:细胞间黏附分子-1 SYBR 高密度悬浮培养的BHK21细胞克隆株 本发明提供高密度悬浮培养的BHK21细胞克隆株,所述高密度悬浮培养的BHK21细胞克隆株保藏于中国典型培养物保藏中心,分类命名:叙利亚仓鼠肾细胞BHK21‑XF‑C02,保藏编号为:C2016148。本发明通过单细胞克隆... 乔自林 李明生 冯若飞 佛生福 令世鑫 马忠仁文献传递 跨膜蛋白43的研究进展 被引量:4 2019年 跨膜蛋白43(TMEM43)是一种在物种间高度保守、定位在内核膜及内质网中且有一个大的亲水域的核膜蛋白。临床研究及流行病学调查发现,TMEM43基因的突变可导致心律失常性右心室心肌病(ARVC)和金刚砂-德雷福斯肌营养不良(EDMD)等疾病。目前,对此病的诊断及治疗尚存在一定的困难。此外,TMEM43与其他跨膜蛋白亦存在相互作用,但其功能和相关致病机制知之甚少。就TMEM43相关疾病及其与相关蛋白之间的作用进行综述,为后期研究TMEM43的功能及疾病治疗方面提供参考和帮助。 赵克学 梁浩勤 李琼毅 冯若飞关键词:致心律失常性右心室心肌病