- 秀丽线虫野生株系N2缺氧的荧光定量蛋白质组学研究
- 2013年
- 目的研究秀丽线虫野生株系N2缺氧时的差异蛋白质,为进行线虫在缺氧环境下的应答机制研究奠定基础。方法同步化培养N2株系的线虫,培养至L4期时物理缺氧10 h(0.2%O2)后,提取总蛋白,采用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)分离和串联质谱分析,搜索线虫数据库,鉴定蛋白种类并进行分析。并采用突变株系(prdx-2,prdx-3)进行了4、6、8、10、12 h的缺氧实验研究。结果质谱成功鉴定了其中的5个与对照有显著差异的蛋白质(ratio>2.0,P<0.05),包括2个上调(PRDX-2、PRDX-3)和3个(RPL-7、H28O16.1、VHA-12)下调的蛋白。突变株系的缺氧存活率实验进一步验证了蛋白质组学的结果,也显示了PRDX-2和PRDX-3在抗缺氧中起重要作用。结论蛋白质组学的方法为线虫缺氧的研究提供了有参考价值的数据,缺氧10 h后,线虫中变化的蛋白质与能量、翻译和抗氧化有关,为进一步研究缺氧时的应答机制奠定了基础。
- 李华玲孔玲秦艳刘丹丹夏靖胡竹林陈文飞
- 关键词：秀丽线虫
- Tat-PTD介导的金属硫蛋白高产量表达及其高效表达重组菌株重金属抗逆性研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨Tat-PTDs对金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达的促进作用及其体外高效表达重组菌株的重金属抗逆性。方法:采用聚合酶链式反应从小鼠肝脏组织中克隆了金属硫蛋白MT-1和MT-2基因的编码序列,进而分别亚克隆入原核表达质粒pET28b-Tat和pET28b,测序验证后转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞,采用1mmol/L诱导剂IPTG诱导表达,并于诱导表达0h,2h,4h,6h时收集菌体,超声破碎后制备总蛋白、上清蛋白和沉淀蛋白并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。针对上述诱导表达4hrs的菌液适量稀释后转接入新的LB培养基,采用分光光度仪测定高效表达金属硫蛋白菌株对5mmol/L铜的抗逆性。结果:Tat-PTDs可明显增加金属硫蛋白的表达产量,且Tat融合蛋白主要为可溶性表达;Western blot及其柱状图分析结果显示,Tat融合蛋白的表达水平约为非Tat融合蛋白的5～8倍;高效表达Tat-MT-1和Tat-MT-2蛋白的菌株具有明显的抗重金属铜的活性,与非Tat标签融合蛋白和空载对照组相比存在显著性差异(P<0.01)。结论:实验数据表明,Tat-PTDs蛋白转导技术可以促进小鼠金属硫蛋白基因在原核生物中的可溶性高表达,Tat融合蛋白的表达水平比非Tat融合蛋白的表达有显著提高,其克隆菌株对重金属铜活性的抗性也有明显提高。
- 李华玲王凯秦艳刘丹丹陈文飞
- 关键词：可溶性
- 秀丽线虫的蛋白质组学研究
- 2012年
- 作为模式生物,秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)已经成功地用于许多生命过程的研究,尤其被广泛应用于现代发育生物学、行为与神经生物学、基因组学、正向和反向的遗传学研究中,近年来,秀丽线虫更成为了一个进行蛋白质组学研究的优良体系,诠释了基于基因组学和RNA干涉研究中的基因功能。许多比较蛋白质组学表达谱的建立可以更好地理解线虫在不同发育阶段、不同温度下基因的表达,在与人类神经疾病相关的疾病研究中,线虫对帕金森疾病、阿尔茨海默症、衰老与寿命、胰岛素通路都有所揭示。另外,线虫的亚蛋白质组学和翻译后修饰如糖基化和磷酸化也已经鉴定,其数据库也在不断地完善。本文介绍了秀丽线虫的蛋白质表达谱建立的历史,尤其是神经科学研究中的应用及翻译后修饰表达谱的建立等方面的研究现状,因此,结合其它分子生物学和基因工程技术,线虫蛋白质组学研究已成为提供一个新的全面的系统分析基因功能的重要工具,提示线虫是"蠕虫蛋白质组学"的一个丰富宝藏。
- 李华玲陈文飞高玉晓王凯秦燕刘丹丹张成岗
- 关键词：秀丽线虫蛋白质组学翻译后修饰
